陳新 許建軍

Microlab STAR液體處理工作站攜帶污染分析與對(duì)策

陳新 許建軍

目的 通過(guò)對(duì)使用永久性加樣鋼針的STAR液體處理工作站在酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的拖帶現(xiàn)象進(jìn)行分析, 尋求有效的解決拖帶現(xiàn)象的方法。方法 用Microlab STAR液體處理工作站在HBsAg、梅毒等項(xiàng)目的血液檢測(cè)過(guò)程出現(xiàn)拖帶現(xiàn)象進(jìn)行觀察, 對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)拖帶陽(yáng)性的標(biāo)本, 采取確診試驗(yàn)、手工重新加樣、換用一次性加樣針以及對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行跟蹤隨訪(fǎng), 比較不同加樣方法的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 經(jīng)重新留取標(biāo)本后的重新檢測(cè)和確診試驗(yàn), 結(jié)果均為陰性, 證實(shí)為拖帶現(xiàn)象所致。結(jié)論 使用永久性加樣鋼針的STAR液體處理工作站在ELISA實(shí)驗(yàn)中應(yīng)加強(qiáng)對(duì)每次加樣前攜帶污染的去除, 做好對(duì)儀器的維護(hù)保養(yǎng)可以減少拖帶現(xiàn)象的發(fā)生, 而最好、最根本的解決辦法是使用一次性加樣針。

全自動(dòng)液體處理工作站；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定；陽(yáng)性拖帶

Microlab STAR液體處理工作站為瑞士生產(chǎn)的、以血液分析為主導(dǎo)、集多項(xiàng)體外診斷實(shí)驗(yàn)于一身的多功能液體處理自動(dòng)化平臺(tái), 是目前國(guó)內(nèi)采供血機(jī)構(gòu)應(yīng)用較理想的血液標(biāo)本處理的設(shè)備之一。其簡(jiǎn)捷的操作界面, 良好的加樣精度和速度, 為減輕工作人員勞動(dòng)強(qiáng)度, 提高工作效率發(fā)揮了重要作用［1］。其永久性鋼針獨(dú)特的環(huán)流式內(nèi)外壁清洗功能, 可以清除加樣過(guò)程中的交叉污染。但對(duì)于個(gè)別強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本, 由于加樣中沖洗次數(shù)和量有限, 會(huì)造成鄰近標(biāo)本拖帶污染, 造成不必要的血液資源浪費(fèi)和對(duì)獻(xiàn)血者的非正常阻止［2］。作者曾遇到8例因拖帶污染而引起的假陽(yáng)性發(fā)生。作者結(jié)合自己工作實(shí)際進(jìn)行分析并改進(jìn)鋼針使用的方法, 最后在更換成一次性加樣針后, 拖帶現(xiàn)象消失, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 軟件MICROLAB STAR液體處理工作站和應(yīng)用軟件(瑞士), FAME全自動(dòng)酶免分析儀(瑞士)。

1.2 試劑 HBsAg(廈門(mén)新創(chuàng), 批號(hào)：2012042117、2012053 115)；梅毒抗體試劑(廈門(mén)新創(chuàng), 批號(hào)：2012087516、2012 060217)。

1.3 標(biāo)本 均來(lái)自無(wú)償獻(xiàn)血者捐獻(xiàn)血液留取的血液檢測(cè)標(biāo)本。

1.4 方法 按檢測(cè)項(xiàng)目和試劑說(shuō)明書(shū)要求, 在微機(jī)上編輯加樣程序組合(抗HCV、抗HIV、HBsAg、梅毒抗體), 使用永久性鋼針按照程序8針平行同時(shí)依次吸取試劑和血清標(biāo)本進(jìn)行加樣。加樣方向從酶標(biāo)板的1～12列, 每次加樣后進(jìn)行內(nèi)外壁清洗。

1.5 加樣假陽(yáng)性拖帶標(biāo)本的確定 如酶標(biāo)板放置位置所示, A、B、C……H表示加樣針和酶標(biāo)板行數(shù)。1、2、3……12表示酶標(biāo)板列數(shù)和加樣順序。酶標(biāo)板孔位可示為A1、A2、A3……A12、B1、B2、B3……B12及H1、H2、H3……H12。見(jiàn)表1。

表1 酶標(biāo)板孔位

液容量和清洗次數(shù), 并在每加樣程序完成后增設(shè)洗滌液清洗程序后, 在第二、第三批的檢測(cè)結(jié)果中發(fā)現(xiàn), H3、B5、C11、E9孔為強(qiáng)陽(yáng)性, 而其余孔位的OD值比初次檢測(cè)明顯降低。并通過(guò)血辮檢測(cè)得到證實(shí)采取措施后加樣針的拖帶污染明顯減弱, 大幅度降低了由于拖帶污染所引起的假陽(yáng)性。

永久性鋼針雖有獨(dú)特的環(huán)流式內(nèi)外壁清洗功能, 但隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)內(nèi)壁非特異蛋白吸附的增加［3］, 特別是一些高濃度樣本拖帶污染仍會(huì)發(fā)生, 從作者的應(yīng)用中也看到即使采取有效措施也無(wú)法徹底消除永久性鋼針的引起拖帶污染問(wèn)題。

如果沒(méi)有條件換用一次性加樣針, 則可以如下操作：①每次加樣中盡可能增加清洗量和次數(shù)；②增設(shè)洗滌液清洗程序在每批加樣后清洗加樣針3次；③在每一加樣程序完成后用95%的酒精擦拭加樣針；④使用酶免疫后處理器專(zhuān)用洗滌液完成3～5次沖洗后關(guān)機(jī), 次日工作開(kāi)始前徹底沖洗后再行加樣；⑤對(duì)加樣方向連續(xù)陽(yáng)性現(xiàn)象必需剪血袋辮子進(jìn)行雙孔復(fù)試以血辮結(jié)果為準(zhǔn)。經(jīng)驗(yàn)證, 通過(guò)以上步驟的處理能有效的降低了拖帶污染的發(fā)生, 較好地控制了拖帶污染造成的假陽(yáng)性。而為了從根本上杜絕因攜帶污染而造成的檢測(cè)差錯(cuò),建議在加樣檢測(cè)過(guò)程中, 全部選用了一次性加樣針尖。

2 結(jié)果

2.1 HBsAg拖帶陽(yáng)性 一批分別出現(xiàn)于板G2、G3、G4孔位,其OD值為2.989、1.756、0.318。試驗(yàn)Cutoff值均為0.120。根據(jù)HBsAg檢測(cè)規(guī)程與試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求對(duì)這三份標(biāo)本使用原試劑進(jìn)行雙孔復(fù)試, OD值結(jié)果分別為2.546、2.202、1.628。上述3份標(biāo)本送疾病預(yù)防控制部門(mén)進(jìn)行免疫印跡法(WB)確認(rèn)檢測(cè)均為陽(yáng)性。同時(shí)留取血袋辮子中血樣進(jìn)行檢測(cè), G3孔位EIA和WB陽(yáng)性, 而G4、G5結(jié)果陰性, 并在隨訪(fǎng)檢測(cè)結(jié)果中得到證實(shí)。二批出現(xiàn)于板H3、H4、H5孔位上,其OD值結(jié)果分別為2.978、1.378、0.213, 試驗(yàn)Cutoff值均為0.120。使用以上方法采用相同原試劑雙孔復(fù)試OD值結(jié)果分別為2.974、0.646、0.024。這3份標(biāo)本送市疾控中心做確認(rèn)試驗(yàn), 結(jié)果H3為陽(yáng)性, 而H4、H5為陰性。血袋辮子留取樣本的檢測(cè)結(jié)果與上相同, 并且在隨訪(fǎng)檢測(cè)中得以證實(shí)。

2.2 梅毒抗體拖帶陽(yáng)性 三個(gè)批次分別出現(xiàn)在B5、B6、B7與C11、C12和E9、E10孔位, 其OD值分別為2.193、1.276、0.230與2.697、0.226和1.963、0.328。試驗(yàn)Cutoff 值均為0.126。根據(jù)梅毒抗體檢測(cè)規(guī)程與試劑盒說(shuō)明書(shū)要求, 對(duì)這七份標(biāo)本原試劑雙孔復(fù)試結(jié)果分別為2.103、0.092、0.005與2.658、0.006和1.875、0.010。上述7份標(biāo)本送疾病預(yù)防控制部門(mén)進(jìn)行TPPA確認(rèn), B5、C11、E9為陽(yáng)性, 其余均為陰性。同時(shí)留取血袋辮子中血樣進(jìn)行檢測(cè), 檢測(cè)結(jié)果同前, 并在隨訪(fǎng)檢測(cè)中得到證實(shí)。

2.3 換用一次性加樣針, 使用上述相同試劑與標(biāo)本, 重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)操作, 未出現(xiàn)一例拖帶現(xiàn)象, 檢測(cè)出的疑似標(biāo)本經(jīng)疾病預(yù)防控制部門(mén)驗(yàn)證檢測(cè)均為真陽(yáng)性。

3 討論

從第一批雙孔復(fù)試檢測(cè)結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn), G2、G3、G4孔為強(qiáng)陽(yáng)性, 而G3、G4孔的OD值比初次檢測(cè)明顯增高。而留取血辮血樣重新檢測(cè)結(jié)果中, 只有G3陽(yáng)性, 其余均為陰性, 證明為加樣污染。作者嘗試增大加樣過(guò)程中的清洗洗

［1］ 王寒梅, 劉麗波, 王曉光.血液檢測(cè)酶聯(lián)免疫法全自動(dòng)化的應(yīng)用.中國(guó)地方病防治雜志, 2004(6):50.

［2］ 陳妍, 朱紹汶, 黃翔寧, 等.STAR全自動(dòng)加樣器引起血液檢測(cè)陽(yáng)性拖帶現(xiàn)象分析.中國(guó)輸血雜志, 2009(1):63.

［3］ 譚明科, 黃才勇, 徐飛, 等.MicrolabSTAR全自動(dòng)加樣系統(tǒng)維護(hù)保養(yǎng)及常見(jiàn)故障處理.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2004, 19(3):29-30.

2014-07-01］

215600 江蘇省張家港市紅十字血站(陳新)；江蘇省昆山市紅十字會(huì)血站質(zhì)量管理科(許建軍)

許建軍