陳曉玲，武錦彪，王文娟

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州310003)

血液分析儀是檢驗(yàn)科常用的分析儀器，其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性影響臨床對(duì)疾病的診斷和治療[1]。為了解我科室日本Sysmex公司生產(chǎn)的XE-2100五分類全自動(dòng)血液分析儀的性能，我們參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)、國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)的相關(guān)文件進(jìn)行臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 XE-2100(序列號(hào) A4099)、XT-1800i(序列號(hào)18477)由日本Sysmex公司生產(chǎn)，LH780(序列號(hào) AK14004)由于美國(guó)Beckman Coulter公司生產(chǎn)；Olympus CX-31光學(xué)顯微鏡由日本Olympus公司生產(chǎn)；EDTA-K2真空抗凝管(3ml)由美國(guó)BD公司生產(chǎn)。

1.1.2 試劑 所有儀器均使用配套的試劑 (稀釋液G2433、鞘液 G2018、溶血?jiǎng)?A2014 等)、校準(zhǔn)品(批號(hào) 12910525)、 質(zhì)控品 (批號(hào) QC-22800810、QC-22820811、QC-22800812)。

1.1.3 標(biāo)本 所有標(biāo)本采自本院體檢人群和住院病人。

1.2 方法

1.2.1 儀器校準(zhǔn)及質(zhì)量控制：校準(zhǔn)按照《血液分析儀的校準(zhǔn)指南》[2]進(jìn)行。 XE-2100、XT-1800i血液分析儀使用配套校準(zhǔn)品SCS-1000進(jìn)行校準(zhǔn)，LH780血液分析儀使用配套校準(zhǔn)品S-Cal 4773進(jìn)行校準(zhǔn)。儀器每日開(kāi)機(jī)后，進(jìn)行本底和質(zhì)控檢測(cè)，在控后方可進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。

1.2.2 精密度 參照CLSI EP-15A[3]文件內(nèi)容進(jìn)行儀器精密度評(píng)價(jià)。

1.2.2.1 批內(nèi)精密度 使用配套高、中、低值3份定值質(zhì)控品，每份連續(xù)測(cè)定11次，棄去第1次，統(tǒng)計(jì)后10次CBC(全血細(xì)胞計(jì)數(shù))各項(xiàng)目的變異系數(shù)(CV)值。

1.2.2.2 批間精密度 使用配套高、中、低3份定值質(zhì)控品連續(xù)測(cè)定20d，計(jì)算CBC各項(xiàng)目的CV值。

1.2.3 攜帶污染率 參考ICSH[4]的文件程序，取高濃度血液樣本，混勻后連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為 H1、H2、H3；再取低濃度的血液樣本，混勻連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為L(zhǎng)1、L2、L3；通過(guò)下列公式進(jìn)行計(jì)算：攜帶污染率=[｜L1-L3｜/(H3-L3)]×100%。

1.2.4 穩(wěn)定性 采集10份抗凝全血標(biāo)本，5份為一組，分別貯存在室溫(25℃)和 4℃，并在 0、0.5、2、4、8、12、24、48h 測(cè)試。以百分率-時(shí)間作圖，觀察細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類結(jié)果的變化。

1.2.5 線性 參照CLSI EP-6A[5]定量分析方法的線性評(píng)價(jià)指南進(jìn)行線性評(píng)價(jià)。使用高濃度或濃縮樣本， 按100%、80%、60%、40%、20%、10%的比例進(jìn)行稀釋，每個(gè)稀釋度的標(biāo)本進(jìn)行隨機(jī)兩次重復(fù)測(cè)定，并判斷測(cè)定結(jié)果的有效性，計(jì)算均值。對(duì)測(cè)定均值與理論值作回歸分析，計(jì)算回歸方程：y=bx+a，驗(yàn)證線性范圍。要求相關(guān)系數(shù)r≥0.975，a值在1±0.05范圍內(nèi)。

1.2.6 不同進(jìn)樣模式結(jié)果可比性 使用20份正常人新鮮血標(biāo)本，分別在開(kāi)蓋模式與封閉模式下進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算該20份標(biāo)本在不同模式下相同檢測(cè)項(xiàng)目的均值，以開(kāi)蓋模式的均值為靶值，封閉模式的均值為測(cè)定值，計(jì)算偏差。偏差=[(測(cè)定值-靶值)/靶值]×100%。

1.2.7 不同儀器間全血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果可比性 參照CLSI EP9-A2[6]文件，在5個(gè)工作日內(nèi)，每日選擇8份樣本，檢測(cè)參數(shù)濃度滿足文件要求，標(biāo)本采集2小時(shí)內(nèi)，在室溫下分別在 XE-2100、XT-1800i、LH780血液分析儀按文件要求測(cè)定順序進(jìn)行測(cè)定，判斷檢測(cè)結(jié)果有效性后，進(jìn)行相關(guān)分析。

1.2.8 白細(xì)胞分類相關(guān)性 參照CLSI H20-A[7]文件內(nèi)容進(jìn)行白細(xì)胞分類相關(guān)性評(píng)價(jià)。以人工分類為參考方法，取40份患者EDTA-K2抗凝靜脈血標(biāo)本，在XE-2100進(jìn)行測(cè)定，每份標(biāo)本重復(fù)測(cè)定2次，計(jì)算其均值；同進(jìn)將該40份患者標(biāo)本每份標(biāo)本制作3張血涂片，由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的主管技師職稱以上技術(shù)人員采用雙盲法各自分類計(jì)數(shù)200個(gè)白細(xì)胞，取均值，與XE-2100分析儀進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.2.9 正確度：對(duì)具有溯源性的定值校準(zhǔn)品 (批號(hào)12910525)混勻后連續(xù)測(cè)定5次，計(jì)算其均值與該校準(zhǔn)品定值的偏移。偏移(Bias)=(均值-定值)/定值×100%。

2 結(jié)果

2.1 精密度 批內(nèi)、批間精密度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 精密度檢測(cè)結(jié)果(使用高、中、低值3個(gè)水平質(zhì)控品)

2.2 攜帶污染率 WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 分別為 0.58%、0.00%、0.00%、0.18%、0.09%均小于儀器要求1.00%、1.00%、1.00%、1.00%、1.00%。

2.3 穩(wěn)定性 全血細(xì)胞計(jì)數(shù) (CBC)與白細(xì)胞分類(DIFF)在室溫(25℃)與4℃下的穩(wěn)定性結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2。標(biāo)本貯存在4℃的條件下全血細(xì)胞計(jì)數(shù)與白細(xì)胞分類結(jié)果的較穩(wěn)定。

2.4 線性 WBC、RBC、HGB、PLT的線性結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5 不同進(jìn)樣模式結(jié)果可比性 結(jié)果見(jiàn)表3。開(kāi)蓋模式與封閉模式的20份標(biāo)本均值偏差均小于1%。

圖1 白細(xì)胞分類穩(wěn)定性比較

圖2 白細(xì)胞計(jì)數(shù)穩(wěn)定性比較

2.6 不同儀器間全血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果可比性 結(jié)果見(jiàn)表4。XE-2100與LH780、XT-1800i全血細(xì)胞計(jì)數(shù)有較好的可比性。

2.7 白細(xì)胞分類相關(guān)性 結(jié)果見(jiàn)表5。中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞的相關(guān)系數(shù)較高，單核細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞的相關(guān)系數(shù)較低。

2.8 正確度 WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 的偏倚為0.1%、-0.5%、0.2%、-0.2%、-0.3%均小于 1/4CLIA’88TEa。

表2 XE-2100線性測(cè)定結(jié)果

表3 XE-2100不同進(jìn)樣模式結(jié)果可比性

表4 XE-2100與LH780、XT-1800i血液分析儀CBC測(cè)定結(jié)果可比性(n=80)

表5 XE-2100與人工白細(xì)胞分類結(jié)果相關(guān)性(n=40)

3 討論

實(shí)驗(yàn)室在開(kāi)展某一檢測(cè)項(xiàng)目前，需提供并保留相關(guān)的方法學(xué)驗(yàn)證數(shù)據(jù)，即某一檢測(cè)項(xiàng)目在正式用來(lái)檢測(cè)患者標(biāo)本、發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告前，實(shí)驗(yàn)室需對(duì)其相關(guān)方法學(xué)性能予以驗(yàn)證，對(duì)廠商提供的評(píng)價(jià)資料中的主要性能予以確認(rèn)；新儀器在安裝后，或每次維修后，必須對(duì)儀器的性能進(jìn)行測(cè)試、評(píng)價(jià)，這對(duì)保證檢驗(yàn)質(zhì)量起著重要作用[8，9]。XE-2100是由日本Sysmex公司生產(chǎn)的五分類全自動(dòng)血液分析儀，該儀器使用流式細(xì)胞術(shù)、熒光技術(shù)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類，可為臨床提供32個(gè)檢測(cè)參數(shù)，每小時(shí)可檢測(cè)150份標(biāo)本，是一臺(tái)具有檢測(cè)精度高、速度快、功能強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)的全自動(dòng)五分類血液分析儀。臨床性能評(píng)價(jià)：WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 的高、中、低三個(gè)濃度水平的批內(nèi)、批間精密度的CV值均達(dá)到了儀器技術(shù)指標(biāo)，儀器的精密度高；各指標(biāo)的攜帶污染率均低于1%，均達(dá)到了儀器技術(shù)指標(biāo)要求；標(biāo)本貯存在4℃時(shí)全血細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類的穩(wěn)定性要好于室溫貯存[10]；WBC、RBC、HGB、PLT四個(gè)參數(shù)的線性范圍較寬，基本覆蓋了臨床樣本的濃度范圍；全血細(xì)胞計(jì)數(shù)與LH780、XT-1800i血液分析儀分析結(jié)果具有較好的可比性，各參數(shù)相關(guān)系數(shù)r=0.9800～0.9995；儀器對(duì)白細(xì)胞分類與人工鏡檢相比，中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞相關(guān)性較好，單核、嗜堿細(xì)胞相關(guān)性較差[11]，原因可能是全血中該類細(xì)胞數(shù)量少，人工計(jì)數(shù)細(xì)胞較少，血片中細(xì)胞分布不均有關(guān)；通過(guò)測(cè)定具有溯源性的定值校準(zhǔn)品計(jì)算偏移進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)，WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 的偏移結(jié)果均小于 1/4CLIA”88允許總誤差，正確度可接受。綜上所述，XE-2100五分類全自動(dòng)血液分析儀各方面的性能較好，是適合醫(yī)院檢驗(yàn)科使用的理想儀器。

[1]彭黎明，叢玉?。覈?guó)血細(xì)胞自動(dòng)分析中存在的問(wèn)題及對(duì)策[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，28(9)：885－887．

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