周文濤，顧仁艷，王家平，張秋梅，劉 輝，陳 蓉，何佳穎

(1. 新疆醫(yī)科大學第五附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830011；2. 新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830011；3. 新疆醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院，新疆 烏魯木齊 830011)

維藥野西瓜對佐劑性關節(jié)炎小鼠治療效果及機制研究

周文濤1，顧仁艷1，王家平1，張秋梅1，劉 輝2，陳 蓉3，何佳穎3

(1. 新疆醫(yī)科大學第五附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830011；2. 新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830011；3. 新疆醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院，新疆 烏魯木齊 830011)

目的 觀察維藥野西瓜治療佐劑性關節(jié)炎(AA)小鼠的效果及機制。方法 將40只雄性昆明鼠隨機分為空白對照組、模型組、雷公藤組(雷公藤多甙片0.01mg/kg)及野西瓜組。除空白對照組外，其余均采用完全弗氏佐劑制作AA小鼠模型，空白對照組及模型組灌胃生理鹽水，雷公藤組和野西瓜組分別灌胃相應藥物，連續(xù)灌胃25d后，觀察各組小鼠足腫脹、足踝關節(jié)組織病理變化及血清中白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)表達情況。結果 藥物干預25d后，與模型組比較，雷公藤組及野西瓜組小鼠足趾腫脹程度均明顯改善(P均<0.05)，血清IL-6、TNF-α水平均明顯降低(P均<0.05)，組間比較差異無統(tǒng)計學意義。結論 維藥野西瓜對AA關節(jié)炎小鼠具有良好的抗炎作用，與其降低血清中IL-6及TNF-α的水平有關。

類風濕關節(jié)炎；維藥野西瓜；白細胞介素-6；腫瘤壞死因子-α

新疆特色維藥野西瓜(Capparis Spinosal)又名刺山柑、老鼠瓜，為白花菜科山柑屬植物，源于亞洲中西部干旱地區(qū)，廣泛分布在我國新疆及西藏境內，在西亞作為一種傳統(tǒng)草藥用于抗炎、降壓、降脂、降糖、化痰、驅蟲等[1]，在新疆省內作為維吾爾醫(yī)藥有著廣泛應用，鮮果或干果搗碎后外敷常用于治療風濕關節(jié)炎、痛風等。類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA) 是一種由于自身免疫障礙引起免疫系統(tǒng)攻擊關節(jié)滑膜組織的長期慢性炎癥[2]，病情遷延失治易引起關節(jié)滑膜嚴重破壞致畸，嚴重影響日常生活。佐劑性關節(jié)炎(AA)作為一種免疫炎癥模型，與人類RA的關節(jié)病理改變較為相似。本研究觀察了維藥野西瓜對AA小鼠足踝腫脹程度、骨關節(jié)組織病理形態(tài)學及血清中白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平的影響，探討維藥野西瓜對RA的抗炎機制。

1 實驗資料

1.1實驗動物 清潔級健康雄性昆明種小鼠40只，購于新疆醫(yī)科大學實驗動物中心，體質量28～33 g，正常飼養(yǎng)。

1.2實驗材料及試劑 雷公藤多甙片(上海復旦復華藥業(yè)有限公司，國藥準字Z31020415，批號：140701)，新疆維藥野西瓜(新疆奇康哈博維藥有限公司)；散裝白酒。完全弗氏佐劑(Freund’s Complete Adjuvent，F(xiàn)CA)(美國Sigma公司)；小鼠IL-6、TNF-α的ELISA定量檢測試劑盒(美國ADL公司)。

1.3實驗儀器 注射器(1mL)，TL-16G型高速離心機(上海實驗儀器廠生產)，酶標儀(Labsystems Dragon wellscanMK3型)，游標卡尺(上海精密儀器廠生產)。

1.4模型的制備、分組及給藥 將40只雄性昆明鼠隨機分為空白對照組、模型組、雷公藤組(雷公藤多甙片0.01 mg/kg)及野西瓜組?？瞻讓φ战M小鼠右后足趾皮內注射生理鹽水；其余組依照參考文獻[3]，將購買的完全弗氏佐劑，于小鼠左后足跖肉墊皮內注射0.04 mL、背部0.02 mL致炎。造模14 d后參照關節(jié)炎指數(shù)評分標準[4]對模型復制效果進行評估，評分達6分以上的小鼠用于實驗?？瞻讓φ战M及模型組每日以生理鹽水灌胃；雷公藤組以雷公藤多甙片0.01 mg/kg進行灌胃；野西瓜組將新鮮野西瓜搗碎混合白酒后用紗布膠帶外敷固定于左后足踝，次日更換外敷物。各組均連續(xù)灌胃25 d。

1.5指標的檢測 灌胃25 d后，各組小鼠眼球取血，2 000 r/min離心10 min分離得血清，采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測血清中IL-6及TNF-α的含量；取小鼠的左足踝關節(jié)滑膜組織用10%甲醛溶液固定，鏡下觀察滑膜組織病理切片(HE染色)，觀察小鼠踝關節(jié)腫脹程度。

2 結 果

2.1各組小鼠踝關節(jié)腫脹程度比較 造模后第14天，與空白對照組比較，各造模組小鼠的足踝關節(jié)均明顯腫脹，提示造模成功。藥物干預25 d后，與模型組比較，雷公藤組及野西瓜組小鼠足趾腫脹程度均明顯改善(P均<0.05)，血清IL-6、TNF-α水平均明顯降低(P均<0.05)，組間比較差異無統(tǒng)計學意義。見表1。

表1 各組小鼠關節(jié)腫脹程度比較

注：①與空白對照組比較，P<0.01；②與模型組比較，P<0.05；③與模型組比較，P<0.01。

2.2各組小鼠足踝關節(jié)組織病理切片表現(xiàn) 鏡下可見正常組小鼠關節(jié)組織無淋巴細胞浸潤，無毛細血管增生，見圖1；模型組小鼠關節(jié)組織中淋巴細胞浸潤，滑膜細胞增殖，毛細血管增生，軟骨組織破壞嚴重，見圖2；雷公藤組與野西瓜組組織中淋巴細胞浸潤明顯改善，軟骨組織破壞減輕，見圖3和圖4。

圖1 正常對照組踝關節(jié)組織鏡下表現(xiàn)(10×10)

2.3各組血清中IL-6及TNF-α水平比較 與模型組相比，雷公藤組及野西瓜組小鼠外周血中IL-6及TNF-α水平均明顯下降(P均<0.05)；組間比較采用多組間方差分析，雷公藤組與野西瓜組間比較差異無統(tǒng)計學意義。見表2。

3 討 論

RA是一種以關節(jié)滑膜慢性炎癥為主，最終致關節(jié)破壞的難治性疾病，發(fā)病率高(0.3 %～1%)，病情易反復，致殘率高，可累及全身多個系統(tǒng)，是主要的致殘性疾病之一，嚴重危害人類健康[6]。由于病因至今不明，治療上缺乏理想藥物與治療方案。維藥野西瓜是白菜花科植物刺山柑的根皮、葉和果，主要產于我國新疆天山南北，性苦溫，民間用于治療急慢性關節(jié)炎、布氏桿菌病。該藥具有祛風除濕、消腫止痛、活血化瘀等功效，也有舒張血管和止血的作用。

圖2 模型組踝關節(jié)組織鏡下表現(xiàn)(10×10)

圖3 雷公藤組踝關節(jié)組織鏡下表現(xiàn)(10×10)

圖4 野西瓜組踝關節(jié)組織鏡下表現(xiàn)(10×10)

表2 各組血清IL-6及TNF-α水平比較

注：①與空白對照組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05。

小鼠AA模型是建立在T細胞依賴性、種屬特異性免疫學機制之上，其關節(jié)組織病理學及血中變化與人類RA的關節(jié)病理改變較為相似，是研究治療RA藥物的常規(guī)模型[9]。本研究結果顯示，經雷公藤總甙、維藥野西瓜干預處理后，小鼠的足踝腫脹程度有明顯改善。從足踝關節(jié)組織切片中，可觀察到模型組單核細胞浸潤、滑膜組織增生、關節(jié)軟骨及骨組織破壞嚴重；而雷公藤總甙、維藥野西瓜干預治療組中，淋巴細胞浸潤減少，軟骨組織破壞減輕，顯示出明顯改善炎癥的作用。

RA是免疫介導的慢性炎癥性疾病，其病理上表現(xiàn)為滑膜血管增殖及血管翳形成，致關節(jié)軟骨和骨質破壞。IL-6是一種具有重要生物學活性的細胞因子，它由多種淋巴及非淋巴類免疫細胞(T細胞、B細胞、單核巨噬細胞、成纖維細胞等)產生，RA病變程度與血清中IL-6水平成正比，IL-6是RA病程進展的一個重要細胞炎性因子。TNF-α是一種促炎性細胞因子，主要影響細胞增殖和細胞凋亡的調節(jié)，在RA炎癥局部細胞因子相互作用的網(wǎng)絡中，TNF-α起著很關鍵的作用[7]。關節(jié)病變組織中檢測的多是TNF-α，在RA患者的血清、關節(jié)滑膜和關節(jié)液中，TNF-α均有很高的表達。動物實驗證明，中和TNF-α能降低關節(jié)炎的嚴重程度[8]，因此TNF-α水平檢測可作為判斷RA臨床疾病活動指標之一。本研究結果顯示，AA模型小鼠血清中IL-6及TNF-α明顯增高，說明兩者是RA炎癥發(fā)生和關節(jié)損壞中關鍵細胞因子。經過維藥野西瓜治療后，AA小鼠血清IL-6及TNF-α水平明顯降低，提示維藥野西瓜對RA的治療機制可能與降低血清中IL-6及TNF-α水平來改善RA病程中滑膜的增生、炎癥細胞的浸潤以及軟骨和骨破壞有關，也為進一步開發(fā)和研究新疆特色維吾爾藥材對RA的治療應用提供理論基礎。

[1] 季宇彬,郭守東,汲晨鋒,等. 野西瓜的化學和藥理研究[J]. 哈爾濱商業(yè)大學學報：自然科版,2006,22(1):5

[2] Shammas RM,Ranganath VK，Paulus HE. Remission in rheumatoid arthritis[J]. Curr Rheumatol Rep,2010,12(5):355-362

[3] William RA,Dayer JM. Cytokines and cytokine inhibitors or antagonists in theumatoid arthritis[J]. Arthritis Rheum,1990,33(3)：305-315

[4] 白洪宇. 大鼠類風濕性關節(jié)炎實驗模型的建立與評價[D]. 哈爾濱:東北農業(yè)大學,2009

[5] 柴鐵玲. 類風濕性關節(jié)炎動物模型在中醫(yī)藥研究中的進展及思考[J]. 環(huán)球中醫(yī)藥,2011,4(3):215-217

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Research on anti-inflammatory mechanism on the adjuvant arthritis mouse model by Uighur medicine Capparis Spinosa L

ZHOU Wentao1, GU Renyan1, WANG Jiaping1, ZHANG Qiumei1,LIU Hui2, CHEN Rong3，HE Jiaying3

(1. The Fifth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang, China; 2. The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang, China; 3. Basic Medical College of Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang, China)

Objective It is to observe the anti-inflamatory effect of Uighur Medicine Capparis Spinosa L. on adjuvant arthritis(AA) in mice and to explore its mechanism. Methods 40 male Kunming mice were randomly divided into blank control group, model group, Tripterygium wilfordii group ( Tripterygium wilfordii polyglycoside 0.01 mg/kg) and Capparis Spinosa L.group. The mice in every group except blank control group were made into AA models by complete Freund’s adjuvant. Blank control group and model group were given normal saline by intragastric administration, and Tripterygium wilfordii group and Capparis Spinosa L.group were given respective drugs by intragastric administration. The changes of ankle swelling, pathology of anklebone and the level of IL-6 and TNF-α in serum in the mice were observed after 25 days’ intragastric administration. Results After 25 days' intervention with the drugs, compared with model group, ankle swelling, pathology of anklebone of the mice in Tripterygium wilfordii group and Capparis Spinosa L.group were all improved (P<0.05), there was no significant difference between the two groups. Conclusion Capparis Spinosa L. has good antiarthritic effects on AA in the mice, the mechanism may be associated with its significantly decreasing effect on the levels of IL-6 and TNF-α in serum.

rheumatoid arthritis; Uighur medicine Capparis Spinosa L.; IL-6; TNF-α

周文濤，女，副主任醫(yī)師，講師，主要從事中醫(yī)治療及維藥免疫學機制研究。

新疆醫(yī)科大學科研創(chuàng)新基金項目(XJC2012130)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.07.003

R-332

A

1008-8849(2015)07-0691-03

2014-09-30