余曉霞　邱凱鋒　廖慶權(quán)

【摘要】 目的 建立復(fù)方碘化鉀滴眼液無(wú)菌檢查方法。 方法 按《中國(guó)藥典》2010年版二部無(wú)菌檢查法中薄膜過(guò)濾法對(duì)復(fù)方碘化鉀滴眼液的無(wú)菌檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)果 該制劑的無(wú)菌檢查選用薄膜過(guò)濾法， 以金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性對(duì)照菌， 沖洗總量100 ml。結(jié)論 經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證， 該法可行， 結(jié)果可靠。

【關(guān)鍵詞】 復(fù)方碘化鉀滴眼液；無(wú)菌檢查；驗(yàn)證

Validation of sterility test of compound potassium iodide eye drops YU Xiao-xia， QIU Kai-feng， LIAO Qing-quan. Department of Pharmacy， Sun Yat-sen Memorial Hospital of Sun Yat-sen University， Guangzhou 510120， China

【Abstract】 Objective To establish the method of sterility test of compound potassium iodide eye drops. Methods According to sterility test in the appendix of Chinese Pharmacopoeia 2010 （section 2）， the membrane filteration used in the sterility test of compound potassium iodide eye drops was validated. Results The membrane filteration was used in the sterility test of compound potassium iodide eye drops， and staphylococcus aureus was used as positive control germs and the total amount of irrigation fluid was 100 ml. Conclusion Through the technological validation， the method is applicable and the result is reliable.

【Key words】 Compound potassium iodide eye drops； Sterility test； Validation

復(fù)方碘化鉀滴眼液為中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院配制的眼用制劑。其主要成分為碘化鉀、碘化鈉、維生素C和維生素B1等。具有補(bǔ)充電離子和維生素的作用， 臨床適用于早期白內(nèi)障?！吨袊?guó)藥典》2005年版僅要求滴眼液需做微生物限度檢查[1]， 而《中國(guó)藥典》2010年版對(duì)滴眼液的要求提高到無(wú)菌檢查水平[2]。因此， 對(duì)復(fù)方碘化鉀滴眼液無(wú)菌檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證， 以保證方法的可行性和結(jié)果的可靠性。

1 儀器與材料

1. 1 儀器 一次性全封閉無(wú)菌集菌過(guò)濾器（北京牛?；蚣夹g(shù)有限公司）、WJ-6無(wú)菌檢查儀（天津羅根科技）、303A-1生化培養(yǎng)箱（上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司）、SPX-100B生化培養(yǎng)箱（上海悅豐儀器表有限公司）。

1. 2 試劑 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：140308）， 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：140228）， 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批號(hào)：130521）， 改良馬丁培養(yǎng)基（批號(hào)：1401222）， 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：130910）， 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（批號(hào)：1401152）， （以上均來(lái)源于北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司）。復(fù)方碘化鉀滴眼液（規(guī)格：10 ml/瓶， 批號(hào)：201312258、201312268、201312278， 中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院）。

1. 3 菌種 大腸埃希菌（escherichia coli） [CMCC（B）44 102]， 枯草芽孢桿菌（bacillus subtilis） [CMCC（B）63 501]， 金黃色葡萄球菌（staphylococcus aureus）[CMCC（B）26 003]， 生孢梭菌（clostridum sporogens） [CMCC（B）64 941]， 白色念珠菌（candida albicans） [CMCC（F）98 001]， 黑曲霉（aspergillus niger） [CMCC（F）98 003]， 銅綠假單胞菌（pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10 104]（以上菌種的凍干菌均購(gòu)自中國(guó)食品藥品生物檢定研究院）。

2 方法與結(jié)果

2. 1 菌液制備 取經(jīng)30～35℃培養(yǎng)18～24 h的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的肉湯培養(yǎng)物， 用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至每毫升含菌數(shù)為<100 cfu的菌懸液。取經(jīng)30～35℃培養(yǎng)18～24 h的生孢梭菌硫乙醇酸鹽液體新鮮培養(yǎng)物， 用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至每毫升含菌數(shù)<100 cfu的菌懸液。取經(jīng)23～28℃培養(yǎng)24～48 h的白色念珠菌液體培養(yǎng)物， 用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至每毫升含菌數(shù)<100 cfu的菌懸液。取經(jīng)23～28℃ 培養(yǎng)1周的黑曲霉斜面培養(yǎng)物， 加入3～5 ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液， 將孢子洗脫。然后， 用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)， 用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每毫升含孢子數(shù)<100 cfu的孢子懸液。（以上菌液的使用均不超過(guò)5代。）

2. 2 最少檢驗(yàn)數(shù)量、檢驗(yàn)量的確定 試驗(yàn)用樣品的裝量為10 ml， 按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄Ⅺ H無(wú)菌檢查法表1， 最少檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)為10個(gè)；按表2， 每支供試品接入每種培養(yǎng)基的最少量為2 ml。

2. 3 供試品管的制備 取本品30支（批號(hào)：201312258、201312268、201312278）分2份， 15支/份， 用2套一次性三聯(lián)管全封閉無(wú)菌集菌過(guò)濾器， 先用少量0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液濕潤(rùn)濾膜， 調(diào)節(jié)集菌儀轉(zhuǎn)速為160 r/min， 按薄膜過(guò)濾法全量過(guò)濾， 每膜用0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液100 ml 分2次沖洗， 在最后50 ml沖洗液中加入菌液1 ml， 過(guò)濾至干， 作為供試品管。

2. 4 對(duì)照管的制備 取過(guò)濾器， 加入50 ml 0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液， 加入相應(yīng)的菌液1 ml， 濾干， 作為對(duì)照管。

2. 5 無(wú)菌檢查方法的驗(yàn)證 分別取含大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌和生孢梭菌的供試品管， 各加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基100 ml；含白色念珠菌和黑曲霉的供試品管， 各加入改良馬丁培養(yǎng)基100 ml， 置相應(yīng)培養(yǎng)溫度培養(yǎng)。

取對(duì)照管6管， 其中4管分別加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基100 ml， 再分別加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌和生孢梭菌菌液各1 ml；另2管分別加入改良馬丁培養(yǎng)基100 ml， 再分別加入白色念珠菌和黑曲霉菌液各1 ml， 置相應(yīng)培養(yǎng)溫度培養(yǎng)。同時(shí)， 取上述菌液各1 ml， 按微生物限度檢查法平皿法（《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄Ⅺ H）計(jì)數(shù)， 每個(gè)菌株平行制備2個(gè)平皿， 生孢梭菌用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基作液體計(jì)數(shù)， 測(cè)定所加菌數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表1。

3 小結(jié)

綜上所述， 實(shí)驗(yàn)中與對(duì)照管比較， 供試品管中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好， 說(shuō)明供試品在本法的檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)， 可照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無(wú)菌檢查。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2005：附錄XIJ.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.（二部）.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2010：附錄XIH.

[收稿日期：2014-06-23]endprint