彭州市疾病預(yù)防控制中心 四川 彭州 611930

食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸的高效液相色譜法

蘇慧伍霞賴先志

彭州市疾病預(yù)防控制中心 四川 彭州 611930

目的：建立起食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸的檢測方法。方法不同種類的食品經(jīng)前處理后，加入適量0.02mol/L氫氧化鈉超聲提取防腐劑、甜味劑，用10%乙酸鉛，10%硫酸鈉沉淀大分子物質(zhì)，最后用0.02mol/L氫氧化鈉溶液定容，取上清液，過0.22μm水系濾膜，進(jìn)高效液相色譜分析。結(jié)果安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸在10.0mg/L-100.0mg/L范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)在0.999以上，方法加標(biāo)回收率均在95%-105%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值在1.56%-3.21%。結(jié)論該方法操作簡單，干擾小，結(jié)果精密度良好，準(zhǔn)確度可靠，適用于各類食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸的測定。

高效液相色譜法；甜味劑；防腐劑；食品

苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸是我國常用的有機(jī)防腐劑，糖精鈉、安賽蜜作為甜味劑也廣泛的被應(yīng)用于食品中，適當(dāng)?shù)氖褂梅栏瘎┖吞鹞秳┛梢栽黾赢a(chǎn)品的保質(zhì)期，提高產(chǎn)品的風(fēng)味，但是過量的使用上述防腐劑和甜味劑會對人體產(chǎn)生毒副作用。國家對其使用量及使用范圍有嚴(yán)格規(guī)定[1～ 2]。目前甜味劑和防腐劑的檢測方法一般采用高效液相色譜法等[3～ 8]。從2010年起，我中心就接到上級單位食品風(fēng)險監(jiān)測的任務(wù)，每年都要開展不同種類食品中防腐劑、甜味劑的測定，通過幾年的工作總結(jié)，本文對上述防腐劑、甜味劑的檢測方法進(jìn)行探討。將不同種類的食品分別經(jīng)前處理后，加入適量0.02mol/L氫氧化鈉超聲提取防腐劑、甜味劑，再用10%乙酸鉛，10%硫酸鈉沉淀大分子物質(zhì)，最后用0.02mol/L氫氧化鈉溶液定容，取上清液，過0.22μm水系濾膜，進(jìn)高效液相色譜分析。建立起食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸的檢測方法。

1.材料與方法

1.1 主要儀器

大連依利特高效液相色譜1201 型(配有二元梯度泵、紫外檢測器),色譜柱 SinoCHrom ODS-BP 4.6×200mm,超聲波振蕩器, 真空泵，抽濾器，pH計。

1.2 試劑

甲醇(J&K Scientific色譜純), 0.02mol/L的乙酸銨(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司 GR), 氫氧化鈉(AR),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：乙?；前匪徕浫芤簶?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(安賽蜜)GBW(E)100171、糖精鈉溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW(E)100008、山梨酸溶液標(biāo)準(zhǔn)GBW(E)082263、苯甲酸溶液標(biāo)準(zhǔn)GBW(E)082262、脫氫乙酸BW5010，上述標(biāo)準(zhǔn)品除脫氫乙酸含量為98.5%外，其余含量均為1000 mg/L。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 準(zhǔn)確稱取10.17g脫氫乙酸，溶于95%乙醇后用純水定容至刻度，即為濃度1000 mg/L的脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別吸取各種1000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1.0mL、2.0mL 、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0 mL， 用純水定容至100 mL ，配制成10.0 mg/L、20.0 mg/L、40.0 mg/L、60.0 mg/L、80.0 mg/L、100.0 mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)液。

1.3.2 樣品前處理

固體樣品均質(zhì)后備用；含乙醇、二氧化碳、二硫化碳的液體樣品，取50 mL于燒杯中，60℃水浴至近干，再次定容至50mL，混勻，備用。

1.3.3 樣品處理

稱取2.5g經(jīng)前處理后的樣品，加入10 mL 0.02mol/L氫氧化鈉溶液，超聲波振蕩10min，分多次，每次加入1.0 mL 10%乙酸鉛，1.0 mL 10%硫酸鈉，直至蛋白質(zhì)及脂肪沉淀后，用0.02mol/L氫氧化鈉溶液定容至刻度，靜置，取上清液過0.22μm水相濾膜,收集濾液備用。

1.3.4 色譜條件 色譜柱: SinoCHrom ODS-BP柱(4.6×200mm), 流動相A為甲醇, B為乙酸銨溶液( 0.02mol/L)，流速1.0ml/min，進(jìn)樣量20μL，檢測波長230nm，梯度洗脫，梯度洗脫設(shè)置見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.4 定性、定量：根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)峰面積法定量。

2.結(jié)果

2.1 樣品的預(yù)處理

許多食品含蛋白質(zhì)、淀粉、脂肪類的大分子物質(zhì)，直接進(jìn)樣會堵塞色譜柱，且干擾峰很多，用濾頭過濾也很困難。此前，也有很多文獻(xiàn)報道過用HPLC法測量食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉等的前處理方法[3～ 8]，本文參考文獻(xiàn)中的處理方法，又對其進(jìn)行了改進(jìn)，提出了用60℃水浴除去易揮發(fā)干擾物質(zhì)，用10%乙酸鉛， 10%硫酸鈉沉淀大分子物質(zhì)，再用0.02mol/L氫氧化鈉溶液定容以保證樣品的PH值恒定。該處理方法操作簡單，試劑用量少，減少了待測物在提取過程中的損失。

2.2 流動相的選擇

流動相選用了經(jīng)濟(jì)、低毒的甲醇-乙酸銨體系。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，如果僅測量安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸四種物質(zhì)，使用5%甲醇+95%0.02mol/L乙酸銨的流動相比例等度洗脫，在23min內(nèi)四種組分全部出峰，但是脫氫乙酸在45min內(nèi)仍不出峰。因此需要使用梯度洗脫，再20min后增加甲醇的比例，使脫氫乙酸在30min內(nèi)出峰。圖1為5種組分使用梯度洗脫程序的譜圖。

圖1

3.結(jié)論

應(yīng)用高效液相色譜法，采用甲醇-0.02mol/L乙酸銨梯度洗脫，可以同時測量食品中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸。經(jīng)過改進(jìn)樣品前處理方法，使操作更簡單，干擾更小，結(jié)果精密度良好，準(zhǔn)確度可靠，適用于不同類型食品的測定。

[1]姚煥章.食品添加劑[M].北京: 中國物資出版社, 2001.

[2]GB/T2760-2007.食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].

[3]GB/T5009-2003.食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法.理化部分(一)[ S].

[4]管健, 沈永偉.食品中山梨酸、苯甲酸、糖精鈉的提取方法探討[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2005, 15( 10): 1260-1270.

[5]栗文元.食品中糖精鈉、苯甲酸、山梨酸HPLC測定通用試樣處理方法研究[ J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 1997, 7( 6): 340-342.

[6]李世榮,向曉霞,劉仙等.高效液相色譜法檢測植物蛋白飲料和含乳飲料中的糖精鈉、苯甲酸和山梨酸[ J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2007, 9,17,9 :1605-1607.

[7]周紅霞,張紅琳,黃娟等.高效液相色譜法同時檢測液體食品中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉含量的研究[ J].中國食品添加劑,2014, 3: 208-212.

[8]李玉強(qiáng),晏曉清,張艷芳等.高效液相色譜法同時檢測蛋白飲料中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸的前處理方法研究[ J].科技與企業(yè),2010(4)：249-251

[9]刁曉霞，高效液相色譜法測定乳制品中的合成色素[ J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2010.4(20)：769-770

O657.7+2

B

1009-6019(2014)12-0018-02