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        續(xù)骨沖和膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

        2015-03-12 08:56:56吳鳳榮曾聰彥胡玉良盧建業(yè)廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院廣東中山5840廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院廣東中山58400
        中國藥房 2015年9期
        關(guān)鍵詞:黃柏黃素藥典

        吳鳳榮,曾聰彥,胡玉良,盧建業(yè)(.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院,廣東中山 5840;.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院,廣東中山 58400)

        續(xù)骨沖和膏由大黃、赤芍、當(dāng)歸、續(xù)斷、黃柏、獨活等20味中藥制備而成,是廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院的常用經(jīng)驗方,具有活血通絡(luò)、消腫止痛、療傷續(xù)骨的功效,主要用于治療跌打瘀傷。由于該制劑尚未建立完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),為了控制其產(chǎn)品質(zhì)量,保證其安全性和有效性,本研究采用薄層色譜(TLC)法對該制劑中的大黃、黃柏、赤芍、當(dāng)歸、骨碎補、獨活、荊芥、木香等多味藥進(jìn)行了定性鑒別,并采用高效液相色譜(HPLC)法對制劑中的君藥大黃所含的大黃素和大黃酚進(jìn)行了含量測定。

        1 材料

        1.1 儀器

        1100型HPLC儀(美國安捷倫公司);KQ3200E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);BS224S型電子天平(德國賽多利斯公司);電熱恒溫水浴鍋(上海衡平儀器儀表廠);TC-15型套式恒溫器(浙江新華醫(yī)療器械廠)。

        1.2 藥品與試劑

        續(xù)骨沖和膏(批號:20131109、20131202、20140108)由廣東省中山市中醫(yī)院制劑室提供;大黃素(批號:110756-200110)、大黃酚(批號:110796-201118)、芍藥苷(批號:110736-201136)對照品及黃柏(批號:121510-201105)、大黃(批號:121249-201003)、赤芍(批號:121093-200402)、當(dāng)歸(批號:120927-201315)、骨碎補(批號:121169-200503)、獨活(批號:120940-201111)、木香(批號:120921-201008)、荊芥(批號:120911-201110)對照藥材均購自中國食品藥品檢定研究院;硅膠G(青島海洋化工有限公司分廠,批號:20120208);其余試劑均為市售分析純。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 TLC鑒別

        2.1.1 大黃[1]取本品1.5 g,用玻璃棒分散,加甲醇20 ml,浸泡1 h,濾過,取濾液5 ml,蒸干,殘渣加水10 ml使溶解,加鹽酸1 ml,水浴加熱回流30 min,立即冷卻,用乙醚分2次振搖提取,每次20 ml,合并乙醚液,蒸干,殘渣加三氯甲烷1 ml使溶解,作為供試品溶液。取大黃對照藥材0.1 g,加甲醇20 ml,按供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液。取缺大黃的其余藥味適量,按處方工藝制成缺大黃的陰性對照品,取約1.5 g,按上述供試品溶液的制備方法制成缺大黃的陰性對照溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗,吸取上述3種溶液各5 μl分別點于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(30~60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1,V/V/V)的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,分別置于日光和紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的橙黃色熒光斑點;置氨蒸氣中熏后,斑點變?yōu)榧t色。大黃的TLC圖見圖1。

        2.1.2 黃柏[2-3]取本品3 g,用玻璃棒分散,加1%醋酸甲醇溶液20 ml,超聲(功率:150 W,頻率:40 kHz)處理20 min,濾過,濾液濃縮至1 ml,作為供試品溶液。取黃柏對照藥材0.1 g,加1%醋酸甲醇20 ml,按供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液。取缺黃柏的其余藥味制成的陰性對照品3 g,按上述供試品溶液的制備方法制成缺黃柏的陰性對照溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗,吸取供試品溶液、陰性對照溶液各5 μl及對照藥材溶液1 μl分別點于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1,V/V/V/V)為展開劑,展開,取出,晾干,分別置日光和紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的黃色斑點和熒光斑點。黃柏的TLC圖見圖2。

        圖1 大黃的TLC圖A.熏氨蒸氣前;B.熏氨蒸氣后;C.紫外光燈下;1~3.供試品;4.大黃對照藥材;5缺大黃的陰性樣品Fig 1 TLC of Rhei RadixA.before fumed with ammonia vapor;B.after fumed with ammonia vapor;C.under UV lamp;1-3.test samples;4.Rhei Radix reference substance;5.negative control without Rhei Radix

        圖2 黃柏的TLC圖A.日光下;B.紫外光燈下;1~3.供試品;4.黃柏對照藥材;5.缺黃柏的陰性樣品Fig 2 TLC ofP.chineseA.under sunlight;B.under UV lamp;1-3.test samples;4.Phellodendri Chinensis reference substance;5.negative control withoutP.chinese

        2.1.3 赤芍[4]取本品22 g,用玻璃棒分散,加乙醇50 ml,振搖5 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加乙醇2 ml使溶解,作為供試品溶液。取赤芍對照藥材0.5 g,加乙醇10 ml,按上述供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液。取缺赤芍的其余藥味制成的陰性對照品22 g,按上述供試品溶液的制備方法制成缺赤芍的陰性對照溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗,吸取上述3種溶液各5 μl分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2,V/V/V/V)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸溶液,加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的藍(lán)紫色熒光斑點。赤芍的TLC圖見圖3。

        2.1.4 當(dāng)歸[5]取本品22 g,加乙醚50 ml,超聲(功率:150 W,頻率:40 kHz)處理10 min,濾液蒸干,殘渣加乙醇1 ml使溶解,作為供試品溶液。取當(dāng)歸對照藥材0.5 g,加乙醚20 ml,按上述供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液。取缺當(dāng)歸的其余藥味制成的陰性對照品22 g,按上述供試品溶液的制備方法制成缺當(dāng)歸的陰性對照溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗,吸取上述3種溶液各10 μl分別點于同一硅膠G薄層板上,以正己烷-乙酸乙酯(4∶1,V/V)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點。當(dāng)歸的TLC圖見圖4。

        圖3 赤芍的TLC圖1~3.供試品;4.赤芍對照藥材;5.芍藥苷對照品;6.缺赤芍的陰性樣品Fig 3 TLC of Paeoniae Radix Rubra1-3.test samples;4.Paeoniae Radix Rubra reference substance;5.peoniflorin control;6.negative control without Paeoniae Radix Rubra

        圖4 當(dāng)歸的TLC圖1~3.供試品;4.當(dāng)歸對照藥材;5.缺當(dāng)歸的陰性對照品Fig 4 TLC ofA.sinensis1-3.test samples;4.Angelicae Sinensis Radix reference substance;5.negative control withoutA.sinensis

        2.1.5 木香[6]取本品20 g,加甲醇40 ml,用玻璃棒分散,超聲(功率:150 W,頻率:40 kHz)處理30 min,濾過,取濾液濃縮至2 ml,作為供試品溶液。取木香對照藥材0.5 g,加甲醇10 ml,按供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液。取缺木香的其余藥味制成的陰性對照品0.5 g,按上述供試品溶液的制備方法制成缺木香的陰性對照溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗,吸取上述3種溶液各5 μl分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-環(huán)己烷-甲醇(5∶3∶0.1,V/V/V)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以1%香草醛硫酸溶液,加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點。木香的TLC圖見圖5。

        2.2 大黃素和大黃酚的含量測定[7-8]

        2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱:Boston Green ODS C18(250 mm × 4.6 mm,5 μm);流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15,V/V);柱溫:25 ℃;檢測波長:254 nm。理論板數(shù)按大黃素、大黃酚峰計應(yīng)不低于3 000。

        2.2.2 供試品溶液的制備[1]精密稱取本品約3 g,置于100 ml錐形瓶中,精密加入甲醇25 ml,稱定質(zhì)量,加熱回流提取30 min,放冷,再次精密稱定,加甲醇補足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過。精密量取續(xù)濾液10 ml,置圓底燒瓶中,揮干溶劑,加水15 ml使溶解,再加鹽酸1 ml,超聲(功率:150 W,頻率:40 kHz)處理5 min,加熱回流提取30 min,立即冷卻,置于分液漏斗中。用少量乙醚洗滌容器,洗滌液并入分液漏斗中,用乙醚分3次振搖提取,每次15 ml,合并乙醚液,蒸干。殘渣加甲醇使溶解,轉(zhuǎn)移至25 ml量瓶中,加甲醇定容,搖勻,經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。

        圖5 木香的TLC圖1~3.供試品;4.木香對照藥材;5.缺木香的陰性對照品Fig 5 TLC ofA.lappa1-3.test samples;4.Aucklandiae Radix reference substance;5.negative control withoutA.lappa

        2.2.3 混合對照品溶液的制備 精密稱取大黃素、大黃酚對照品各適量,加甲醇制成每1 ml含48.25 μg大黃素和109 μg大黃酚的混合對照品溶液。

        2.2.4 陰性樣品溶液的制備 按處方比例稱取藥材,按續(xù)骨沖和膏的處方工藝制成缺大黃的陰性樣品,再按“2.2.2”項下方法制成缺大黃的陰性樣品溶液。

        2.2.5 專屬性試驗 分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各20 μl,按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果,供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)保留時間處,有相同的色譜峰;陰性對照無干擾。色譜見圖6。

        圖6 高效液相色譜圖A.供試品;B.混合對照品;C.陰性對照;a.大黃素;b.大黃酚Fig 6 HPLC chromatogramsA.test sample;B.mixed control;C.negative control;a.emodin;b.chrysophanol

        2.2.6 線性關(guān)系考察 精密量取“2.2.3”項下的混合對照品溶液0.5、1、2、4、8 ml,分別用甲醇稀釋,得到系列濃度的混合對照品溶液。分別精密吸取系列對照品溶液各20 μl,按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄峰面積。以質(zhì)量濃度(x,μg)為橫坐標(biāo)、峰面積(y)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得大黃素的回歸方程為y=72.876x-30.738(r=0.999 9),大黃酚的回歸方程為y=62.82x-57.904(r=0.999 9)。結(jié)果表明,大黃素和大黃酚的質(zhì)量濃度分別在2.41~38.6、5.45~87.2 μg/ml范圍內(nèi)與各自峰面積呈良好線性關(guān)系。

        2.2.7 精密度試驗 精密稱取續(xù)骨沖和膏(批號:201301202)樣品適量,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,再按“2.2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次,記錄峰面積。結(jié)果,大黃素和大黃酚峰面積的RSD分別為1.3%、1.2%(n=5),表明儀器精密度良好。

        2.2.8 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一批供試品溶液各適量,分別于配制0、2、4、6、8 h時按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄峰面積。結(jié)果,大黃素和大黃酚峰面積的RSD分別為1.08%、1.53%(n=5),表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

        2.2.9 重復(fù)性試驗 稱取同一批次的續(xù)骨沖和膏(批號:201301202)共6份,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,再按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄峰面積,計算樣品含量。結(jié)果,大黃素和大黃酚的平均含量分別為0.15、0.33 mg/g,其峰面積的RSD分別為1.2%、1.1%(n=6),表明該方法重復(fù)性良好。

        2.2.10 加樣回收率試驗 精密稱取同一批次(批號:201301202)已知含量的續(xù)骨沖和膏1 g(約含大黃素0.15 mg、大黃酚0.33 mg),共6份,分別置于磨口錐形瓶中,精密加入混合對照品溶液適量,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,再按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄峰面積,并計算加樣回收率,結(jié)果見表1。

        表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)Tab 1 Results of recovery tests(n=6)

        2.2.11 樣品含量測定 精密稱取3批樣品各適量,分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,再按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄峰面積,并計算樣品含量,結(jié)果見表2。

        表2 樣品含量測定結(jié)果(mg/g,n=3)Tab 2 Results of content determination(mg/g,n=3)

        3 討論

        本制劑中各藥味的TLC鑒別試驗基本參照2010年版《中國藥典》(一部)中有關(guān)藥味的鑒別方法。其中,大黃、赤芍、當(dāng)歸的TLC鑒別試驗方法分別與2010年版《中國藥典》方法基本一致。黃柏原采用2010年版《中國藥典》中的鑒別條件,以三氯甲烷-甲醇-水(30∶15∶4,V/V/V)的下層溶液為展開劑[2],結(jié)果斑點不清晰;后嘗試采用文獻(xiàn)方法[3]的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1,V/V/V/V)為展開劑,結(jié)果斑點清晰,分離度好。木香原采用2010年版《中國藥典》中的鑒別條件,以環(huán)己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1,V/V/V)的上層溶液為展開劑[2],結(jié)果展開效果也很差,后參考文獻(xiàn)方法[4]改成三氯甲烷-環(huán)己烷-甲醇為展開劑,且經(jīng)不斷調(diào)整各試劑比例,直至調(diào)整到5∶3∶0.1(V/V/V)時,其展開效果好。由于本制劑是由20味中藥組成的復(fù)方制劑,成分較為復(fù)雜,TLC鑒別過程中對提取方法及展開劑的選擇有較高要求,在對處方中骨碎補、續(xù)斷、防風(fēng)、紅花、蒲黃、獨活等其余藥味的TLC鑒別研究中,存在圖譜斑點不清晰、拖尾、陰性干擾大等缺陷,需進(jìn)一步研究,暫不列入標(biāo)準(zhǔn)中。

        采用HPLC法測定大黃素和大黃酚含量時,供試品溶液的制備方法則參照了有關(guān)文獻(xiàn)方法,簡化了2010年版《中國藥典》中大黃含量測定項[2]中配制8%鹽酸溶液的步驟,縮短了回流提取時間。參照2010年版《中國藥典》(一部)中大黃含量測定項下的色譜條件,以甲醇-0.1%磷酸溶液(75∶25、80∶20、85∶15,V/V)多種比例試驗選擇流動相,當(dāng)比例為85∶15時,大黃素和大黃酚的色譜峰分離度適合、基線平直、峰形對稱、其余成分無干擾。

        綜上所述,本研究所建立的方法方便快捷,重現(xiàn)性、專屬性好,結(jié)果穩(wěn)定可靠,可作為續(xù)骨沖和膏的質(zhì)量控制方法。

        [1]劉起華,張萱,文謹(jǐn).高效液相色譜法測定四黃膏中大黃素、大黃酚的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2007,24(1):6.

        [2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:286、58、22.

        [3]王麗軍,劉麗萍.黃柏止癢洗劑中黃柏、苦參的薄層色譜鑒別[J].陜西中醫(yī),2011,32(10):1 407.

        [4]李伯群,彭騰,余蕾,等.祛毒膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥房,2007,18(12):925.

        [5]黃艷萍,黃勇紅.當(dāng)歸調(diào)經(jīng)片的薄層鑒別和阿魏酸的測定[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2010,16(6):119.

        [6]齊雙山,王青虎,包巴特爾,等.蒙成藥中木香的薄層色譜鑒別研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2001,12(5):430.

        [7]趙嘉將,劉靜,龔元香,等.沉香化氣片的薄層色譜鑒別[J].中國藥業(yè),2008,17(20):39.

        [8]曹文靜,郭姍姍,筆雪梅.HPLC測定結(jié)核丸中大黃的5種有效成分含量[J].黑龍江醫(yī)藥,2014,27(4):733.

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