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        用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測雞肉中的金剛烷胺

        2018-02-14 13:11:30樊秀敏
        畜牧獸醫(yī)科技信息 2018年3期
        關鍵詞:標板孔中金剛烷胺

        樊秀敏

        (遼寧省朝陽市建平縣畜產(chǎn)品安全監(jiān)察所,遼寧 朝陽 122400)

        金剛烷胺為禁止用于獸用的抗病毒藥品。金剛烷胺具有神經(jīng)毒性,能使中樞神經(jīng)系統(tǒng)受刺激或中毒,在食品中殘留,對心肺及腎功能不全者,還容易導致蓄積毒性。

        1 酶聯(lián)免疫試劑盒準備

        金剛烷胺酶聯(lián)免疫試劑盒(Ⅳ型)。北京維德維康生物技術有限公司生產(chǎn)。

        2 原理

        雞肉中的金剛烷胺與酶標板上固定的金剛烷胺特異性競爭抗體,當雞肉中不含金剛烷胺或金剛烷胺含量很少時,更多的抗體就會與酶標板上的金剛烷胺結(jié)合,結(jié)合物被固定在酶標板上,加入酶標記物以后,底物被催化顯色,根據(jù)顯色的深淺來判斷雞肉中金剛烷胺的含量。顯色越深,含量越少,顯色越淺,含量越多。

        3 工作液準備

        3.1 樣品提取液 1份濃縮樣品提取液加19份去離子水。

        3.2 樣品稀釋液 1份濃縮樣品稀釋液加9份去離子水。

        3.3 洗滌工作液 1份濃縮洗滌液加19份去離子水。

        3.4 酶標記物工作液 1份酶標記物濃縮液加10份酶標記物稀釋液。

        4 雞肉前處理

        4.1 稱取2±0.05g均質(zhì)后的雞肉于50mL離心管中。

        4.2 加入4mL樣品提取液充分渦動5min。

        4.3 離心機4000g以上,離心5min。

        4.4 取0.2mL上清液于干凈離心管中,加入0.2mL樣品稀釋液充分渦動10s。

        4.5 取50μL進行檢測。

        5 檢測

        5.1 根據(jù)樣品數(shù)量的多少取出相應數(shù)量的酶標板條固定在酶標板架上,要求做兩個平行樣,標記清楚標準品和樣品的滴加位置。未使用的酶標板條用自封袋密封后,立即保存期于2~8℃環(huán)境中。

        5.2 將 50μL 各標準品工作液(0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ppb)和50μL各樣品溶液分別加入對應的酶標板孔中。

        5.3 各孔均加入50μL酶標記物工作液,槍頭不能接觸到酶標板孔中的液體。

        5.4 把酶標板用蓋板膜蓋好,輕輕振蕩酶標板10s,使溶液充分混勻,在室溫(25±2℃)下避光反應30min。

        5.5 揭開蓋板膜,把酶標板孔中的液體倒凈,在每個孔中分別加入260μL洗滌工作液,充分洗滌4次,每次浸泡10~20s。

        5.6 洗滌完畢后,倒掉酶標板孔中洗滌工作液,將酶標板倒倒置于吸水紙上,輕輕拍打到拍干。(用干凈的槍頭戳破孔底的氣泡,為防止交叉污染戳氣泡時要更換槍頭)

        5.7 立即在每個孔中分別加入100μL底物A、B的混合液(底物A、B按1:1比例混合,混合液使用不能超過5min)。

        5.8 把酶標板用蓋板膜蓋好,輕輕振蕩酶標板10s,使溶液充分混勻,在室溫(25±2℃)下避光反應10min。

        5.9 揭開蓋板膜,各孔中分別加入50μL終止液,輕輕振蕩酶標板10s,使溶液充分混勻。

        5.1 0 加入終止液5min內(nèi),用酶標儀在雙波長450nm、630 nm下讀取酶標板吸光度值。

        6 注意事項

        6.1 試劑盒貯存于2~8℃環(huán)境中,切勿冷凍。

        6.2 使用試劑盒前,應仔細閱讀說明書。

        6.3 請勿使用過期試劑盒,不同批號試劑盒中的試劑不能混用。

        6.4 使用試劑盒前,將盒內(nèi)各組份放在實驗臺上恢復至室溫25±2℃。

        6.5 樣品處理前先恢復至室溫,處理完畢后應立即檢測。

        6.6 避免使用金屬類物質(zhì)盛裝和攪拌試劑。

        6.7 各試劑在使用前應搖勻,混合時避免出現(xiàn)氣泡。

        6.8 酶標板孔中加入樣品溶液、酶標記物工作液、AB混合液、終止液各步驟時間不得超過3min。

        6.9 終止液中含有強酸物質(zhì),若不小心濺到皮膚或衣物上請立即用水沖洗。

        6.1 0 檢測過程中所用槍頭不得重復使用。

        做酶聯(lián)免疫檢測實驗是一項認真謹慎的工作,把握好每一個環(huán)節(jié)都顯得尤為重要,只有嚴格按照操作要求去做,才能保證檢測結(jié)果的準確性,同時對監(jiān)控違禁藥品的使用也具有重要意義。

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