向德標(biāo)， 胡喬銘， 譚 洋， 孟英才， 裴 剛

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410208）

［成分分析］

野鴉椿籽中三萜類化合物的分離與鑒定

向德標(biāo)， 胡喬銘， 譚 洋， 孟英才， 裴 剛*

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410208）

目的對(duì)野鴉椿籽70%乙醇提取物的二氯甲烷及正丁醇萃取部位所含三萜類成分進(jìn)行研究。方法采用硅膠、Sephadex LH-20等柱色譜方法進(jìn)行分離、純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu)。結(jié)果從二氯甲烷及正丁醇部分分離得到8個(gè)單體化合物，分別鑒定為木鱉子酸 （1）、熊果酸 （2）、3β，19α-二羥基-烏索-12-烯-28α-酸 （3）、β-谷甾醇 （4）、胡蘿卜苷 （5）、白樺脂酸 （6）、馬斯里酸 （7）、坡模酸 （8）。結(jié)論三萜化合物1、2、3、6、7、8均是首次從該植物中分離得到。

野鴉椿籽；三萜類化合物；分離；結(jié)構(gòu)鑒定

野鴉椿籽為省沽油科植物野鴉椿Euscaphis fukienensis Hsu的干燥果實(shí)，其性微溫，味苦?！端拇ㄖ兴幹尽份d，野鴉椿籽可治療月瘕、月經(jīng)不調(diào)、膀胱疝氣、痢疾泄瀉；《湖南藥物志》載，野鴉椿籽可治療寒疝腫痛、睪丸腫、脫肛、子宮脫垂；《福建中草藥》載，野鴉椿籽溫中理氣，消腫止痛，可治療胃痛、寒疝、瀉痢、脫肛、子宮下垂、睪丸腫痛。野鴉椿含有苯丙素類、黃酮類、酚酸類、生物堿類、三萜類以及芳香族化合物，具有抗氧化、抗炎、抗肝纖維化、抗細(xì)胞增殖、抗菌等藥理作用［1-7］。前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，野鴉椿籽乙醇提取物中含有大量的三萜類化合物，而且其活性十分廣泛。為進(jìn)一步研究野鴉椿中的三萜類化合物是否是該植物發(fā)揮藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，有必要對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)的分離純化。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)野鴉椿籽二氯甲烷、乙酸乙酯及正丁醇部分浸膏進(jìn)行成分分離，得到6個(gè)三萜類化合物。

1 儀器與試藥

BRUKER-500超導(dǎo)核磁共振儀（德國Bruker公司）；LDS-10臺(tái)式低速離心機(jī) （北京京立記心機(jī)有限公司）；硅膠G、硅膠GF254（青島海洋化工有限公司）；Sephadex LH-20（瑞典Pharmacia公司）。所用試劑均為分析純 （國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

野鴉椿籽采購自福建省三明市 （經(jīng)由湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥用植學(xué)教研室劉葉曼副教授鑒定），曬干，置電熱恒溫箱中（60±5）℃烘干至恒定質(zhì)量，粉碎備用。

2 提取分離

野鴉椿籽粗粉2 kg，70%乙醇回流提取3次，濃縮至3 000 mL，放冷過濾，濾液依次用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，回收溶劑，濃縮液蒸干。二氯甲烷萃取部位 （82.0 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇 （100：0→0：100）梯度洗脫，每200mL為一流份，以薄層硅膠色譜 （TLC）檢識(shí)合并相同的部分，最后得到12個(gè)流份 （D.1～D.12）。D.2用三氯甲烷溶解，經(jīng)過重結(jié)晶后得到化合物4；D.4經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇 （100：0→50：50）梯度洗脫。D.4.6中析出結(jié)晶，經(jīng)重結(jié)晶后得到化合物6；D.5經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇 （100：0→50：50）梯度洗脫，得到18個(gè)流份（D.5.1～D.5.18）。D.5.6中析出白色粉末狀固體，過濾得到化合物1；D.6經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-乙酸乙酯 （100：0-1：1）梯度洗脫，得到21個(gè)流份（D.6.1～D.6.21）。D.6.5經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，三氯甲烷-甲醇 （2：3）洗脫，并結(jié)合重結(jié)晶得到化合物2；D.10用三氯甲烷溶解，重結(jié)晶后得到化合物5。乙酸乙酯部位 （49.2 g）經(jīng)硅膠柱層析，以乙酸乙酯-甲醇 （100：0→1：1）梯度洗脫，TLC檢測(cè)合并后得到 10個(gè)流份（E.1～E.10），E.7繼續(xù)硅膠柱層析，以乙酸乙酯-甲醇 （100：0→1：1）梯度洗脫，得到11個(gè)流份。其中E.7.6中析出白色固體，經(jīng)重結(jié)晶后，得到化合物7。正丁醇萃取部位 （85.2 g）經(jīng)硅膠柱層析，以二氯甲烷-乙酸乙酯 （100：0→50：50）進(jìn)行梯度洗脫，每200 mL為一流份，濃縮后得到154個(gè)流份 （B.1～B.154）。B.54中得到白色固體粉末，用少量甲醇洗滌，并用二氯甲烷-甲醇混合溶劑溶解，重結(jié)晶后得到化合物3；B.65繼續(xù)進(jìn)行硅膠柱層析，以乙酸乙酯-甲醇 （100：0→1：2）進(jìn)行梯度洗脫，得到 20個(gè)流份 （B.65.1～B.65.20）。其中B.65.16中析出白色粉末，經(jīng)重結(jié)晶后得到化合物8。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末 （甲醇），易溶于甲醇，不溶于苯、石油醚，Liebermann-Burchard反應(yīng)呈綠色。1H-NMR（500 MHz，MeOD）δ：1.00（3H，s，H-24），1.17（3H，s，H-25），0.94（3H，s，H-26），1.31（3H，s，H-27），0.88（3H，s，H-29），0.91（3H，s，H-30），1.03（3H，s，H-23），5.23（1H，t，J=3.5 Hz，H-12），3.33（1H，dd，J=12.0，4.5 Hz，H-3），3.06（1H，tlike，J=12.0 Hz，H-2β），2.83（1H，dd，J= 4.0，13.5 Hz，H-18），2.28（1H，ddd，J=4.5，5.0，18.5 Hz，H-11），2.21（2H，m，H-2，H-9）。13C-NMR（MeOD，125 MHz）δ：213.7（C-1），180.6（C-28），143.2（C-13），122.6（C-12），78.2（C-3），54.4（C-5），52.4（C-10），46.4（C-17），45.6（C-19），43.6（C-2），41.7（C-14），41.7（C-8），41.6（C-18），39.1（C-4），39.1（C-9），33.6（C-7），32.5（C-22），32.4（C-21），32.2（C-29），30.2（C-20），27.6（C-23），27.4（C-15），24.9（C-11），24.9（C-27），22.7（C-16），22.6（C-30），17.5（C-6），17.0（C-26），15.2（C-24），14.0（C-25）。以上數(shù)據(jù)均與文獻(xiàn)［8］報(bào)道一致，故鑒定化合物1為木鱉子酸。

化合物2：白色粉末狀結(jié)晶 （甲醇），易溶于甲醇，略溶于二甲基亞砜，不溶于苯、石油醚，Liebermann-Burchard反應(yīng)呈綠色。1H-NMR（500 MHz，C5D5N）δ：1.20，1.33，1.36，1.54，1.56（各3H，s），1.26（3H，d，J=5.8 Hz，H-30），1.31（3H，d，J=6.0 Hz，H-29），5.32（1H，brs，H-12）。13C-NMR（C5D5N，125 MHz）δ：180.0（C-28），139.4（C-13），125.7（C-12），78.2（C-3），55.9（C-5），53.7（C-18），48.2（C-9），48.2（C-17），42.6（C-14），40.07（C-8），39.6（C-20），39.5（C-19），39.5（C-4），39.2（C-1），37.5（C-10），37.4（C-22），33.7（C-15），31.2（C-7），28.9（C-23），28.8（C-21），28.2（C-2），25.1（C-11），24.8（C-16），24.0（C-27），23.7（C-39），21.5（C-30），18.9（C-6），17.6（C-24），16.7（C-25），15.8（C-26）。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道一致，故鑒定化合物2為熊果酸。

化合物3：白色無定形粉末 （甲醇），易溶于甲醇，不溶于苯、石油醚。1H-NMR（500 MHz，C5D5N）δ：1.22（3H，s，H-25），1.33（3H，s，H-24），1.42（3H，s，H-26），1.54（3H，s，H-23），1.76（3H，s，H-29），2.03（3H，s，H-27）；1.43（3H，d，J=4.0 Hz，H-30）；3.76（1H，dd，J=11.0，5.0 Hz，H-3）；5.92（1H，brs，H-12），5.31（1H，s，19-OH）。13C-NMR（125 MHz，C5D5N）δ：180.8（C-28），140.0（C-13），128.1（C-12），78.3（C-3），72.8（C-19），56.0（C-5），54.7（C-18），48.4（C-17），47.9（C-9），42.5（C-20），42.2（C-14），40.5（C-8），39.5（C-4），39.1（C-1），38.6（C-22），37.5（C-10），33.7（C-7），29.4（C-15），28.9（C-23），28.2（C-2），27.2（C-29），27.0（C-21），26.5（C-16），24.8（C-27），24.1（C-11），19.0（C-6），17.3（C-26），16.9（C-30），16.6（C-24），15.7（C-25）。以上數(shù)據(jù)均與文獻(xiàn)［10］報(bào)道一致，故鑒定化合物3為3β，19α-二羥基-烏索-12-烯-28α-酸。

化合物4：透明針片狀結(jié)晶 （三氯甲烷），易溶于三氯甲烷，Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽性，與β-谷甾醇對(duì)照品在TLC中的Rf值及顯色行為一致，因此確定化合物4為β-谷甾醇。

化合物5：白色無定形粉末 （三氯甲烷-甲醇），Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽性，與胡蘿卜苷對(duì)照品在TLC中的Rf值及顯色行為一致，故確定化合物5為胡蘿卜苷。

化合物6：白色結(jié)晶粉末 （三氯甲烷），易溶于四氫呋喃、吡啶，微溶于甲醇、乙醇、丙酮，不溶于水。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：0.96，0.82，0.94，0.96，0.97（各3H，s，H-24，H-25，H-23，H-26，H-27），1.70（3H，s，H-30），2.99（1H，dd，J=4.7，10.8 Hz，H-19），3.16（1H，dd，J=5.0，1.2 Hz，H-3），4.61（1H，d，J=2.2 Hz，H-29α），4.74（1H，d，J=2.2 Hz，H-29β）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：178.6（C-28），150.6（C-20），108.7（C-29），78.7（C-3），56.1（C-17），55.7（C-5），51.2（C-9），49.1（C-18），47.0（C-19），42.3（C-14），41.5（C-8），40.7（C-1），39.6（C-4），39.4（C-13），37.4（C-22），36.7（C-10），36.5（C-16），31.9（C-7），30.3（C-21），29.6（C-15），26.8（C-23），26.7（C-2），25.6（C-12），20.8（C-11），20.8（C-30），18.2（C-6），16.8（C-26），16.0（C-24），15.9（C-25），14.0（C-27）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［11］報(bào)道一致，確定化合物6為白樺脂酸。

化合物7：淡黃色無定形粉末 （甲醇），易溶于甲醇、吡啶，Liebermann-Burchard反應(yīng)呈綠色，1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：5.26（1H，t，J=5.0 Hz，H-12），3.64（1H，dt，J=5.0，10.0 Hz，H-2），2.91（1H，d，J=10.0 Hz，H-3α），2.83（1H，d，J=5.0 Hz，H-18），（各3H，s）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：180.0（C-28），143.9（C-13），122.0（C-12），83.0（C-3），68.1（C-2），55.3（C-5），47.6（C-9），46.7（C-19），46.2（C-1），45.8（C-17），41.5（C-14），41.3（C-18），39.2（C-8），39.1（C-4），37.8（C-10），33.5（C-21），32.5（C-7），32.4（C-22），32.1（C-29），30.2（C-20），27.9（C-15），27.4（C-23），25.0（C-27），23.2（C-11），22.6（C-16），22.6（C-30），18.1（C-6），16.3（C-26），16.0（C-24），15.7（C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［12］報(bào)道一致，確定化合物7為馬斯里酸。

化合物8：白色無定形粉末 （三氯甲烷-甲醇），溶于二甲基亞砜，Liebermann-Burchard反應(yīng)呈綠色。1H-NMR（500 MHz，C5D5N）δ：0.94，1.05，1.14，1.26，1.48，1.75（各 3H，s，H-25，H-23，H-26，H-24，H-29，H-27），1.15（3H，d，J=6.6 Hz，H-30），3.08（1H，s，H-18），3.45（1H，dd，J=10.8，5.4 Hz，H-3），5.64（1H，brs，J=3.2 Hz，H-12）。13C-NMR（125 MHz，C5D5N）δ：180.8（C-28），140.0（C-13），128.1（C-12），78.3（C-3），72.8（C-19），56.0（C-5），54.7（C-18），48.4（C-17），47.9（C-14），42.5（C-9），42.2（C-20），40.5（C-8），39.5（C-1），39.1（C-4），38.6（C-22），37.5（C-10），33.7（C-7），29.4（C-15），28.9（C-23），28.2（C-2），27.2（C-30），27.0（C-21），26.5（C-16），24.8（C-11），24.1（C-27），19.0（C-6），17.3（C-29），16.9（C-26），16.6（C-25），15.7（C-24）。以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道一致，確定化合物8為坡模酸。

4 討論

三萜類化合物的藥理活性十分廣泛，具有抗腫瘤、抗病毒、抗炎、調(diào)節(jié)免疫等多種作用。野鴉椿籽中所含三萜類成分的相對(duì)含有量較高，因此，對(duì)其進(jìn)行分離和藥理活性研究是很有意義的，而且對(duì)野鴉椿藥用資源的開發(fā)也具有十分積極的作用。

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Isolation and identification of triterpenoids from fruits of Euscaphis fukienensis

XIANG De-biao， HU Qiao-ming， TAN Yang， MENG Ying-cai， PEIGang*

（College of Pharmacy，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410208，China）

AIMTo investigate triterpennoids from methylene dichloride and n-butanol parts from 70%ethanol extractof the fruits of Euscaphis fukienensis.METHODSThe triterpenoidswere isolated and purified by silica gel and Sephadex LH-20 column chromatographies.Their structures were identified by spectroscopic methods and physicochemical properties.RESULTSEight compounds were isolated and identified as momordic acid（1）、ursolic acid（2）、3β，19α-dihydroxyurs-12-en-28α-oic acid（3）、β-sitosterol（4）、daucostrol（5）、betulinic acid（6）、maslinic acid（7）、pomonic acid（8）.CONCLUSIONTriterpennoids1、2、3、6、7、8are isolated from the fruits of Euscaphis fukienensis for the first time.

Euscaphis fukienensis Hsu fruits；triterpennoids；isolated；identified

R284.1

A

1001-1528（2015）04-0793-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.021

2014-07-18

湖南省 “十二五”重點(diǎn)學(xué)科開發(fā)基金項(xiàng)目資助 （2014）；湖南省高層次衛(wèi)生人才 “225”工程項(xiàng)目資助 （2013）；湖南中醫(yī)藥大學(xué) “十二五”校級(jí)重點(diǎn)學(xué)科資助 （2012）

向德標(biāo)（1989—），男，碩士，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)。Tel：15343310781，E-mail：xiangdebiao@163.com

*通信作者：裴 剛（1971—），男，教授，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)與分析。Tel：13467548983，E-mail：peigang@hotmail.com