欒嵐，韓斌，王翠芳，白陽，滕猛，宦大為，徐洪濤，王恩華

（1.沈陽醫(yī)學院附屬中心醫(yī)院病理科，沈陽 110023；2.中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院泌尿外科，沈陽 110004；3.中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科，沈陽 110001）

肺癌是全球范圍內(nèi)癌癥死亡的主要原因，其中非小細胞肺癌（non?small cell lung cancer，NSCLC）占80%～85%，盡管醫(yī)療水平已有長足的進展，可以通過手術、放化療等治療手段治療NSCLC，其患者的預后生存率依然不盡人意。生命科學的不斷發(fā)展使人們認識到新的腫瘤標記物和分子治療靶點，其中在基因調(diào)控網(wǎng)絡中起重要作用的miRNA引起了廣泛的關注。miRNA是一類小分子非編碼RNA，通過與靶基因3′UTR區(qū)結合降解或抑制其翻譯。最新的研究表明miRNA的表達異常與肺癌關系密切［1，2］，作為miRNA的重要成員，miR?218家族參與多種生物學行為［3～5］，并在多種腫瘤中低表達［6，7］，而家族成員miR?218?1?3p的相關報道非常有限。本研究通過檢測miR?218?1?3p在NSCLC組織和相應癌旁組織中的表達，探討了miR?218?1?3p表達水平與臨床病理特征的關系，為NSCLC的診斷和治療提供了新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料

42例NSCLC和癌旁肺組織（癌旁組織距癌組織達3 cm以上）來自于沈陽醫(yī)學院附屬中心醫(yī)院病理科2002?2008年搜集的病理標本，本研究所有患者術前均未接受任何放化療治療?；颊吲R床病理資料包括性別、年齡、發(fā)病部位、組織學類型、組織學分級、淋巴結轉(zhuǎn)移和病理分期均摘自患者病歷資料。根據(jù)WHO標準由兩位病理診斷醫(yī)師確定病理診斷、組織學分級、臨床病理分期、淋巴結轉(zhuǎn)移。

1.2 RT?qPCR

按照操作說明使用Am1975 RecoverAllTM（Ambion）提取組織中的總RNA。按操作說明使用RT引物探針，在ABI 7900HT（Applied Biosystems，美國）中運行檢測miR?218?1?3p（RiboBio，中國）的表達，RNU6B作為內(nèi)參對照。通過3次獨立實驗使用公式RQ=2-ΔΔCt的方法進行數(shù)據(jù)分析。

1.3 統(tǒng)計學分析

使用SPSS 16.0軟件用于統(tǒng)計學分析。實時定量結果數(shù)據(jù)經(jīng)過lg2轉(zhuǎn)換，使用平均值和標準差進行描述。配對t檢驗用于分析miR?218?1?3p在NSCLC和癌旁肺組織中的差異。Chi?square檢驗用于分析miR?218?1?3p的表達水平與臨床病理因素的關系。

2 結果

2.1 miR?218?1?3p在NSCLC中的表達

實時定量方法檢測miR?218?1?3p在42例NSCLC及配對癌旁中的表達情況，使用RNU6B作為內(nèi)參對照，42例非小細胞肺癌中miR?218?1?3p表達低于癌旁組織者有33例，配對t檢驗檢驗結果顯示非小細胞肺癌中miR?218?1?3p表達明顯低于癌旁組織（P=0.011，圖1，圖2），差異有統(tǒng)計學意義。

2.2 miR?218?1?3p與臨床病理因素的關系

為探討miR?218?1?3p在NSCLC發(fā)生發(fā)展中所起的作用，按照miR?218?1?3p在42例NSCLC組織的中位表達水平分為高、低表達2組，采用Chi?square Test分析了miR?218?1?3p表達水平與42例NSCLC患者臨床病理因素的關系。統(tǒng)計學分析顯示，miR?218?1?3p的表達水平與淋巴結轉(zhuǎn)移負相關（P=0.030，chi?square test，圖3A），差異具有統(tǒng)計學意義。值得注意的是miR?218?1?3p的表達水平雖然與病理分期無統(tǒng)計學意義，但如圖3B處于Ⅱ和Ⅲ的患者miR?218?1?3p的表達水平低于Ⅰ期患者，而其他臨床病理因素如性別、年齡、發(fā)病部位、腫瘤體積、病理分型、分化等與miR?218?1?3p的表達水平均無相關性。

圖1 miR?218?1?3p在42例NSCLC中的表達情況

圖2 miR?218?1?3p在NSCLC組織與癌旁組織中的平均表達情況

圖3 miR?218?1?3p與臨床病理特征的關系

3 討論

近年來，miRNA作為基因網(wǎng)絡中重要的一環(huán)引起了越來越多的關注，miRNA有力的調(diào)節(jié)了基因表達并引起物種間序列的保守性為遺傳的穩(wěn)定性做出了極大的貢獻。研究表明miRNA的表達具有組織特異性，并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。一些miRNA已被證明參與肺癌的發(fā)生和發(fā)展過程，并與肺癌的診斷，預后和治療等相關，其中l(wèi)et?7在肺癌中低表達并與肺癌預后及臨床病理因素相關，并通過抑制KRAS、HMGA2等癌基因發(fā)揮抑癌作用［8，9］。miR?205在鑒別肺癌亞型特別是鱗癌分型準確度很高［10］，miR?488，miR?503，miR?647被發(fā)現(xiàn)是與I期肺癌的復發(fā)有關［11］。

miR?218家族已被證明為多功能的miRNA，存在于多種組織中如肌肉、皮膚、脂肪等，其在骨骼形成，組織分化中發(fā)揮重要的作用［12～14］，在多種腫瘤中miR?218表現(xiàn)出促癌的潛質(zhì)［15，16］。miR?218在染色體上的位置是肺癌中經(jīng)常出現(xiàn)異常的片段，其中miR?218?1?3p和miR?218?1?5p位于4號染色體短臂上Slit2第15個內(nèi)含子上，miR?218?2位于5號染色體長臂上Slit3的第14個內(nèi)含子上［16］。miR?218?1?5p（miR?218）是影響NSCLC生存和無復發(fā)預后的獨立因素，miR?218低表達且樁蛋白（PXN）陽性的患者預后不良，細胞中miR?218通過靶定PXN抑制細胞增殖、侵襲，甲基化特異性PCR（MSP）結果顯示在肺癌細胞中存在啟動子甲基化，細胞經(jīng)過5?aza?dC的處理，miR?218和宿主基因Slit2恢復表達［4］。miR?218?1?3p與miR?218?1?5p共享同一個前體，在染色體上處于相同的位置，由此推斷我們檢測到的miR?218?1?3p在肺癌中的低表達很可能也是甲基化作用的結果。而經(jīng)過統(tǒng)計學分析我們發(fā)現(xiàn)在42例NSCLC中miR?218?1?3p的表達水平與淋巴結轉(zhuǎn)移相關，提示miR?218?1?3p可能在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。盡管miR?218的功能及在疾病中的作用逐漸被人所熟知，但miR?218?1?3p的相關文獻還非常有限，我們的研究首次報道了miR?218?1?3p在NSCLC中的表達情況及和臨床病理因素的關系，miR?218?1?3p如何在NSCLC中發(fā)揮作用的具體分子機制還需要進一步的深入研究，我們的報道為明確miR?218家族在肺癌中的作用提供了新的線索。

綜上，miR?218?1?3p在42例NSCLC中低表達，并與淋巴結轉(zhuǎn)移相關。鑒于miRNA通過調(diào)控靶基因調(diào)節(jié)細胞生物學行為，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，NSCLC中miR?218?1?3p的功能和調(diào)控機制仍需進一步的研究。

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