王 昱

（隴南師范高等?？茖W(xué)校 生化系，甘肅 成縣742500）

海洛因?qū)W名二乙酰嗎啡，是嗎啡二乙酰的衍生物 .濫用海洛因會造成生理依賴和精神依賴，依賴機(jī)理十分復(fù)雜，涉及NE能系統(tǒng)、DA能系統(tǒng)、5-HT能系統(tǒng)、膽堿能系統(tǒng)、組胺系統(tǒng)及離子通道系統(tǒng)等多個系統(tǒng)［1～3］.隨著阿片類受體激動劑美沙酮等藥物的應(yīng)用，目前早期脫毒的治療問題已基本得到解決.但海洛因造成的生理內(nèi)穩(wěn)態(tài)失調(diào)在短時間內(nèi)不能完全糾正，其產(chǎn)生的一系列戒斷癥狀是導(dǎo)致毒品復(fù)吸的重要原因 .韋世秀等［4］模擬人類成癮、治療、復(fù)吸成癮、再治療的方式，從不同階段海洛因成癮大鼠腦內(nèi)單胺遞質(zhì)變化的角度探討了成癮機(jī)制，并得出多遞質(zhì)檢測是治療或預(yù)防阿片類物質(zhì)依賴、減輕戒斷癥狀的有益工具.

貫葉連翹 （Hypericum perforatum Linn）為藤黃科金絲桃屬多年生草本植物，主要成分為貫葉金絲桃素和黃酮類化合物［5，6］.中醫(yī)認(rèn)為貫葉連翹具有清心明目、調(diào)經(jīng)活血、止血生肌、解毒消炎、利濕的功效 .現(xiàn)代研究表明貫葉連翹具有抗憂郁、抗病毒、抗菌、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤等作用［7］.近年發(fā)現(xiàn)貫葉連翹能有效清除氧自由基、能對抗氧化應(yīng)激損傷，有抗衰老、提高免疫力的功能［8～12］.為了提高海洛因脫毒成功率和臨床療效，本研究擬以海洛因依賴大鼠為模型，在美沙酮脫毒治療基礎(chǔ)上加用貫葉連翹提取物（hypericum perforatum linn extract，HPLE）輔助治療，通過觀察分析大鼠的行為及腦內(nèi)單胺遞質(zhì)的變化，研究HPLE對減輕海洛因戒斷癥狀的臨床效果.

1 材料與方法

1.1 材料

鹽酸海洛因（純度≥98%，成縣公安局提供）；去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT）、5-吲哚乙酸（5-HIAA）均購自南京建成生物工程研究所；美沙酮注射液（天津中央藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號020515），其他試劑均為國產(chǎn)分析純；貫葉連翹提取物為棕褐色粉末（含金絲桃素56%）由北大維信生物科技有限公司提供（批號：010413）；明暗箱（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所）；高速臺式冷凍離心機(jī)（TGL-16M，Beckman美國）；熒光分光光度計RF-5301PC（日本，島津公司）；SD大鼠♀，體重200～250g［蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，許可證號：SCXK（甘）2005-0007］.

1.2 方法

1.2.1 動物模型建立與給藥

健康♀性SD大鼠24只，同條件飼養(yǎng)，喂食普通固體飼料，自由飲水 .隨機(jī)分正常組、模型組、HPLE＋美沙酮處理組、美沙酮處理組，每組6只 .除正常組大鼠皮下注射生理鹽水外，其余大鼠按體重第1天劑量1mg／kg海洛因皮下注射，一天總劑量平分兩次注射（下同）.

第2天之后，每天遞增1mg／kg，直至每天劑量達(dá)到20mg／kg，持續(xù)維持該劑量10d，共計處理30 d［13］.建模后根據(jù)替代遞減原則，給予HPLE＋美沙酮處理組、美沙酮處理組大鼠進(jìn)行脫毒治療.1～10 d、11～20d、21～30d美沙酮灌胃劑量依次為10、5、2.5mg／kg，HPLE＋美沙酮處理組同時灌胃150 mg／kg HPLE［10］，正常組和模型組每天灌胃等量生理鹽水.

1.2.2 行為學(xué)觀察

給藥后每天定時觀察記錄大鼠跳躍、站立、扭體、齒顫和上瞼下垂等行為變化，并進(jìn)行避暗被動回避實(shí)驗(yàn)［8］（實(shí)驗(yàn)箱由明暗兩室組成，隔板下部有一通道供大鼠出入；暗室鐵柵與電擊儀相連，如大鼠進(jìn)入暗室則遭電擊）.訓(xùn)練時，將大鼠頭背向洞口放入明室中適應(yīng)3min，然后通電同時將隔板抽出，觀察5 min，記錄大鼠第一次鉆入暗室的時間（潛伏期）及錯誤次數(shù).24h后測試，不插隔板并通電5min，觀察大鼠第一次鉆入暗室的時間（潛伏期）及錯誤次數(shù).

1.2.3 腦單胺遞質(zhì)的測定

迅速取出全腦，吸凈血液、除去腦膜、精確稱重后，入酸性正丁醇溶液中勻漿，3 500r／min離心10 min，收取上清液 .用熒光分光光度法檢測NE、DA、5-HT、5-HIAA.1.2.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 海洛因依賴大鼠行為的變化

與正常組相比，海洛因依賴大鼠模型組跳躍、站立等行為指標(biāo)值顯著升高，潛伏期顯著縮短、錯誤次數(shù)增加（P＜0.01）.治療后，與模型對照組相比，HPLE＋美沙酮組和美沙酮組大鼠跳躍、站立、扭體等次數(shù)均明顯下降，潛伏期延長、錯誤次數(shù)明顯減少（P＜0.05，P＜0.01）.HPLE＋美沙酮組大鼠各項(xiàng)行為指標(biāo)值已接近于正常組值（P＞0.05，表1、表2），提示HPLE＋美沙酮組改善戒斷癥狀比美沙酮組明顯.

表1 海洛因依賴大鼠行為的變化（±s）

表1 海洛因依賴大鼠行為的變化（±s）

注：與正常組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01.

1±0.20模型組 6.98±1.22b 12.14±2.22b 8.69±2.37b 16.60±3.27b 6.87±1.35b HPLE＋美沙酮組 0.49±0.14d 5.71±1.03d 0.34±0.08d 5.81±2.61d 1.90±0.18d美沙酮組 1.93±0.67ac 6.67±2.41ad 2.98±1.06ad 7.58±1.34ad 5.45±1.15組別 跳躍 站立 扭體 齒顫 上瞼下垂正常組 0.46±0.13 5.12±1.17 0.00±0.00 5.26±1.24 0.7 bc

表2 海洛因依賴大鼠避暗實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s）

表2 海洛因依賴大鼠避暗實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s）

注：與正常組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01.

.12模型組 296.88±92.75b 4.02±1.11b 206.33±62.05b 3.66±1.04b HPLE＋美沙酮組 233.47±71.34d 1.55±0.66d 160.22±55.40d 0.63±0.13d美沙酮組 260.01±69.37ac 2.72±0.74ad 180.80±49.51ac 1.87±0.86錯誤次數(shù)正常組 226.11±88.87 1.27±0.82 155.45±57.14 0.57±0組別 訓(xùn)練期 測試期潛伏期（s）錯誤次數(shù) 潛伏期（s）ad

2.2 海洛因依賴大鼠腦單胺遞質(zhì)的變化

與正常組相比，模型組大鼠腦NE、DA、5-HT、5-HIAA顯著升高（P＜0.01），經(jīng)治療后，與模型對照組相比，HPLE＋美沙酮組和美沙酮組大鼠腦NE、DA、5-HT、5-HIAA明顯下降（P＜0.05，P＜0.01），尤其是HPLE＋美沙酮組大鼠腦NE、DA、5-HT、5-HIAA降至正?；蚪咏Ｋ剑≒＞0.05，P＜0.05，表3）.

表3 海洛因依賴大鼠腦NE、DA、5-HT、5-HIAA的變化（±s）

表3 海洛因依賴大鼠腦NE、DA、5-HT、5-HIAA的變化（±s）

注：與正常組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01.

.61±45.25模型組 616.74±79.53b 1 165.27±216.14b 748.58±81.21b 566.55±39.16b HPLE＋美沙酮組 471.12±67.76d 616.08±102.37ad 537.44±69.07ad 381.99±27.38d美沙酮組 515.84±58.15ac 658.89±121.22ad 576.87±78.14ad 405.48±38.49 NE DA 5-HT 5-HIAA正常組 465.01±65.37 532.44±77.22 445.35±50.02 365組別c

3 討論

海洛因?yàn)榘⑵牒铣善罚M(jìn)入體內(nèi)水解為嗎啡，會使依賴者各組織器官造成不同程度的損害，尤其對腦的損害最為嚴(yán)重 .美沙酮是合成的麻醉性藥物，能完全替代海洛因而控制戒斷癥狀，但是，其本身也有一定的成癮性.在遞減撤藥的過程中，患者的心理依賴和恐懼感嚴(yán)重，出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹瀉、便秘、肌肉關(guān)節(jié)疼痛、失眠等戒斷癥狀［14］.這既是導(dǎo)致脫毒者復(fù)吸的原因之一，也是當(dāng)今亟待解決的治療難點(diǎn).

一般認(rèn)為，正常生理狀態(tài)下機(jī)體中的內(nèi)源性阿片樣多肽作用于阿片受體，通過多種信號傳導(dǎo)系統(tǒng)調(diào)節(jié)NE能系統(tǒng)、DA能系統(tǒng)、5-HT能系統(tǒng)、膽堿能系統(tǒng)、組胺系統(tǒng)及離子通道等系統(tǒng)的正常功能，以保持內(nèi)環(huán)境恒定 .當(dāng)從外部攝入大量的外源性阿片類物質(zhì)時，外來的阿片類物質(zhì)與內(nèi)源性阿片肽競爭阿片受體并與之結(jié)合，關(guān)閉Ca2＋通道，開啟K＋通道，增加K＋通透性，使藍(lán)斑核等神經(jīng)核團(tuán)發(fā)生抑制 .因此，阿片類物質(zhì)依賴時，內(nèi)源性阿片樣肽的合成降低，降解增加，其數(shù)量和功能都比成癮前低 .當(dāng)機(jī)體處于戒斷狀態(tài)時，阿片類物質(zhì)對NE能系統(tǒng)神經(jīng)元的抑制作用降低，藍(lán)斑核（腦內(nèi)最大的NE能神經(jīng)核）等部位突然活躍、放電增加，使得NE、DA、5-HT等釋放增加，促使軀體戒斷癥狀發(fā)生 .阿片類物質(zhì)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中可直接或間接興奮5-HT神經(jīng)元和DA能神經(jīng)元，分別促進(jìn)5-HT和DA合成［4］.

在本實(shí)驗(yàn)中，觀察了大鼠行為的改變，并用熒光分光光度法觀察了HPLE聯(lián)合美沙酮對海洛因依賴大鼠腦單胺類遞質(zhì)含量的變化 .結(jié)構(gòu)顯示：模型組大鼠跳躍、站立、扭體等次數(shù)顯著高于正常組，潛伏期顯著縮短、錯誤次數(shù)增加，腦NE、DA、5-HT及其代謝物5-HIAA（5-HIAA可反映組織中5-HT合成、代謝的多寡）顯著升高，經(jīng)HPLE和美沙酮處理后則可以逆轉(zhuǎn)上述指標(biāo)的變化，而且HPLE聯(lián)合美沙酮的脫毒效果比單獨(dú)使用美沙酮的效果更明顯 .其可能機(jī)制是：一方面，美沙酮是強(qiáng)效持久的受體激動劑，可與中樞的阿片受體相結(jié)合，從而緩解戒斷癥狀或防止戒斷癥狀出現(xiàn) .另一方面，HPLE中含有金絲桃素、黃酮類、原花青素和鞣質(zhì)等大量的活性成分，這些成分都具有增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，清除自由基，抗菌、抗炎、抗腫瘤，保護(hù)細(xì)胞、DNA、脂多糖等不受損傷，從而維持機(jī)體良好的生理功能狀態(tài)的作用［7～12］.或是通過抑制5-HT、NE、DA及谷氨酸的重攝?。?5］，從而能夠升高中樞神經(jīng)系統(tǒng)中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的濃度，改善大鼠的行為特征 .因此，HPLE聯(lián)合美沙酮進(jìn)行脫毒治療，能改善海洛因?qū)е碌男袨閷W(xué)的改變，使NE、DA、5-HT能等神經(jīng)元功能恢復(fù)協(xié)調(diào)，但有沒有其他可能的機(jī)理存在還有待進(jìn)一步研究.

綜上所述，在采用美沙酮替代遞減脫毒治療的同時輔以HPLE治療，能起到相輔相成的作用，有利于改善海洛因患者戒斷癥狀，促進(jìn)機(jī)體康復(fù).

［1］王昱，李春陽，俞詩源，等.孕小鼠注射海洛因?qū)ψ惺蟠竽X顳葉皮層結(jié)構(gòu)及ADA、SDH、NOS、GSH活性的影響［J］.解剖學(xué)報，2009，40（2）：175-182.

［2］王昱，李春陽，俞詩源，等.注射海洛因、麻黃素對仔鼠大腦顳葉皮層結(jié)構(gòu)及學(xué)習(xí)記憶能力的影響［J］.解剖學(xué)報，2009，40（5）：724-731.

［3］趙晶，徐貴麗，蔣旺，等.N硝基-L精氨酸對海洛因依賴性大鼠催戒斷的治療作用及對生化指標(biāo)的影響［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2000，20（2）：67.

［4］韋世秀，蒙子卿，葉峻，等.不同階段海洛因成癮大鼠腦內(nèi)單胺遞質(zhì)的變化［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25（5）：396-398.

［5］宋宏新，楊芳.貫葉連翹中黃酮類化合物的提取及含量測定［J］.陜西科技大學(xué)學(xué)報，2012，30（3）：73-76.

［6］李樂，張益靈，陶厚權(quán).貫葉連翹提取物對小鼠免疫性心肌炎的作用［J］.中國應(yīng)用生理學(xué)雜志，2013，29（4）：336-338.

［7］孫蓉，劉曉偉，尹建偉，等.貫葉連翹提取物對血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)行為和組織病理學(xué)的保護(hù)作用［J］.中藥藥理與臨床，2006，22（6）：36-38.

［8］姚五湖，龍斌，周日笑.貫葉連翹提取物提高衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的研究［J］.今日藥學(xué)，2010，20（4）：37-39.

［9］朱健如，沈更新，王曉團(tuán).貫葉連翹提取物延緩衰老作用的研究［J］.華中科技大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2002，31（6）：659-665.

［10］司銀楚，孫建寧.貫葉連翹提取物對慢性應(yīng)激抑郁大鼠行為及腦內(nèi)5-HT、NE表達(dá)的影響［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報，2003，34（1）：70-73.

［11］楊柳.貫葉連翹耐缺氧及抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.臨床合理用藥，2010，3（22）：4-5.

［12］Hayward SL，Bautista-Lopez N，Suzuki K，et al.CD4Tcells play major effector role and CD8Tcells initiating role in spontaneous autoimmune myocarditis of HLA-DQ8transgenic IAb knockout nonobese diabetic mice［J］.J Immunol，2006，176（12）：7715-7725.

［13］韋獻(xiàn)良，李百瑋.海洛因成癮大鼠腦一氧化氮、丙二醛、血清超氧化物歧化酶的變化［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2011，28（4）：496-498.

［14］徐澤民，張建兵，王清，等.加咪四君于湯聯(lián)合美沙酮治療海洛因成瘤臨床觀察［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，9（12）：133-134.

［15］Keahler S T，Sinner A，Baghai Tet al.Hyperforin enhances the extracellular concentrations of catecholamines，serotonin and glutamate in the rat locus coeruleus［J］.Neurosci Lett，1999，263：199