周細根，梁生林，胡存華，顏峰光，李慶耀，羅 婷，占豐春

樟樹子水提液對小鼠的鎮(zhèn)痛作用研究

*周細根，梁生林，胡存華，顏峰光，李慶耀，羅 婷，占豐春

（井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江西，吉安 343009）

探究樟樹子水提液對小鼠的鎮(zhèn)痛作用。采用熱板致痛法，觀察高、中、低劑量樟樹子水提液的鎮(zhèn)痛作用。樟樹子高劑量組（1 g生藥/mL）在給藥后30、60 min與生理鹽水對照組痛閾值有顯著性差異（< 0.05），而在90 min與生理鹽水對照組痛閾值無顯著性差異（> 0.05）；中劑量組（0.75 g生藥/mL）和低劑量組（0.5 g生藥/mL）在給藥后30、60 、90 min與生理鹽水對照組痛閾值無顯著差異（> 0.05）。樟樹子高劑量（1 g生藥/mL）對小鼠有鎮(zhèn)痛作用。

樟樹子；水提液；熱板法；鎮(zhèn)痛作用

樟樹(Camphor)[1]是中國一種常見的經(jīng)濟樹種，其來源廣泛，性溫，味辛；能通竅辟穢、溫中止痛、利濕殺蟲；用于寒濕吐瀉、胃腹疼痛；外用治疥、癬、齲齒作痛。國外的研究有抗炎[2]、抑菌[3]的功效，而國內(nèi)主要側(cè)重于抑菌和抗癌的功效的研究。樟樹作為一種典型的亞熱帶樹種，廣泛分布于中國的中南地區(qū)，是森林生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，通過光合作用吸收空氣中的二氧化碳并釋放氧氣，把大氣中的二氧化碳以生物能量的形式固定貯存下來，對生態(tài)和水文環(huán)境、局部小氣候有著重要影響，同時樟樹也是優(yōu)良的城市綠化樹種。目前樟樹子除極少量被采摘入藥外，大部分自生自滅，沒有被很好的利用[4]。樟樹富含芳香油、碳含量高及數(shù)量多，隨著世界化石能源逐漸枯竭，環(huán)境危機逐步加深，可再生能源受到越來越多國家的青睞，樟樹作為可再生能源具有極其重要的研究價值和應(yīng)用前景[5]。李林松[6]等采用GC/MS/DS聯(lián)用技術(shù)，對樟樹果實的揮發(fā)油成分進行了分析研究，分離鑒定了43種化學(xué)成分，主要成分是：樟腦(26.11%)，1，8-桉葉素(19.91%)，芳樟醇(9.15%)，α一松油醇(7.22%)和檸檬烯(5.28%)，國內(nèi)有許多文章是關(guān)于樟樹揮發(fā)油作用的研究，然而對樟樹子水提液的藥理作用研究甚少。為了探究樟樹更多的藥理作用，本實驗對樟樹子水提液的鎮(zhèn)痛作用進行研究。

1 材料

1.1 實驗動物

健康雌性小白鼠50只(由井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實驗室提供)，體質(zhì)量18~22 g。

1.2 藥品與試劑

新鮮樟樹子（采自井岡山大學(xué)校園內(nèi)的樟樹的成熟種子），0.25％哌替啶溶液、生理鹽水。

1.3 主要儀器

HSS-1B型恒溫浴槽（成都儀器廠），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（成都儀器廠），電磁爐一臺，索式回流提取器。

2 方法

2.1 藥物配制

2.1.1 樟樹子水提液的制備

將新鮮樟樹子放在恒溫干燥箱60 ℃、24 h烘干，準確稱取干燥的樟樹子40 g放入索式回流提取器中并加入蒸餾水300 mL，用電磁爐加熱3~4 h，放冷后過濾，濾液存留，濾渣中加入蒸餾水100 mL，繼續(xù)用電磁爐加熱2~3 h，放冷后過濾，合并兩次濾液80℃水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)至40 mL，所得提取液濃度為1 g生藥/mL（高劑量組），分別稀釋得到0.75 g生藥/mL（中劑量組和0.5 g生藥/mL（低劑量組）[7-8]。

2.2 樟樹子水提液對小鼠熱板法痛閾值的影響

2.2.1篩選實驗動物和正常痛閾值測定

將HSS-1B型恒溫浴槽中的水槽蓋取掉，往水槽中加水至以放入鎮(zhèn)痛槽后水不溢出為準；鎮(zhèn)痛槽放入恒溫浴槽后用支承板上左右兩側(cè)的螺套和壓緊板壓住鎮(zhèn)痛槽；將水槽的出水及回水口用一根橡膠管連通；開啟電源開關(guān)；在電源接通的狀態(tài)下，將設(shè)定鈕子開關(guān)置于“設(shè)定”后，調(diào)節(jié)溫度調(diào)節(jié)旋鈕，直到顯示器顯示出所需要的55 ℃，設(shè)定完成后將設(shè)定鈕子開關(guān)置于“液溫”，儀器顯示溫度逐漸達到設(shè)定值，直至穩(wěn)定顯示槽內(nèi)實際液溫(55 ± 0.1) ℃。將小鼠置于鎮(zhèn)痛槽內(nèi)，密切觀察小鼠的活動，以舔后爪出現(xiàn)時間作為痛閾的指標，當出現(xiàn)舔后爪時，立即記錄時間(即痛閾值)，然后取出小鼠，用此法篩選出痛閾值在10~30 s的小鼠50只供實驗用[9-10]。

2.2.2動物分組

將篩選好的痛閾值在10~30 s的雌性小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，即陰性對照組（生理鹽水組），陽性對照組（0.25%哌替啶組），實驗組（高、中、低劑量樟樹子水提取液組）。

2.2.3 給藥

每只小鼠灌胃給藥(0.1 mL/10 g)，連續(xù)灌胃5d，每天1次。末次給藥后30、60、90 min分別測小鼠痛閾值。如60 s仍無反應(yīng)，將小鼠取出，以免燙傷，其痛閾值以60 s計算。

2.3 統(tǒng)計學(xué)分析

3 結(jié)果

與生理鹽水組比較，給藥前各組痛閾值比較差異無顯著性(> 0.05)，給藥后哌替啶組比較差異有顯著性（< 0.05），給藥后30、60 min高劑量組比較有顯著性差異（< 0.05），給藥后90 min高劑量組和給藥后30、60、90 min中劑量組及低劑量組比較無顯著性差異 (> 0.05)。

與自身給藥前比較，生理鹽水組給藥后30、60 、90 min無顯著性差異 (> 0.05)，哌替啶組給藥后30、60、90 min和高劑量組給藥后30、60 min差異有顯著性(< 0.05)，中劑量組和低劑量組給藥后30、60、90 min無顯著性差異 (> 0.05)。結(jié)果見表1。

表1 樟樹子水提液對小鼠的鎮(zhèn)痛作用 (, n=10)

注：與生理鹽水對照組比較，a< 0.05；與自身給藥前痛閾值比較，b< 0.05

4 討論

周富成等[11]采用熱板法、扭體法、濃氨水致咳法，磷酸組胺致喘法研究沉香與樟樹莖醇提物的鎮(zhèn)痛、止咳與平喘作用，研究結(jié)果表明，樟樹莖與沉香的醇提物的鎮(zhèn)痛、止咳和平喘作用相似。樟樹是一種常綠喬木，樟樹莖和樟樹葉的采收和利用都會對樟樹造成損害，而樟樹子成熟后會自行脫落，所以成熟樟樹子的采收和利用不會對樟樹造成任何損害，對樟樹這種中國南特有的經(jīng)濟樹種的保護有重要意義。目前樟樹子除極少量被采摘入藥外，大部分自生自滅，沒有被很好的利用。樟樹在我國南方種植廣泛，會產(chǎn)生大量的樟樹子，因此企待樟樹子的應(yīng)用開發(fā)應(yīng)該深入。目前的研究主要集中在樟樹子油、樟樹子殼色素的提取方法和應(yīng)用、主要成分的分析和結(jié)構(gòu)研究。作為藥物或者食品添加物,樟樹子蛋白都具有一定的研究意義[12]。

為探討樟樹子是否具有鎮(zhèn)痛作用，本實驗采用熱板法致痛模型對樟樹子水提液進行了鎮(zhèn)痛作用的初步研究，實驗結(jié)果顯示，給藥后30、60 min高劑量(1 g/ mL)樟樹子提高小鼠的痛閾值，與生理鹽水對照組比較和自身給藥前比較差異有顯著性(< 0.05)，給藥后90 min高劑量樟樹子提高小鼠的痛閾值與生理鹽水對照組和自身給藥前比較差異無顯著性，中劑量組給藥后提高小鼠的痛閾值與生理鹽水對照組和自身給藥前比較差異無顯著性（> 0.05），低劑量組沒有提高小鼠痛閾值，0.25 %哌替啶陽性對照組給藥后30、60、90 min均提高小鼠的痛閾值與生理鹽水對照組和給藥前比較差異有顯著性(< 0.05)，而且高劑量樟樹子組給藥后60 min提高小鼠的痛閾值達最大值和0.25 %哌替啶陽性對照組給藥后60 min提高小鼠的痛閾值的水平相當，表明樟樹子只有在劑量較大時才具有一定的鎮(zhèn)痛作用，鎮(zhèn)痛作用在給藥后60 min達到最大強度，給藥后90 min鎮(zhèn)痛作用消失，其鎮(zhèn)痛作用的有效成份及作用機制有待于進步研究。

本實驗采用熱板法研究樟樹子對小鼠的鎮(zhèn)痛作用，以小鼠出現(xiàn)舔后爪的時間作為痛閾值的觀察指標，更加客觀具體，容易判斷。研究藥物鎮(zhèn)痛作用的實驗方法也有化學(xué)致痛法（如用醋酸給小鼠腹腔注射產(chǎn)生疼痛），以小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時間作為痛閾值的觀察指標，熱板法研究的目標是實驗動物小鼠的軀體疼痛，而扭體法研究的目標是實驗動物小鼠的內(nèi)臟疼痛，兩種疼痛的傳導(dǎo)神經(jīng)不一樣，兩種疼痛的性質(zhì)和特點也不同，本實驗只采用了熱板法來觀察樟樹子水提液對小鼠的鎮(zhèn)痛作用，樟樹子水提液對小鼠的內(nèi)臟痛有沒有鎮(zhèn)痛效果有待于進一步的藥理研究。

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ANALGESIC EFFECTS OF CAMPHOR SEED AQUEOUS EXTRACT ON MICE

*ZHOU Xi-gen, LIANG Sheng-lin, HU Chunhua, YAN Feng-gang, LI Qing-yao, LUO Ting, ZHAN Feng-chun

(School of Medicine, Jinggangshan University, Ji′an, Jiangxi 343009, China)

: To observe the analgesic effects of camphor seed aqueous extract on mice.: Using hot plate method to observe the analgesic effects of camphor aqueous extract of different dosages.: The pain threshold values of the treatment of high dosage (1 g crude drug / mL) are significantly different with that of the normal saline control treatment at 30 minutes, 60 minutes after dosing (< 0.05), but not at 90 minutes which is the same as the treatments of middle and low dosage at 30 minutes, 60 minutes and 90 minutes after dosing (> 0.05).: Camphor aqueous extract of high dosage has analgesic effects on mice.

camphor seed; aqueous extract; hot plate method; analgesic effect

R965.2

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2014.04.021

1674-8085(2014)04-0096-03

2014-04-09；

2014-05-19

*周細根(1972-)，男，江西吉水人，副教授，碩士，主要從事藥理學(xué)教學(xué)與科研(E-mail:xgzhou1972@163.com)；

梁生林(1962-)，男，江西吉安縣人，教授，主要從事藥理學(xué)教學(xué)與科研(E-mail:slliang1962@163.com)；

胡存華(1972-)，女，江西萬安人，副教授，碩士，主要從事藥理學(xué)教學(xué)與科研(E-mail:Huchunhau@126.com)；

顏峰光(1970-)，女，江西吉安人，實驗師，主要從事藥理教學(xué)與科研(E-mail:Yanfengguang70@163.com)；

李慶耀(1967-)，男，江西吉安縣人，講師，碩士，主要從事藥理學(xué)教學(xué)與教研(E-mail:Liqingyao1967@163.com)；

羅 婷(1982-)，女，江西吉安人，講師，碩士，主要從事藥理學(xué)教學(xué)與科研(E-mail:Luoting82@163.com)；

占豐春(1990-)，男，江西永豐人，井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)專業(yè)2009級本科生(E-mail:zhenfch1990@qq.com).