陳新 許建軍

Microlab STAR液體處理工作站攜帶污染分析與對策

陳新 許建軍

目的 通過對使用永久性加樣鋼針的STAR液體處理工作站在酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)實驗中出現(xiàn)的拖帶現(xiàn)象進(jìn)行分析, 尋求有效的解決拖帶現(xiàn)象的方法。方法 用Microlab STAR液體處理工作站在HBsAg、梅毒等項目的血液檢測過程出現(xiàn)拖帶現(xiàn)象進(jìn)行觀察, 對ELISA實驗出現(xiàn)拖帶陽性的標(biāo)本, 采取確診試驗、手工重新加樣、換用一次性加樣針以及對獻(xiàn)血者進(jìn)行跟蹤隨訪, 比較不同加樣方法的檢測結(jié)果。結(jié)果 經(jīng)重新留取標(biāo)本后的重新檢測和確診試驗, 結(jié)果均為陰性, 證實為拖帶現(xiàn)象所致。結(jié)論 使用永久性加樣鋼針的STAR液體處理工作站在ELISA實驗中應(yīng)加強(qiáng)對每次加樣前攜帶污染的去除, 做好對儀器的維護(hù)保養(yǎng)可以減少拖帶現(xiàn)象的發(fā)生, 而最好、最根本的解決辦法是使用一次性加樣針。

全自動液體處理工作站；酶聯(lián)免疫吸附測定；陽性拖帶

Microlab STAR液體處理工作站為瑞士生產(chǎn)的、以血液分析為主導(dǎo)、集多項體外診斷實驗于一身的多功能液體處理自動化平臺, 是目前國內(nèi)采供血機(jī)構(gòu)應(yīng)用較理想的血液標(biāo)本處理的設(shè)備之一。其簡捷的操作界面, 良好的加樣精度和速度, 為減輕工作人員勞動強(qiáng)度, 提高工作效率發(fā)揮了重要作用［1］。其永久性鋼針獨(dú)特的環(huán)流式內(nèi)外壁清洗功能, 可以清除加樣過程中的交叉污染。但對于個別強(qiáng)陽性標(biāo)本, 由于加樣中沖洗次數(shù)和量有限, 會造成鄰近標(biāo)本拖帶污染, 造成不必要的血液資源浪費(fèi)和對獻(xiàn)血者的非正常阻止［2］。作者曾遇到8例因拖帶污染而引起的假陽性發(fā)生。作者結(jié)合自己工作實際進(jìn)行分析并改進(jìn)鋼針使用的方法, 最后在更換成一次性加樣針后, 拖帶現(xiàn)象消失, 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 軟件MICROLAB STAR液體處理工作站和應(yīng)用軟件(瑞士), FAME全自動酶免分析儀(瑞士)。

1.2 試劑 HBsAg(廈門新創(chuàng), 批號：2012042117、2012053 115)；梅毒抗體試劑(廈門新創(chuàng), 批號：2012087516、2012 060217)。

1.3 標(biāo)本 均來自無償獻(xiàn)血者捐獻(xiàn)血液留取的血液檢測標(biāo)本。

1.4 方法 按檢測項目和試劑說明書要求, 在微機(jī)上編輯加樣程序組合(抗HCV、抗HIV、HBsAg、梅毒抗體), 使用永久性鋼針按照程序8針平行同時依次吸取試劑和血清標(biāo)本進(jìn)行加樣。加樣方向從酶標(biāo)板的1～12列, 每次加樣后進(jìn)行內(nèi)外壁清洗。

1.5 加樣假陽性拖帶標(biāo)本的確定 如酶標(biāo)板放置位置所示, A、B、C……H表示加樣針和酶標(biāo)板行數(shù)。1、2、3……12表示酶標(biāo)板列數(shù)和加樣順序。酶標(biāo)板孔位可示為A1、A2、A3……A12、B1、B2、B3……B12及H1、H2、H3……H12。見表1。

表1 酶標(biāo)板孔位

液容量和清洗次數(shù), 并在每加樣程序完成后增設(shè)洗滌液清洗程序后, 在第二、第三批的檢測結(jié)果中發(fā)現(xiàn), H3、B5、C11、E9孔為強(qiáng)陽性, 而其余孔位的OD值比初次檢測明顯降低。并通過血辮檢測得到證實采取措施后加樣針的拖帶污染明顯減弱, 大幅度降低了由于拖帶污染所引起的假陽性。

永久性鋼針雖有獨(dú)特的環(huán)流式內(nèi)外壁清洗功能, 但隨著使用時間的延長內(nèi)壁非特異蛋白吸附的增加［3］, 特別是一些高濃度樣本拖帶污染仍會發(fā)生, 從作者的應(yīng)用中也看到即使采取有效措施也無法徹底消除永久性鋼針的引起拖帶污染問題。

如果沒有條件換用一次性加樣針, 則可以如下操作：①每次加樣中盡可能增加清洗量和次數(shù)；②增設(shè)洗滌液清洗程序在每批加樣后清洗加樣針3次；③在每一加樣程序完成后用95%的酒精擦拭加樣針；④使用酶免疫后處理器專用洗滌液完成3～5次沖洗后關(guān)機(jī), 次日工作開始前徹底沖洗后再行加樣；⑤對加樣方向連續(xù)陽性現(xiàn)象必需剪血袋辮子進(jìn)行雙孔復(fù)試以血辮結(jié)果為準(zhǔn)。經(jīng)驗證, 通過以上步驟的處理能有效的降低了拖帶污染的發(fā)生, 較好地控制了拖帶污染造成的假陽性。而為了從根本上杜絕因攜帶污染而造成的檢測差錯,建議在加樣檢測過程中, 全部選用了一次性加樣針尖。

2 結(jié)果

2.1 HBsAg拖帶陽性 一批分別出現(xiàn)于板G2、G3、G4孔位,其OD值為2.989、1.756、0.318。試驗Cutoff值均為0.120。根據(jù)HBsAg檢測規(guī)程與試劑盒說明書的要求對這三份標(biāo)本使用原試劑進(jìn)行雙孔復(fù)試, OD值結(jié)果分別為2.546、2.202、1.628。上述3份標(biāo)本送疾病預(yù)防控制部門進(jìn)行免疫印跡法(WB)確認(rèn)檢測均為陽性。同時留取血袋辮子中血樣進(jìn)行檢測, G3孔位EIA和WB陽性, 而G4、G5結(jié)果陰性, 并在隨訪檢測結(jié)果中得到證實。二批出現(xiàn)于板H3、H4、H5孔位上,其OD值結(jié)果分別為2.978、1.378、0.213, 試驗Cutoff值均為0.120。使用以上方法采用相同原試劑雙孔復(fù)試OD值結(jié)果分別為2.974、0.646、0.024。這3份標(biāo)本送市疾控中心做確認(rèn)試驗, 結(jié)果H3為陽性, 而H4、H5為陰性。血袋辮子留取樣本的檢測結(jié)果與上相同, 并且在隨訪檢測中得以證實。

2.2 梅毒抗體拖帶陽性 三個批次分別出現(xiàn)在B5、B6、B7與C11、C12和E9、E10孔位, 其OD值分別為2.193、1.276、0.230與2.697、0.226和1.963、0.328。試驗Cutoff 值均為0.126。根據(jù)梅毒抗體檢測規(guī)程與試劑盒說明書要求, 對這七份標(biāo)本原試劑雙孔復(fù)試結(jié)果分別為2.103、0.092、0.005與2.658、0.006和1.875、0.010。上述7份標(biāo)本送疾病預(yù)防控制部門進(jìn)行TPPA確認(rèn), B5、C11、E9為陽性, 其余均為陰性。同時留取血袋辮子中血樣進(jìn)行檢測, 檢測結(jié)果同前, 并在隨訪檢測中得到證實。

2.3 換用一次性加樣針, 使用上述相同試劑與標(biāo)本, 重復(fù)上述實驗操作, 未出現(xiàn)一例拖帶現(xiàn)象, 檢測出的疑似標(biāo)本經(jīng)疾病預(yù)防控制部門驗證檢測均為真陽性。

3 討論

從第一批雙孔復(fù)試檢測結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn), G2、G3、G4孔為強(qiáng)陽性, 而G3、G4孔的OD值比初次檢測明顯增高。而留取血辮血樣重新檢測結(jié)果中, 只有G3陽性, 其余均為陰性, 證明為加樣污染。作者嘗試增大加樣過程中的清洗洗

［1］ 王寒梅, 劉麗波, 王曉光.血液檢測酶聯(lián)免疫法全自動化的應(yīng)用.中國地方病防治雜志, 2004(6):50.

［2］ 陳妍, 朱紹汶, 黃翔寧, 等.STAR全自動加樣器引起血液檢測陽性拖帶現(xiàn)象分析.中國輸血雜志, 2009(1):63.

［3］ 譚明科, 黃才勇, 徐飛, 等.MicrolabSTAR全自動加樣系統(tǒng)維護(hù)保養(yǎng)及常見故障處理.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2004, 19(3):29-30.

2014-07-01］

215600 江蘇省張家港市紅十字血站(陳新)；江蘇省昆山市紅十字會血站質(zhì)量管理科(許建軍)

許建軍