易璐莎

摘 要 麥角隱亭為D-麥角酸與一環(huán)狀三肽籍酰胺鍵相連而成，半合成麥角環(huán)肽是一種具有可行性的工藝方法，本研究利用簡單氨基酸，經(jīng)合成環(huán)二肽，再與非經(jīng)典氨基酸環(huán)合成三肽。

關(guān)鍵詞 麥角隱亭；環(huán)二肽；合成

中圖分類號：O629 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1671-7597（2014）13-0068-01

麥角隱亭是麥角菌產(chǎn)生的一系列有藥用價值的麥角堿，常用于治療高血壓和周圍血管組織的疾病。目前主要由發(fā)酵法生產(chǎn)，但是發(fā)酵組分復(fù)雜，提取分離方法繁瑣，價格偏高，影響了該類藥物的廣泛使用。全合成步驟繁復(fù)，不具生產(chǎn)價值。

用發(fā)酵生產(chǎn)的麥角酸作母體半合成肽麥角堿，是一種具有應(yīng)用前景的制造工藝方法，作為半合成麥角肽堿項目的一部分，本研究意在探索一條中間體環(huán)二肽的簡單合成方法，以適合工業(yè)生產(chǎn)的要求。

1 探究思路

有機合成中常通過引入叔丁氧羰基（即Boc）保護基團，特別運用于氨基酸的氨基保護。合成多肽時，該保護基團的脫除條件溫和，且反應(yīng)產(chǎn)物的分離提純較之使用其他類型的氨基酸保護劑容易。本項目通過采取對N進行Boc保護的方法以增加環(huán)二肽的合成產(chǎn)量，分別是合成N-Boc-L-Pro，和N-Boc-L-Leu兩種思路。

圖1 環(huán)二肽的合成路線一

圖2 環(huán)二肽的合成路線二

2 實驗過程

1）N-Boc-L-Pro的制備。

將L-Pro加入燒瓶中，溶于丙酮/水（2：1，3 mL）中，加入三乙胺（pH9～10），室溫下攪拌30 min，之后加入

（Boc）2O，室溫下攪拌。TLC跟蹤監(jiān)測完全反應(yīng)后，懸蒸除去丙酮。加入1 mL水對剩余物稀釋，異丙醚萃取除去過量的（Boc）2O。水層用3%稀HCL酸化至pH=3后，用乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯層，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，濾除Na2SO4，蒸干溶劑，得白色固體。

分析：計算得N-Boc-L-Pro的收率為65.26%。

2）L-Leu甲酯鹽酸鹽的制備。

在100 mL的三頸瓶內(nèi)裝入2.0gL-Leu，加入30 mL無水甲醇攪拌溶解，冰鹽浴冷卻至-10℃，攪拌下緩慢滴加二氯亞砜，滴加過程中嚴(yán)控溫度在0℃以下。滴加完畢后，繼續(xù)放在冰鹽浴內(nèi)攪拌30 min，移去冰鹽浴，室溫下攪拌48小時。用TLC跟蹤監(jiān)測反應(yīng)完全后，蒸除甲醇和二氯亞砜，得膏狀白色固體。在43℃熱水浴用少量甲醇溶解，再滴加乙酸乙酯，置于冰箱中結(jié)晶。沉淀過濾后稱重得L-Leu甲酯鹽酸鹽1.88 g，L-Leu甲酯鹽酸鹽的收率為67.14%。

3）N-Boc-L-Pro-L-亮氨酸甲酯的合成。

將氨基酸鹽酸鹽堿化成甲酯，用三乙胺除去鹽酸鹽，乙酸乙酯做溶劑萃取，保留液體。將N-Boc-L-Pro和N--甲基嗎啉溶于二氯甲烷（10 mL）中，0℃下緩慢滴加氯甲酸乙酯，攪拌10 min。之后，向其中緩慢滴加L-亮氨酸甲酯，滴加完畢后，撤去冰浴，室溫下攪拌16 h。TLC監(jiān)測至反應(yīng)完全，混合液用二氯甲烷進行稀釋，之后用飽和食鹽水進行洗滌。分離出有機相后進行干燥，旋蒸除去溶劑。

4）環(huán)二肽（L-Pro-L-Leu）的合成。

將N-Boc-L- Pro -L-亮氨酸甲酯溶于無水二氯甲烷中，室溫下向其中加入TFA，攪拌反應(yīng)3 h。之后，蒸干溶劑。所得產(chǎn)物充分溶于2-丁醇：甲苯（4：2 mL）中，加入三乙胺?；旌衔锛訜嶂粱亓?6 h，蒸干溶劑后，沒有發(fā)現(xiàn)有白色固體生成，合成環(huán)二肽失敗。

分析：N-Boc-L-脯氨酸-L-亮氨酸甲酯不容易氨解閉環(huán)。改換N-Boc-L-Leu路線。

5）N-BOC-L-Leu的合成。

將L-Leu溶于23ml丙酮與水的體系（2：1），水浴25℃下攪拌至完全溶解，之后向反應(yīng)瓶中加入三乙胺（pH9-10），繼續(xù)水浴下攪拌，用丙酮：水（2：1）溶解（Boc）2O，緩慢滴加，監(jiān)測溫度使其不變，維持反應(yīng)液的pH8-9。TCL監(jiān)測反應(yīng)完全。減壓蒸去丙酮，用乙醚等量萃取3次，用3%HCL調(diào)節(jié)pH為3，EA等量萃取3次，飽和Nacl溶液洗滌，再用無水硫酸鈉干燥，蒸干EA，用EA-Pet（1：5）結(jié)晶，得白色晶體0.98 g。

6）L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽的合成。

在反應(yīng)瓶中加入甲醇和L-Pro，冰鹽浴下充分?jǐn)嚢?，緩慢滴加二氯亞砜，控制流速保證反應(yīng)溫度在-10℃以下，滴加完畢后，繼續(xù)攪拌至液體透明，撤去冰鹽浴，繼續(xù)攪拌，TLC監(jiān)控（EA：MeoH=3：1）反應(yīng)完全后，減壓濃縮，反復(fù)加無水甲醇除去濃縮液中的二氯亞砜，充分洗滌3次，再加少量甲醇溶解濃縮液，加入適量乙酸乙酯，冷卻觀察結(jié)晶。

結(jié)果：多次實驗后未得到結(jié)晶。

分析：溫度控制不穩(wěn)定會影響反應(yīng)進度；必須使用無水甲醇，二氯亞砜遇水分解；得到的L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽中可能存在雜質(zhì)，或其本身可能不易結(jié)晶。

7）N-Boc-L-亮氨酸-L-脯氨酸甲酯的合成。

將N-Boc-L-亮氨酸和NMM（N-甲基嗎啉）溶于二氯甲烷中，0℃下攪拌，緩慢滴加氯甲酸乙酯。只會向其中緩慢滴加脯氨酸甲酯的油狀物，N-Boc-L-亮氨酸使用二氯甲烷溶解。滴加完畢后，撤去冰浴，室溫下攪拌16 h。TLC監(jiān)測至反應(yīng)完全，混合液用二氯甲烷進行稀釋，之后用飽和食鹽水進行洗滌。分離出有機相后進行干燥，旋蒸除去溶劑。硅膠柱層析分離純化得到產(chǎn)物0.21 g。

3 結(jié)束語

半合成麥角環(huán)肽是一種具有可行性的工藝方法，本研究利用簡單氨基酸，探究合成環(huán)二肽的方法，實驗方法可參考路線和工藝較多，具有可操作性，對麥角堿類藥物的半合成研究和實際生產(chǎn)具有一定的指導(dǎo)意義。

參考文獻

[1]武振羽，張韞宏，王輝，等.環(huán)肽合成進展[J].化學(xué)進展，2002，14（2）：113-20.

[2]劉洪強，林浩，田桂杰，等.Mannich型環(huán)肽的液相及固相合成比較[J].有機化學(xué)，2003，23（8）：804-808.

[3]閆乾順，李江，方壟.環(huán)肽的設(shè)計與合成[J].寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，27（2）：150-151.

[4]張莉，李競成，李聚源，高利華.環(huán)肽合成的試驗研究[J].大連民族學(xué)院報，2006（3）：47-49.endprint

摘 要 麥角隱亭為D-麥角酸與一環(huán)狀三肽籍酰胺鍵相連而成，半合成麥角環(huán)肽是一種具有可行性的工藝方法，本研究利用簡單氨基酸，經(jīng)合成環(huán)二肽，再與非經(jīng)典氨基酸環(huán)合成三肽。

關(guān)鍵詞 麥角隱亭；環(huán)二肽；合成

中圖分類號：O629 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1671-7597（2014）13-0068-01

麥角隱亭是麥角菌產(chǎn)生的一系列有藥用價值的麥角堿，常用于治療高血壓和周圍血管組織的疾病。目前主要由發(fā)酵法生產(chǎn)，但是發(fā)酵組分復(fù)雜，提取分離方法繁瑣，價格偏高，影響了該類藥物的廣泛使用。全合成步驟繁復(fù)，不具生產(chǎn)價值。

用發(fā)酵生產(chǎn)的麥角酸作母體半合成肽麥角堿，是一種具有應(yīng)用前景的制造工藝方法，作為半合成麥角肽堿項目的一部分，本研究意在探索一條中間體環(huán)二肽的簡單合成方法，以適合工業(yè)生產(chǎn)的要求。

1 探究思路

有機合成中常通過引入叔丁氧羰基（即Boc）保護基團，特別運用于氨基酸的氨基保護。合成多肽時，該保護基團的脫除條件溫和，且反應(yīng)產(chǎn)物的分離提純較之使用其他類型的氨基酸保護劑容易。本項目通過采取對N進行Boc保護的方法以增加環(huán)二肽的合成產(chǎn)量，分別是合成N-Boc-L-Pro，和N-Boc-L-Leu兩種思路。

圖1 環(huán)二肽的合成路線一

圖2 環(huán)二肽的合成路線二

2 實驗過程

1）N-Boc-L-Pro的制備。

將L-Pro加入燒瓶中，溶于丙酮/水（2：1，3 mL）中，加入三乙胺（pH9～10），室溫下攪拌30 min，之后加入

（Boc）2O，室溫下攪拌。TLC跟蹤監(jiān)測完全反應(yīng)后，懸蒸除去丙酮。加入1 mL水對剩余物稀釋，異丙醚萃取除去過量的（Boc）2O。水層用3%稀HCL酸化至pH=3后，用乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯層，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，濾除Na2SO4，蒸干溶劑，得白色固體。

分析：計算得N-Boc-L-Pro的收率為65.26%。

2）L-Leu甲酯鹽酸鹽的制備。

在100 mL的三頸瓶內(nèi)裝入2.0gL-Leu，加入30 mL無水甲醇攪拌溶解，冰鹽浴冷卻至-10℃，攪拌下緩慢滴加二氯亞砜，滴加過程中嚴(yán)控溫度在0℃以下。滴加完畢后，繼續(xù)放在冰鹽浴內(nèi)攪拌30 min，移去冰鹽浴，室溫下攪拌48小時。用TLC跟蹤監(jiān)測反應(yīng)完全后，蒸除甲醇和二氯亞砜，得膏狀白色固體。在43℃熱水浴用少量甲醇溶解，再滴加乙酸乙酯，置于冰箱中結(jié)晶。沉淀過濾后稱重得L-Leu甲酯鹽酸鹽1.88 g，L-Leu甲酯鹽酸鹽的收率為67.14%。

3）N-Boc-L-Pro-L-亮氨酸甲酯的合成。

將氨基酸鹽酸鹽堿化成甲酯，用三乙胺除去鹽酸鹽，乙酸乙酯做溶劑萃取，保留液體。將N-Boc-L-Pro和N--甲基嗎啉溶于二氯甲烷（10 mL）中，0℃下緩慢滴加氯甲酸乙酯，攪拌10 min。之后，向其中緩慢滴加L-亮氨酸甲酯，滴加完畢后，撤去冰浴，室溫下攪拌16 h。TLC監(jiān)測至反應(yīng)完全，混合液用二氯甲烷進行稀釋，之后用飽和食鹽水進行洗滌。分離出有機相后進行干燥，旋蒸除去溶劑。

4）環(huán)二肽（L-Pro-L-Leu）的合成。

將N-Boc-L- Pro -L-亮氨酸甲酯溶于無水二氯甲烷中，室溫下向其中加入TFA，攪拌反應(yīng)3 h。之后，蒸干溶劑。所得產(chǎn)物充分溶于2-丁醇：甲苯（4：2 mL）中，加入三乙胺?；旌衔锛訜嶂粱亓?6 h，蒸干溶劑后，沒有發(fā)現(xiàn)有白色固體生成，合成環(huán)二肽失敗。

分析：N-Boc-L-脯氨酸-L-亮氨酸甲酯不容易氨解閉環(huán)。改換N-Boc-L-Leu路線。

5）N-BOC-L-Leu的合成。

將L-Leu溶于23ml丙酮與水的體系（2：1），水浴25℃下攪拌至完全溶解，之后向反應(yīng)瓶中加入三乙胺（pH9-10），繼續(xù)水浴下攪拌，用丙酮：水（2：1）溶解（Boc）2O，緩慢滴加，監(jiān)測溫度使其不變，維持反應(yīng)液的pH8-9。TCL監(jiān)測反應(yīng)完全。減壓蒸去丙酮，用乙醚等量萃取3次，用3%HCL調(diào)節(jié)pH為3，EA等量萃取3次，飽和Nacl溶液洗滌，再用無水硫酸鈉干燥，蒸干EA，用EA-Pet（1：5）結(jié)晶，得白色晶體0.98 g。

6）L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽的合成。

在反應(yīng)瓶中加入甲醇和L-Pro，冰鹽浴下充分?jǐn)嚢?，緩慢滴加二氯亞砜，控制流速保證反應(yīng)溫度在-10℃以下，滴加完畢后，繼續(xù)攪拌至液體透明，撤去冰鹽浴，繼續(xù)攪拌，TLC監(jiān)控（EA：MeoH=3：1）反應(yīng)完全后，減壓濃縮，反復(fù)加無水甲醇除去濃縮液中的二氯亞砜，充分洗滌3次，再加少量甲醇溶解濃縮液，加入適量乙酸乙酯，冷卻觀察結(jié)晶。

結(jié)果：多次實驗后未得到結(jié)晶。

分析：溫度控制不穩(wěn)定會影響反應(yīng)進度；必須使用無水甲醇，二氯亞砜遇水分解；得到的L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽中可能存在雜質(zhì)，或其本身可能不易結(jié)晶。

7）N-Boc-L-亮氨酸-L-脯氨酸甲酯的合成。

將N-Boc-L-亮氨酸和NMM（N-甲基嗎啉）溶于二氯甲烷中，0℃下攪拌，緩慢滴加氯甲酸乙酯。只會向其中緩慢滴加脯氨酸甲酯的油狀物，N-Boc-L-亮氨酸使用二氯甲烷溶解。滴加完畢后，撤去冰浴，室溫下攪拌16 h。TLC監(jiān)測至反應(yīng)完全，混合液用二氯甲烷進行稀釋，之后用飽和食鹽水進行洗滌。分離出有機相后進行干燥，旋蒸除去溶劑。硅膠柱層析分離純化得到產(chǎn)物0.21 g。

3 結(jié)束語

半合成麥角環(huán)肽是一種具有可行性的工藝方法，本研究利用簡單氨基酸，探究合成環(huán)二肽的方法，實驗方法可參考路線和工藝較多，具有可操作性，對麥角堿類藥物的半合成研究和實際生產(chǎn)具有一定的指導(dǎo)意義。

參考文獻

[1]武振羽，張韞宏，王輝，等.環(huán)肽合成進展[J].化學(xué)進展，2002，14（2）：113-20.

[2]劉洪強，林浩，田桂杰，等.Mannich型環(huán)肽的液相及固相合成比較[J].有機化學(xué)，2003，23（8）：804-808.

[3]閆乾順，李江，方壟.環(huán)肽的設(shè)計與合成[J].寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，27（2）：150-151.

[4]張莉，李競成，李聚源，高利華.環(huán)肽合成的試驗研究[J].大連民族學(xué)院報，2006（3）：47-49.endprint

摘 要 麥角隱亭為D-麥角酸與一環(huán)狀三肽籍酰胺鍵相連而成，半合成麥角環(huán)肽是一種具有可行性的工藝方法，本研究利用簡單氨基酸，經(jīng)合成環(huán)二肽，再與非經(jīng)典氨基酸環(huán)合成三肽。

關(guān)鍵詞 麥角隱亭；環(huán)二肽；合成

中圖分類號：O629 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1671-7597（2014）13-0068-01

麥角隱亭是麥角菌產(chǎn)生的一系列有藥用價值的麥角堿，常用于治療高血壓和周圍血管組織的疾病。目前主要由發(fā)酵法生產(chǎn)，但是發(fā)酵組分復(fù)雜，提取分離方法繁瑣，價格偏高，影響了該類藥物的廣泛使用。全合成步驟繁復(fù)，不具生產(chǎn)價值。

用發(fā)酵生產(chǎn)的麥角酸作母體半合成肽麥角堿，是一種具有應(yīng)用前景的制造工藝方法，作為半合成麥角肽堿項目的一部分，本研究意在探索一條中間體環(huán)二肽的簡單合成方法，以適合工業(yè)生產(chǎn)的要求。

1 探究思路

有機合成中常通過引入叔丁氧羰基（即Boc）保護基團，特別運用于氨基酸的氨基保護。合成多肽時，該保護基團的脫除條件溫和，且反應(yīng)產(chǎn)物的分離提純較之使用其他類型的氨基酸保護劑容易。本項目通過采取對N進行Boc保護的方法以增加環(huán)二肽的合成產(chǎn)量，分別是合成N-Boc-L-Pro，和N-Boc-L-Leu兩種思路。

圖1 環(huán)二肽的合成路線一

圖2 環(huán)二肽的合成路線二

2 實驗過程

1）N-Boc-L-Pro的制備。

將L-Pro加入燒瓶中，溶于丙酮/水（2：1，3 mL）中，加入三乙胺（pH9～10），室溫下攪拌30 min，之后加入

（Boc）2O，室溫下攪拌。TLC跟蹤監(jiān)測完全反應(yīng)后，懸蒸除去丙酮。加入1 mL水對剩余物稀釋，異丙醚萃取除去過量的（Boc）2O。水層用3%稀HCL酸化至pH=3后，用乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯層，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，濾除Na2SO4，蒸干溶劑，得白色固體。

分析：計算得N-Boc-L-Pro的收率為65.26%。

2）L-Leu甲酯鹽酸鹽的制備。

在100 mL的三頸瓶內(nèi)裝入2.0gL-Leu，加入30 mL無水甲醇攪拌溶解，冰鹽浴冷卻至-10℃，攪拌下緩慢滴加二氯亞砜，滴加過程中嚴(yán)控溫度在0℃以下。滴加完畢后，繼續(xù)放在冰鹽浴內(nèi)攪拌30 min，移去冰鹽浴，室溫下攪拌48小時。用TLC跟蹤監(jiān)測反應(yīng)完全后，蒸除甲醇和二氯亞砜，得膏狀白色固體。在43℃熱水浴用少量甲醇溶解，再滴加乙酸乙酯，置于冰箱中結(jié)晶。沉淀過濾后稱重得L-Leu甲酯鹽酸鹽1.88 g，L-Leu甲酯鹽酸鹽的收率為67.14%。

3）N-Boc-L-Pro-L-亮氨酸甲酯的合成。

將氨基酸鹽酸鹽堿化成甲酯，用三乙胺除去鹽酸鹽，乙酸乙酯做溶劑萃取，保留液體。將N-Boc-L-Pro和N--甲基嗎啉溶于二氯甲烷（10 mL）中，0℃下緩慢滴加氯甲酸乙酯，攪拌10 min。之后，向其中緩慢滴加L-亮氨酸甲酯，滴加完畢后，撤去冰浴，室溫下攪拌16 h。TLC監(jiān)測至反應(yīng)完全，混合液用二氯甲烷進行稀釋，之后用飽和食鹽水進行洗滌。分離出有機相后進行干燥，旋蒸除去溶劑。

4）環(huán)二肽（L-Pro-L-Leu）的合成。

將N-Boc-L- Pro -L-亮氨酸甲酯溶于無水二氯甲烷中，室溫下向其中加入TFA，攪拌反應(yīng)3 h。之后，蒸干溶劑。所得產(chǎn)物充分溶于2-丁醇：甲苯（4：2 mL）中，加入三乙胺?；旌衔锛訜嶂粱亓?6 h，蒸干溶劑后，沒有發(fā)現(xiàn)有白色固體生成，合成環(huán)二肽失敗。

分析：N-Boc-L-脯氨酸-L-亮氨酸甲酯不容易氨解閉環(huán)。改換N-Boc-L-Leu路線。

5）N-BOC-L-Leu的合成。

將L-Leu溶于23ml丙酮與水的體系（2：1），水浴25℃下攪拌至完全溶解，之后向反應(yīng)瓶中加入三乙胺（pH9-10），繼續(xù)水浴下攪拌，用丙酮：水（2：1）溶解（Boc）2O，緩慢滴加，監(jiān)測溫度使其不變，維持反應(yīng)液的pH8-9。TCL監(jiān)測反應(yīng)完全。減壓蒸去丙酮，用乙醚等量萃取3次，用3%HCL調(diào)節(jié)pH為3，EA等量萃取3次，飽和Nacl溶液洗滌，再用無水硫酸鈉干燥，蒸干EA，用EA-Pet（1：5）結(jié)晶，得白色晶體0.98 g。

6）L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽的合成。

在反應(yīng)瓶中加入甲醇和L-Pro，冰鹽浴下充分?jǐn)嚢?，緩慢滴加二氯亞砜，控制流速保證反應(yīng)溫度在-10℃以下，滴加完畢后，繼續(xù)攪拌至液體透明，撤去冰鹽浴，繼續(xù)攪拌，TLC監(jiān)控（EA：MeoH=3：1）反應(yīng)完全后，減壓濃縮，反復(fù)加無水甲醇除去濃縮液中的二氯亞砜，充分洗滌3次，再加少量甲醇溶解濃縮液，加入適量乙酸乙酯，冷卻觀察結(jié)晶。

結(jié)果：多次實驗后未得到結(jié)晶。

分析：溫度控制不穩(wěn)定會影響反應(yīng)進度；必須使用無水甲醇，二氯亞砜遇水分解；得到的L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽中可能存在雜質(zhì)，或其本身可能不易結(jié)晶。

7）N-Boc-L-亮氨酸-L-脯氨酸甲酯的合成。

將N-Boc-L-亮氨酸和NMM（N-甲基嗎啉）溶于二氯甲烷中，0℃下攪拌，緩慢滴加氯甲酸乙酯。只會向其中緩慢滴加脯氨酸甲酯的油狀物，N-Boc-L-亮氨酸使用二氯甲烷溶解。滴加完畢后，撤去冰浴，室溫下攪拌16 h。TLC監(jiān)測至反應(yīng)完全，混合液用二氯甲烷進行稀釋，之后用飽和食鹽水進行洗滌。分離出有機相后進行干燥，旋蒸除去溶劑。硅膠柱層析分離純化得到產(chǎn)物0.21 g。

3 結(jié)束語

半合成麥角環(huán)肽是一種具有可行性的工藝方法，本研究利用簡單氨基酸，探究合成環(huán)二肽的方法，實驗方法可參考路線和工藝較多，具有可操作性，對麥角堿類藥物的半合成研究和實際生產(chǎn)具有一定的指導(dǎo)意義。

參考文獻

[1]武振羽，張韞宏，王輝，等.環(huán)肽合成進展[J].化學(xué)進展，2002，14（2）：113-20.

[2]劉洪強，林浩，田桂杰，等.Mannich型環(huán)肽的液相及固相合成比較[J].有機化學(xué)，2003，23（8）：804-808.

[3]閆乾順，李江，方壟.環(huán)肽的設(shè)計與合成[J].寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，27（2）：150-151.

[4]張莉，李競成，李聚源，高利華.環(huán)肽合成的試驗研究[J].大連民族學(xué)院報，2006（3）：47-49.endprint