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        黃芪多糖對(duì)氣虛小鼠免疫功能的作用研究

        2014-09-03 10:25:37黃志遠(yuǎn)黃家濤
        中國當(dāng)代醫(yī)藥 2014年20期
        關(guān)鍵詞:免疫功能氣虛

        黃志遠(yuǎn)+黃家濤

        [摘要] 目的 探討黃芪多糖對(duì)氣虛小鼠免疫功能的作用。 方法 將42只雄性KM小鼠隨機(jī)分為3組:黃芪多糖高劑量組(高糖組)、低劑量組(低糖組)、空白對(duì)照組,每組14只。采用力竭游泳法和控制攝食法建立氣虛小鼠模型,造模過程中,高糖組、低糖組、空白對(duì)照組分別每天2次給予黃芪多糖0.4 mg/10 g、0.2 mg/10 g及蒸餾水0.5 ml/10 g灌胃。1周后測定小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬率、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)。 結(jié)果 高糖組的吞噬率為(96.00±0.19)%,胸腺指數(shù)為(1.89±0.16) mg/g,脾指數(shù)為(4.83±0.63) mg/g;低糖組的吞噬率為(91.00±0.30)%,胸腺指數(shù)為(1.64±0.37) mg/g,脾指數(shù)為(4.32±0.77) mg/g;對(duì)照組吞噬率為(45.00±0.26)%,胸腺指數(shù)為(1.57±0.34) mg/g,脾指數(shù)為(4.17±0.43) mg/g。與空白對(duì)照組比較,高糖組與低糖組的巨噬細(xì)胞吞噬率、胸腺指數(shù)及脾指數(shù)顯著增高(P<0.05)。 結(jié)論 黃芪多糖能增強(qiáng)氣虛小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬能力,促進(jìn)胸腺和脾臟的恢復(fù),改善氣虛小鼠的非特異免疫功能。

        [關(guān)鍵詞] 黃芪多糖;氣虛;免疫功能

        [中圖分類號(hào)] R-05 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721(2014)07(b)-0014-04

        黃芪別名綿芪、綿黃芪,為豆科黃芪屬植物膜莢黃芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge 及蒙古黃芪Astragalus membranaceus var.mongholicus (Bunge) Hsiap [A. mongholicus Bunge] 膜莢的根,具有補(bǔ)氣升陽、利水消腫和托瘡生肌等功效。黃芪主要含有黃芪多糖、多種氨基酸、多種黃酮類和苷類、多種微量元素等生物活性物質(zhì)。其中多糖的免疫活性很突出[1],為了進(jìn)一步研究黃芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)的免疫調(diào)節(jié)作用,本研究探討了APS對(duì)氣虛小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力及胸腺、脾的影響。

        1 材料與方法

        1.1 藥品

        黃芪藥材,購于廣州市藥材公司中藥飲片廠,批號(hào):YIA1A0001,經(jīng)鑒定為黃芪。

        1.2 主要儀器和試劑

        TGL-16高速臺(tái)式冷凍離心機(jī),廣州訊成科學(xué)儀器開發(fā)有限公司;LD5-2A低速離心機(jī),北京醫(yī)用離心機(jī)廠;分析天平,廣州湘儀機(jī)電設(shè)備有限公司;JJ500型電子天平,常熟市雙杰測試儀器廠;WFJ720型可見光光度計(jì),上海尤尼柯儀器有限公司;SMART生物顯微鏡,重慶奧特光學(xué)儀器有限公司。

        X-5樹脂,安徽三星樹脂科技有限公司生產(chǎn);95%乙醇,三氯乙酸,6%苯酚,硫酸(分析純),乙醚,丙酮;淀粉肉湯液:將肉湯培養(yǎng)基3 g加于100 ml蒸餾水煮沸溶解,再加入可溶性淀粉1 g,煮沸溶解,待冷卻后加入1滴臺(tái)盼藍(lán),混勻后煮沸滅菌,置4℃保存,使用時(shí)溫浴溶解;2%雞紅細(xì)胞懸液:實(shí)驗(yàn)前臨時(shí)取雞血用肝素鈉抗凝,離心棄去上清液,用生理鹽水洗滌3次后得雞血紅細(xì)胞,取1 ml加到50 ml生理鹽水即可。

        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

        健康KM成年小鼠,SPF級(jí),體重20~50 g,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):SCXK(粵)2008-0002,合格證號(hào):0070152。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF實(shí)驗(yàn)室條件嚴(yán)格控制,溫度20~25℃,日溫度差≤3℃。濕度為40%~50%,空氣清潔度10 000級(jí),14 h黑暗,人工光照照明(上午8:00~下午6:00)。飼養(yǎng)期給予SPF鼠飼料,添加足量飼料,引用蒸餾水。

        1.4 方法

        1.4.1 多糖試劑的制備

        1.4.1.1 APS分離純化 以黃芪質(zhì)量10倍水量煎煮,煎煮3次,合并煎煮液,上X-5樹脂柱,收集流出液并濃縮,加95%乙醇至使乙醇占總重量的70%,離心后棄去上清液,沉淀用蒸餾水溶解,加液體體積4%三氯乙酸,離心后取上清液,再次加95%乙醇至使乙醇占總重量的70%,離心后取沉淀,按照95%乙醇→丙酮→乙醚的順序洗滌得粗多糖。

        1.4.1.2 多糖含量測定 采用苯酚-硫酸法。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:精密稱取充分干燥至恒重10 mg葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品,加去離子水溶解,配制100 ml標(biāo)準(zhǔn)溶液,標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.1 g/L,分別吸取配制好的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 ml于10 ml容量瓶中,分別加去離子水至2 ml,加入5%苯酚溶液1 ml,搖勻后迅速加入5 ml濃硫酸顯色,振蕩5 min,在沸水浴上加熱15 min,取出后于冷水浴中冷卻30 min,以空白為參照,用紫外分光光度計(jì)在490 nm處測吸光度(A)(表1),標(biāo)準(zhǔn)曲線:A=21.371C+0.1366,R2=0.9943,表明葡萄糖濃度(C)在0.005~0.0225 mg/ml線性關(guān)系良好。

        稱取粗多糖產(chǎn)品0.10 g,配制成濃度為1 mg/ml的樣品溶液,準(zhǔn)確移取5 ml樣品溶液稀釋到0.1 mg/ml,取2 ml稀釋后的樣品溶液加入5%苯酚溶液1 ml,搖勻后迅速加入5 ml濃硫酸顯色,振蕩5 min,在沸水浴上加熱15 min,取出后于冷水浴中冷卻30 min,按照苯酚-硫酸法于490 nm處測定其A值,代入線性回歸方程計(jì)算濃度,計(jì)算出粗多糖中的糖百分含量為41%,其中A=0.346。

        1.4.1.3 APS試劑配制 將粗多糖溶解成0.8、0.4 mg/ml水溶液,作為高糖溶液和低糖溶液。

        1.4.2 分組、造模與給藥

        將小鼠完全隨機(jī)分為APS高劑量組(高糖組)、低劑量組(低糖組)、空白對(duì)照組,每組14只。參考文獻(xiàn)[2]的方法,采用力竭游泳和控制攝食法建立氣虛小鼠模型。小鼠置于水深50 cm的玻璃箱水池中,水溫(37±1)℃,要求小鼠沉入水底,經(jīng)10 s后仍不能返回水面為力竭標(biāo)準(zhǔn)。每天均游泳至力竭并隔日喂食。其中高糖組每天2次按0.4 mg/10 g劑量灌服高糖溶液;低糖組每天2次按0.2 mg/10 g劑量灌服低糖溶液;對(duì)照組每天2次灌服蒸餾水0.5 ml/10 g,持續(xù)1周。

        1.4.3 指標(biāo)測定

        1.4.3.1 巨噬細(xì)胞吞噬能力 實(shí)驗(yàn)的第5天腹腔注射1 ml淀粉肉湯液,以刺激小鼠的腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞。到第7天往其腹腔注射2%雞紅細(xì)胞懸液1 ml,然后輕揉小鼠腹部使雞細(xì)胞分散。30 min后通過頸椎脫臼處死實(shí)驗(yàn)小鼠,并向腹腔注射0.5 ml生理鹽水,輕揉小鼠腹部,使其腹腔液稀釋。用吸管吸取腹腔液,制臨時(shí)裝片并通過顯微鏡觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力[3]。吞噬率=有吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞個(gè)數(shù)/巨噬細(xì)胞的總個(gè)數(shù),平均吞噬個(gè)數(shù)=已吞噬的雞紅細(xì)胞總量/巨噬細(xì)胞的總個(gè)數(shù)。

        1.4.3.2 胸腺指數(shù)及脾指數(shù) 頸椎脫臼處死小鼠后,摘取脾臟及胸腺并稱重。參照文獻(xiàn)[4],以脾臟重量(mg)、胸腺重量(mg)分別與小鼠體重(g)的比值為脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組比較采用單因素方差分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 3組巨噬細(xì)胞吞噬能力的比較

        與空白對(duì)照組比較,高糖組與低糖組的吞噬率及平均吞噬個(gè)數(shù)顯著增高(P<0.05)。高糖組吞噬率>低糖組吞噬率>對(duì)照組吞噬率,高糖組平均吞噬個(gè)數(shù)>低糖組平均吞噬個(gè)數(shù)>對(duì)照組平均吞噬個(gè)數(shù),表明APS可增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力(表2、圖1)。

        2.2 3組胸腺指數(shù)及脾指數(shù)的比較

        與空白對(duì)照組比較,高糖組與低糖組的胸腺指數(shù)及脾指數(shù)顯著增高(P<0.05)。高多糖組胸腺指數(shù)>低糖組胸腺指數(shù)>對(duì)照組胸腺指數(shù),高多糖組脾指數(shù)>低糖組脾指數(shù)>對(duì)照組脾指數(shù)(表3)。

        3 討論

        氣虛證是臨床上常見的證候,常有少氣懶言、語言低微、倦怠無力、食少便溏、自汗等臨床表現(xiàn)?!疤撜哐a(bǔ)之”,氣虛則補(bǔ)氣。黃芪味甘性微溫,具有補(bǔ)氣升陽、固表、利水消腫等功效,臨床多用于氣虛自汗、脾、肺氣虛等證。文獻(xiàn)表明黃芪具有較廣泛的藥理作用,有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),正常大鼠飼以含黃芪粉末的食物1周后,測其耗氧量比服藥前逐漸增加,能加強(qiáng)正常心臟收縮,對(duì)哀竭的心臟有強(qiáng)心作用,能使冠狀血管和腎臟血管擴(kuò)張,并使全身末梢血管擴(kuò)張,皮膚血液循環(huán)暢順,使高血壓患者血壓下降。利尿試驗(yàn)證明黃芪有中等的利尿作用。實(shí)驗(yàn)證明黃芪對(duì)防止和治療大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍有一定的作用[5]。

        中藥多糖具有增強(qiáng)單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)、激活補(bǔ)體系統(tǒng)的作用,從而調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能[6-12]。APS是黃芪的主要有效成分,有提高機(jī)體免疫力的作用;對(duì)垂體后葉素引起的心肌缺血有保護(hù)作用,并明顯對(duì)抗BaCl2誘發(fā)的大鼠心律失常和CHCl2誘發(fā)的小鼠室顫;還有雙向調(diào)節(jié)血糖的作用,可使葡萄糖負(fù)荷后的血糖水平顯著下降;對(duì)60Co照射后小鼠損傷的脾臟組織有明顯的恢復(fù)作用。

        氣虛證動(dòng)物模型主要根據(jù)導(dǎo)致氣虛的因素建立。中醫(yī)理論認(rèn)為氣虛證是由久病、氣耗、年事衰老、飲食失調(diào)等所致[2],目前氣虛模型建立的方法主要用寒冷刺激、強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)、減少食量、大黃泄瀉等方法制成。力竭運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致疲勞,屬中醫(yī)的“勞倦”范疇,所謂“勞者氣耗”(《素問·舉痛論》),“力竭游泳”刺激因素符合導(dǎo)致氣虛的病機(jī),而且這種造模方法比較簡單,具有可控性強(qiáng)和重復(fù)穩(wěn)定的特點(diǎn)。同樣,在運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)臨床實(shí)踐中,發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)員的運(yùn)動(dòng)性疲勞與中醫(yī)氣虛證一致。有研究顯示,運(yùn)動(dòng)員在運(yùn)動(dòng)疲勞前后脈圖的變化情況,發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)員疲勞后表現(xiàn)出的脈圖與中醫(yī)氣虛證脈象較為一致[13]。本研究結(jié)果顯示,通過力竭游泳并隔日喂食到一定程度后,經(jīng)過一定時(shí)間后就出現(xiàn)中醫(yī)氣虛證的癥狀。經(jīng)解剖部分臟器萎縮,就本次實(shí)驗(yàn)觀察的胸腺,脾質(zhì)量均比正常小鼠略輕,而胸腺是機(jī)體的免疫中樞器官,擔(dān)負(fù)著T淋巴細(xì)胞的發(fā)育、成熟、分化等作用,與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)胸腺、脾指數(shù)降低和巨噬細(xì)胞吞噬能力下降,表明氣虛小鼠存在免疫功能下降。APS對(duì)上述指標(biāo)有顯著改善作用,表明APS具有改善機(jī)體免疫功能的作用。

        [參考文獻(xiàn)]

        [1] 陳丹丹,宋亮,劉麗娟.黃芪多糖對(duì)肺氣虛小鼠免疫調(diào)節(jié)作用[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,30(3):35.

        [2] 陳學(xué)東,田道法.氣虛證動(dòng)物模型研究進(jìn)展及氣虛型鼻病動(dòng)物模型建立的探討[A]//全國中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科學(xué)術(shù)會(huì)論文匯編[C].2004.

        [3] 余寅,顧軍.觀察小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬活動(dòng)[J].生物學(xué)教學(xué),2001,26(1):34.

        [4] 劉繼平,許海,胡銳,等.梔子油對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤生長及胸腺、脾指數(shù)的影響[J].西北藥學(xué)雜志,2010,25(2):112-114.

        [5] 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(上冊(cè))[J].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,1996.

        [6] 劉杰磨,費(fèi)櫻.戴氏蟲草和粉被蟲草多糖對(duì)巨噬細(xì)胞等活性的影響[J].免疫學(xué)雜志,2001,17(3):189.

        [7] 袁靜,王平全.香菇多糖抗腫瘤作用的研究進(jìn)展[J].中國藥房,1999,10(5):233.

        [8] 張哲文,魏虎來,蘇海翔.硒酸酯多糖的免疫調(diào)節(jié)與抗腫瘤作用[J].蘭州大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2005,31(2):89-91.

        [9] 鄭堯,何景華,高建華,等.甘草多糖對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)刊,2003,21(2):254-255.

        [10] 石磊,壬勇,石勇,等.虎眼萬年青多糖的原子力顯微鏡觀察[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2003,29(1):32-35.

        [11] 陳金煙,盧政輝.真菌多糖的免疫效應(yīng)抗腫瘤作用機(jī)理的探討[J].福建輕紡,2002,(4):427.

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        [13] 周夢圣,李秋蓮.模擬中醫(yī)氣虛動(dòng)物模型的研究[J].中醫(yī)雜志,1989,30(9):41.

        (收稿日期:2014-05-12 本文編輯:林利利)

        1.4.3 指標(biāo)測定

        1.4.3.1 巨噬細(xì)胞吞噬能力 實(shí)驗(yàn)的第5天腹腔注射1 ml淀粉肉湯液,以刺激小鼠的腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞。到第7天往其腹腔注射2%雞紅細(xì)胞懸液1 ml,然后輕揉小鼠腹部使雞細(xì)胞分散。30 min后通過頸椎脫臼處死實(shí)驗(yàn)小鼠,并向腹腔注射0.5 ml生理鹽水,輕揉小鼠腹部,使其腹腔液稀釋。用吸管吸取腹腔液,制臨時(shí)裝片并通過顯微鏡觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力[3]。吞噬率=有吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞個(gè)數(shù)/巨噬細(xì)胞的總個(gè)數(shù),平均吞噬個(gè)數(shù)=已吞噬的雞紅細(xì)胞總量/巨噬細(xì)胞的總個(gè)數(shù)。

        1.4.3.2 胸腺指數(shù)及脾指數(shù) 頸椎脫臼處死小鼠后,摘取脾臟及胸腺并稱重。參照文獻(xiàn)[4],以脾臟重量(mg)、胸腺重量(mg)分別與小鼠體重(g)的比值為脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組比較采用單因素方差分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 3組巨噬細(xì)胞吞噬能力的比較

        與空白對(duì)照組比較,高糖組與低糖組的吞噬率及平均吞噬個(gè)數(shù)顯著增高(P<0.05)。高糖組吞噬率>低糖組吞噬率>對(duì)照組吞噬率,高糖組平均吞噬個(gè)數(shù)>低糖組平均吞噬個(gè)數(shù)>對(duì)照組平均吞噬個(gè)數(shù),表明APS可增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力(表2、圖1)。

        2.2 3組胸腺指數(shù)及脾指數(shù)的比較

        與空白對(duì)照組比較,高糖組與低糖組的胸腺指數(shù)及脾指數(shù)顯著增高(P<0.05)。高多糖組胸腺指數(shù)>低糖組胸腺指數(shù)>對(duì)照組胸腺指數(shù),高多糖組脾指數(shù)>低糖組脾指數(shù)>對(duì)照組脾指數(shù)(表3)。

        3 討論

        氣虛證是臨床上常見的證候,常有少氣懶言、語言低微、倦怠無力、食少便溏、自汗等臨床表現(xiàn)?!疤撜哐a(bǔ)之”,氣虛則補(bǔ)氣。黃芪味甘性微溫,具有補(bǔ)氣升陽、固表、利水消腫等功效,臨床多用于氣虛自汗、脾、肺氣虛等證。文獻(xiàn)表明黃芪具有較廣泛的藥理作用,有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),正常大鼠飼以含黃芪粉末的食物1周后,測其耗氧量比服藥前逐漸增加,能加強(qiáng)正常心臟收縮,對(duì)哀竭的心臟有強(qiáng)心作用,能使冠狀血管和腎臟血管擴(kuò)張,并使全身末梢血管擴(kuò)張,皮膚血液循環(huán)暢順,使高血壓患者血壓下降。利尿試驗(yàn)證明黃芪有中等的利尿作用。實(shí)驗(yàn)證明黃芪對(duì)防止和治療大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍有一定的作用[5]。

        中藥多糖具有增強(qiáng)單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)、激活補(bǔ)體系統(tǒng)的作用,從而調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能[6-12]。APS是黃芪的主要有效成分,有提高機(jī)體免疫力的作用;對(duì)垂體后葉素引起的心肌缺血有保護(hù)作用,并明顯對(duì)抗BaCl2誘發(fā)的大鼠心律失常和CHCl2誘發(fā)的小鼠室顫;還有雙向調(diào)節(jié)血糖的作用,可使葡萄糖負(fù)荷后的血糖水平顯著下降;對(duì)60Co照射后小鼠損傷的脾臟組織有明顯的恢復(fù)作用。

        氣虛證動(dòng)物模型主要根據(jù)導(dǎo)致氣虛的因素建立。中醫(yī)理論認(rèn)為氣虛證是由久病、氣耗、年事衰老、飲食失調(diào)等所致[2],目前氣虛模型建立的方法主要用寒冷刺激、強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)、減少食量、大黃泄瀉等方法制成。力竭運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致疲勞,屬中醫(yī)的“勞倦”范疇,所謂“勞者氣耗”(《素問·舉痛論》),“力竭游泳”刺激因素符合導(dǎo)致氣虛的病機(jī),而且這種造模方法比較簡單,具有可控性強(qiáng)和重復(fù)穩(wěn)定的特點(diǎn)。同樣,在運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)臨床實(shí)踐中,發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)員的運(yùn)動(dòng)性疲勞與中醫(yī)氣虛證一致。有研究顯示,運(yùn)動(dòng)員在運(yùn)動(dòng)疲勞前后脈圖的變化情況,發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)員疲勞后表現(xiàn)出的脈圖與中醫(yī)氣虛證脈象較為一致[13]。本研究結(jié)果顯示,通過力竭游泳并隔日喂食到一定程度后,經(jīng)過一定時(shí)間后就出現(xiàn)中醫(yī)氣虛證的癥狀。經(jīng)解剖部分臟器萎縮,就本次實(shí)驗(yàn)觀察的胸腺,脾質(zhì)量均比正常小鼠略輕,而胸腺是機(jī)體的免疫中樞器官,擔(dān)負(fù)著T淋巴細(xì)胞的發(fā)育、成熟、分化等作用,與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)胸腺、脾指數(shù)降低和巨噬細(xì)胞吞噬能力下降,表明氣虛小鼠存在免疫功能下降。APS對(duì)上述指標(biāo)有顯著改善作用,表明APS具有改善機(jī)體免疫功能的作用。

        [參考文獻(xiàn)]

        [1] 陳丹丹,宋亮,劉麗娟.黃芪多糖對(duì)肺氣虛小鼠免疫調(diào)節(jié)作用[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,30(3):35.

        [2] 陳學(xué)東,田道法.氣虛證動(dòng)物模型研究進(jìn)展及氣虛型鼻病動(dòng)物模型建立的探討[A]//全國中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科學(xué)術(shù)會(huì)論文匯編[C].2004.

        [3] 余寅,顧軍.觀察小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬活動(dòng)[J].生物學(xué)教學(xué),2001,26(1):34.

        [4] 劉繼平,許海,胡銳,等.梔子油對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤生長及胸腺、脾指數(shù)的影響[J].西北藥學(xué)雜志,2010,25(2):112-114.

        [5] 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(上冊(cè))[J].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,1996.

        [6] 劉杰磨,費(fèi)櫻.戴氏蟲草和粉被蟲草多糖對(duì)巨噬細(xì)胞等活性的影響[J].免疫學(xué)雜志,2001,17(3):189.

        [7] 袁靜,王平全.香菇多糖抗腫瘤作用的研究進(jìn)展[J].中國藥房,1999,10(5):233.

        [8] 張哲文,魏虎來,蘇海翔.硒酸酯多糖的免疫調(diào)節(jié)與抗腫瘤作用[J].蘭州大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2005,31(2):89-91.

        [9] 鄭堯,何景華,高建華,等.甘草多糖對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)刊,2003,21(2):254-255.

        [10] 石磊,壬勇,石勇,等.虎眼萬年青多糖的原子力顯微鏡觀察[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2003,29(1):32-35.

        [11] 陳金煙,盧政輝.真菌多糖的免疫效應(yīng)抗腫瘤作用機(jī)理的探討[J].福建輕紡,2002,(4):427.

        [12] 任莉莉,魏影非,杜惠蘭,等.人參抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].中成藥,2005,27(8):947.

        [13] 周夢圣,李秋蓮.模擬中醫(yī)氣虛動(dòng)物模型的研究[J].中醫(yī)雜志,1989,30(9):41.

        (收稿日期:2014-05-12 本文編輯:林利利)

        1.4.3 指標(biāo)測定

        1.4.3.1 巨噬細(xì)胞吞噬能力 實(shí)驗(yàn)的第5天腹腔注射1 ml淀粉肉湯液,以刺激小鼠的腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞。到第7天往其腹腔注射2%雞紅細(xì)胞懸液1 ml,然后輕揉小鼠腹部使雞細(xì)胞分散。30 min后通過頸椎脫臼處死實(shí)驗(yàn)小鼠,并向腹腔注射0.5 ml生理鹽水,輕揉小鼠腹部,使其腹腔液稀釋。用吸管吸取腹腔液,制臨時(shí)裝片并通過顯微鏡觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力[3]。吞噬率=有吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞個(gè)數(shù)/巨噬細(xì)胞的總個(gè)數(shù),平均吞噬個(gè)數(shù)=已吞噬的雞紅細(xì)胞總量/巨噬細(xì)胞的總個(gè)數(shù)。

        1.4.3.2 胸腺指數(shù)及脾指數(shù) 頸椎脫臼處死小鼠后,摘取脾臟及胸腺并稱重。參照文獻(xiàn)[4],以脾臟重量(mg)、胸腺重量(mg)分別與小鼠體重(g)的比值為脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組比較采用單因素方差分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 3組巨噬細(xì)胞吞噬能力的比較

        與空白對(duì)照組比較,高糖組與低糖組的吞噬率及平均吞噬個(gè)數(shù)顯著增高(P<0.05)。高糖組吞噬率>低糖組吞噬率>對(duì)照組吞噬率,高糖組平均吞噬個(gè)數(shù)>低糖組平均吞噬個(gè)數(shù)>對(duì)照組平均吞噬個(gè)數(shù),表明APS可增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力(表2、圖1)。

        2.2 3組胸腺指數(shù)及脾指數(shù)的比較

        與空白對(duì)照組比較,高糖組與低糖組的胸腺指數(shù)及脾指數(shù)顯著增高(P<0.05)。高多糖組胸腺指數(shù)>低糖組胸腺指數(shù)>對(duì)照組胸腺指數(shù),高多糖組脾指數(shù)>低糖組脾指數(shù)>對(duì)照組脾指數(shù)(表3)。

        3 討論

        氣虛證是臨床上常見的證候,常有少氣懶言、語言低微、倦怠無力、食少便溏、自汗等臨床表現(xiàn)?!疤撜哐a(bǔ)之”,氣虛則補(bǔ)氣。黃芪味甘性微溫,具有補(bǔ)氣升陽、固表、利水消腫等功效,臨床多用于氣虛自汗、脾、肺氣虛等證。文獻(xiàn)表明黃芪具有較廣泛的藥理作用,有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),正常大鼠飼以含黃芪粉末的食物1周后,測其耗氧量比服藥前逐漸增加,能加強(qiáng)正常心臟收縮,對(duì)哀竭的心臟有強(qiáng)心作用,能使冠狀血管和腎臟血管擴(kuò)張,并使全身末梢血管擴(kuò)張,皮膚血液循環(huán)暢順,使高血壓患者血壓下降。利尿試驗(yàn)證明黃芪有中等的利尿作用。實(shí)驗(yàn)證明黃芪對(duì)防止和治療大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍有一定的作用[5]。

        中藥多糖具有增強(qiáng)單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)、激活補(bǔ)體系統(tǒng)的作用,從而調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能[6-12]。APS是黃芪的主要有效成分,有提高機(jī)體免疫力的作用;對(duì)垂體后葉素引起的心肌缺血有保護(hù)作用,并明顯對(duì)抗BaCl2誘發(fā)的大鼠心律失常和CHCl2誘發(fā)的小鼠室顫;還有雙向調(diào)節(jié)血糖的作用,可使葡萄糖負(fù)荷后的血糖水平顯著下降;對(duì)60Co照射后小鼠損傷的脾臟組織有明顯的恢復(fù)作用。

        氣虛證動(dòng)物模型主要根據(jù)導(dǎo)致氣虛的因素建立。中醫(yī)理論認(rèn)為氣虛證是由久病、氣耗、年事衰老、飲食失調(diào)等所致[2],目前氣虛模型建立的方法主要用寒冷刺激、強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)、減少食量、大黃泄瀉等方法制成。力竭運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致疲勞,屬中醫(yī)的“勞倦”范疇,所謂“勞者氣耗”(《素問·舉痛論》),“力竭游泳”刺激因素符合導(dǎo)致氣虛的病機(jī),而且這種造模方法比較簡單,具有可控性強(qiáng)和重復(fù)穩(wěn)定的特點(diǎn)。同樣,在運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)臨床實(shí)踐中,發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)員的運(yùn)動(dòng)性疲勞與中醫(yī)氣虛證一致。有研究顯示,運(yùn)動(dòng)員在運(yùn)動(dòng)疲勞前后脈圖的變化情況,發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)員疲勞后表現(xiàn)出的脈圖與中醫(yī)氣虛證脈象較為一致[13]。本研究結(jié)果顯示,通過力竭游泳并隔日喂食到一定程度后,經(jīng)過一定時(shí)間后就出現(xiàn)中醫(yī)氣虛證的癥狀。經(jīng)解剖部分臟器萎縮,就本次實(shí)驗(yàn)觀察的胸腺,脾質(zhì)量均比正常小鼠略輕,而胸腺是機(jī)體的免疫中樞器官,擔(dān)負(fù)著T淋巴細(xì)胞的發(fā)育、成熟、分化等作用,與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)胸腺、脾指數(shù)降低和巨噬細(xì)胞吞噬能力下降,表明氣虛小鼠存在免疫功能下降。APS對(duì)上述指標(biāo)有顯著改善作用,表明APS具有改善機(jī)體免疫功能的作用。

        [參考文獻(xiàn)]

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        [11] 陳金煙,盧政輝.真菌多糖的免疫效應(yīng)抗腫瘤作用機(jī)理的探討[J].福建輕紡,2002,(4):427.

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        [13] 周夢圣,李秋蓮.模擬中醫(yī)氣虛動(dòng)物模型的研究[J].中醫(yī)雜志,1989,30(9):41.

        (收稿日期:2014-05-12 本文編輯:林利利)

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