寧 杰， 張榮華， 楊 麗， 周甜甜， 邵長(zhǎng)麗， 蔡 宇*， 蔡天革

（1.暨南大學(xué)藥學(xué)院，廣東廣州510632；2.遼寧大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，遼寧沈陽(yáng)110036）

補(bǔ)骨脂素固體脂質(zhì)納米粒的制備及其理化性質(zhì)考察

寧 杰1， 張榮華1， 楊 麗1， 周甜甜1， 邵長(zhǎng)麗1， 蔡 宇1*， 蔡天革2*

（1.暨南大學(xué)藥學(xué)院，廣東廣州510632；2.遼寧大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，遼寧沈陽(yáng)110036）

目的制備補(bǔ)骨脂素固體脂質(zhì)納米粒（PSO-SLN）并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行考察。方法Phenomenex C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，4μm），流動(dòng)相為乙腈-水 （55：45），檢測(cè)波長(zhǎng)245 nm，體積流量1.0 mL/min，進(jìn)樣量20μL。采用高溫乳化-低溫固化法制備PSO-SLN，利用激光粒度分析儀對(duì)粒徑、Zeta電位進(jìn)行考察，透射電子顯微鏡觀察形態(tài)，超濾法測(cè)定包封率。結(jié)果補(bǔ)骨脂素在0.5～16μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好 （r2=0.999 8）。日內(nèi)、日間精密度試驗(yàn)的RSD均小于2%，平均回收率98.87%。所制備的PSO-SLN結(jié)構(gòu)圓整，平均粒徑（108.7±0.47）nm，Zeta電位（-18.8±0.27）mv。超濾管平均回收率為102.5%，平均包封率為（82.6±0.1）%。結(jié)論高溫乳化-低溫固化法可用于對(duì)PSO-SLN的制備。

補(bǔ)骨脂素；固體脂質(zhì)納米粒；高溫乳化-低溫固化法；包封率；超濾法

補(bǔ)骨脂素（psoralen，PSO）是一種天然香豆素類(lèi)化合物，具有抗腫瘤、雌激素樣以及多藥耐藥等多種藥理活性［1-3］。補(bǔ)骨脂素水溶性較差［4］，直接口服生物利用度低，將水難溶性藥物用固體脂質(zhì)納米粒進(jìn)行包裹可以提高生物利用度［5-6］。固體脂質(zhì)納米粒 （SLN）是一種新型的給藥系統(tǒng)［7-8］，它以生物相容性好的脂質(zhì)材料作為載體，將藥物包裹于脂質(zhì)中可以有效防止藥物的泄露，提高被包裹藥物的穩(wěn)定性。本研究采用高溫乳化-低溫固化法制備補(bǔ)骨脂素固體脂質(zhì)納米粒 （PSO-SLN）并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行考察。

1 儀器與材料

Agilent1200高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；UV-2550紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) （島津公司）；CP124C萬(wàn)分之一分析電子天平（美國(guó)奧豪斯）；TECNAI10透射電子顯微鏡（荷蘭飛利浦公司）；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（河南鞏義予華儀器有限公司）；激光粒度分析儀 （Zetasizer Nano ZS90，英國(guó)Malvern公司）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；30KD超濾離心管（Millipore）。

補(bǔ)骨脂素對(duì)照品 （批號(hào)110739-200613，純度99%，廣州市藥品檢驗(yàn)所）；補(bǔ)骨脂素原料藥 （批號(hào) BGZS20140216，純度98%，南京春秋生物工程有限公司）；單硬脂酸甘油酯 （天津市博迪化工有限公司）；注射級(jí)大豆卵磷脂（上海太偉藥業(yè)）；Labrasol辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯（法國(guó)Gattefosse）；藥用級(jí)吐溫80（阿拉丁試劑有限公司）；水為純凈水；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 補(bǔ)骨脂素固體脂質(zhì)納米粒的制備 采用高溫乳化-低溫固化法制備PSO-SLN：稱(chēng)取2.5 mg補(bǔ)骨脂素、120 mg單硬脂酸甘油酯、180 mg大豆卵磷脂、30 mg Labrasol溶于適量無(wú)水乙醇中，置于75℃恒溫水浴中加熱溶解形成油相；同時(shí)將吐溫80溶解于純水中形成2.0%的吐溫80水溶液作為水相。在75℃條件下，用注射器將油相緩緩注入水相中，在磁力攪拌器1 000 r/min的攪拌條件下攪拌乳化濃縮，當(dāng)體積濃縮至約1/3體積時(shí)，將濃縮液倒入冰水中固化，過(guò)0.45μm濾膜即得PSO-SLN，同法可制備空白SLN。

2.2 包封率測(cè)定

2.2.1 固體脂質(zhì)納米粒包封率測(cè)定 采用超濾離心法取補(bǔ)骨脂素固體脂質(zhì)納米粒溶液0.5 mL，用甲醇溶解，HPLC法測(cè)定藥物總量 （w1），另取0.5 m L置于超濾管中，12 000 r/min離心20min，HPLC法測(cè)定超濾管外管中游離藥物含量 （w2）：包封率=（w1-w2）/w1。

2.2.2 超濾管回收率試驗(yàn) 取適量補(bǔ)骨脂素與空白固體脂質(zhì)納米粒溶液配制成質(zhì)量濃度分別為20、50、100μg/mL的樣品，各取0.5 mL的上述樣品置于超濾管中，12 000 r/m in離心20 min，HPLC法測(cè)定超濾管外管中補(bǔ)骨脂素的量，測(cè)定3次，所得回收率分別為 （103.2±0.39）%、（100.0±0.97）%、（104.4±0.53）%，平均回收率102.5%，說(shuō)明超濾法可用于對(duì)補(bǔ)骨脂素-固體脂質(zhì)納米粒包封率的測(cè)定。

按照上述方法，對(duì)所制備的補(bǔ)骨脂素-固體脂質(zhì)納米粒進(jìn)行包封率測(cè)定，連續(xù)測(cè)定3次，包封率分別為82.5%、82.6%、82.7%，包封率平均值為 （82.6±0.1）%。

2.3 補(bǔ)骨脂素測(cè)定方法

2.3.1 最大吸收波長(zhǎng)的選擇 以純甲醇為空白，一定質(zhì)量濃度的補(bǔ)骨脂素甲醇溶液按照紫外分光光度法在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，補(bǔ)骨脂素在245 nm處有最大吸收。

2.3.2 色譜條件 Phenomenex C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，4μm）；流動(dòng)相 乙腈-水 （55：45）；檢測(cè)波長(zhǎng)245 nm；體積流量1.0 mL/min；柱溫25℃；進(jìn)樣量20μL。

2.3.3 專(zhuān)屬性考察 取空白固體脂質(zhì)納米粒與補(bǔ)骨脂素固體脂質(zhì)納米粒分別用甲醇溶解，上述溶液分別過(guò)0.45μm濾膜后按照 “2.3.2”項(xiàng)色譜條件分別進(jìn)樣20μL，高效液相色譜法測(cè)定，見(jiàn)圖1。

2.3.4 補(bǔ)骨脂素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱(chēng)取干燥至恒定質(zhì)量的補(bǔ)骨脂素對(duì)照品5 mg，加甲醇超聲溶解，制成50 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取上述溶液適量，加甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為0.5、1、2、4、8、16μg/mL一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照 “2.3.2”項(xiàng)色譜條件分別進(jìn)樣20μL，以峰面積對(duì)補(bǔ)骨脂素質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線y= 158.22x+15.881（r2=0.999 8）表明補(bǔ)骨脂素在0.5～16 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.5 精密度試驗(yàn) 取1、4、16μg/mL不同質(zhì)量濃度的補(bǔ)骨脂素溶液，一日內(nèi)平行測(cè)定5次，RSD分別為1.6%、0.45%、1.27%；連續(xù)測(cè)定 5 d，RSD分別為 1.7%、0.73%、0.78%，日內(nèi)、日間精密度均小于2%，精密度良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 取空白固體脂質(zhì)納米粒，加入補(bǔ)骨脂素溶液，甲醇定容，配制成質(zhì)量濃度分別為1、4、16 μg/mL的溶液，過(guò)膜，按照 “2.3.2”項(xiàng)色譜條件分別進(jìn)樣20μL測(cè)定，計(jì)算回收率分別為100.3%、98.75%、97.56%，平均回收率98.87%。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取質(zhì)量濃度為4μg/mL的補(bǔ)骨脂素溶液，分別于2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算RSD= 1.1% （n=6），穩(wěn)定性良好。

圖1 空白SLN、補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液、補(bǔ)骨脂素SLN色譜圖

2.4 Zeta電位與粒徑測(cè)定 將補(bǔ)骨脂素-固體脂質(zhì)納米粒分散液稀釋適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，用激光粒度分析儀測(cè)定Zeta電位與粒徑，所得粒徑（108.7±0.47）nm，PDI 0.224±0.015，Zeta電位（-18.8±0.27）mv，見(jiàn)圖2。

圖2 補(bǔ)骨脂素固體脂質(zhì)納米粒Zeta電位及粒徑分布圖

2.5 補(bǔ)骨脂素SLN形態(tài)觀察 取補(bǔ)骨脂素-固體脂質(zhì)納米粒分散液，將其滴在有碳膜的銅網(wǎng)上，2%磷鎢酸染色30 s，銅網(wǎng)晾干之后在透射電子顯微鏡下觀察粒子的形態(tài)，補(bǔ)骨脂素-固體脂質(zhì)納米粒結(jié)構(gòu)圓整，粒子平均粒徑在100 nm左右，見(jiàn)圖3。

3 討論

圖3 補(bǔ)骨脂素SLN透射電鏡圖

實(shí)驗(yàn)曾采用薄膜超聲法與乳化超聲法制備固體脂質(zhì)納米粒，超聲法得到的固體脂質(zhì)納米粒粒度分散較大，有可見(jiàn)性顆粒存在，采用高溫乳化-低溫固化的方法制備固體脂質(zhì)納米粒，操作簡(jiǎn)單，制備的SLN粒度分散好，所以實(shí)驗(yàn)選用高溫乳化-低溫固化法。

實(shí)驗(yàn)室常用的固體脂質(zhì)納米粒的脂質(zhì)材料有硬脂酸、單硬脂酸甘油酯以及山崳酸甘油酯［9-10］，本實(shí)驗(yàn)采用硬脂酸穩(wěn)定性極差，放置2 h以上會(huì)出現(xiàn)絮凝現(xiàn)象，山崳酸甘油酯的熔點(diǎn)較高，制備過(guò)程需要較高的溫度，并且脂質(zhì)黏度較大，得到的固體脂質(zhì)納米粒粒徑偏高。用單硬脂酸甘油酯作為載體所制得的固體脂質(zhì)納米粒粒徑、包封率均較好，所以實(shí)驗(yàn)選用單硬脂酸甘油酯作為脂質(zhì)載體。

包封率的常用測(cè)定方法有葡聚糖凝膠柱層析法、超高速離心法以及超濾法［11-12］，由于補(bǔ)骨脂素水溶性較差，在采用葡聚糖凝膠柱層析法測(cè)定補(bǔ)骨脂素-固體脂質(zhì)納米粒包封率的過(guò)程中游離藥物較難洗脫，并且操作費(fèi)時(shí)費(fèi)力。單硬脂酸甘油酯的密度約為0.97 g/cm3，密度與水相近，采用高速離心的方法不能實(shí)現(xiàn)脂質(zhì)載體與分散介質(zhì)的有效分離。本研究選用超濾離心法測(cè)定補(bǔ)骨脂素-固體脂質(zhì)納米粒包封率，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于對(duì)補(bǔ)骨脂素-固體脂質(zhì)納米粒包封率的測(cè)定。

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R944

B

1001-1528（2015）04-0887-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.045

2014-07-21

國(guó)家自然科學(xué)基金 （81273707）；教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃 （NECT-12-0677）；廣東省自然科學(xué)基金（S2013010012880）；廣東省教育廳科研項(xiàng)目 （2013KJCX0021）；廣州市對(duì)外科技合作平臺(tái)項(xiàng)目 （2014J4500005）

寧 杰（1989—），男，碩士生，從事中藥制劑學(xué)研究。Tel：18924254326，E-mail：xinxinxiaojie@163.com

*通信作者：蔡 宇 （1972—），男，博士，教授。Tel：15625156405。蔡天革，滿(mǎn)族，教授，從事中藥逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥機(jī)制研究。Tel：15322249305，E-mail：caitiange@163.com