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        電針對(duì)家兔易損斑塊模型單核細(xì)胞趨化因子-1和斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)的影響*

        2014-07-30 02:38:50張洪俠周桂桐郭茂娟胡先同姜希娟
        針灸臨床雜志 2014年4期
        關(guān)鍵詞:關(guān)穴易損單核細(xì)胞

        張洪俠,周桂桐,郭茂娟,張 敏,胡先同,姜希娟△

        (1.天津中醫(yī)藥大學(xué),天津300193;2.泰安市婦幼保健院,山東泰安271000)

        大量研究表明,動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)損傷與抗損傷的慢性炎癥過(guò)程,從脂質(zhì)條紋到纖維斑塊和粥樣斑塊,再到不穩(wěn)定斑塊的破裂和血栓形成,都有各種炎癥細(xì)胞和炎癥因子的參與[1-2]。AS斑塊炎癥的急性發(fā)作是導(dǎo)致斑塊易損、破裂、促進(jìn)急性冠脈綜合征發(fā)生的重要因素[3-4]。在研究中發(fā)現(xiàn),易損斑塊內(nèi)有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn),其中以巨噬細(xì)胞數(shù)量增多明顯,因此,斑塊內(nèi)大量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)是易損斑塊的重要標(biāo)志[5-6]。單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)是趨化單核細(xì)胞的重要細(xì)胞因子,它促進(jìn)血液循環(huán)中的單核細(xì)胞向斑塊內(nèi)遷移而轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞[7-8]。巨噬細(xì)胞被激活并產(chǎn)生大量 MCP-1,促使更多的單核細(xì)胞進(jìn)入動(dòng)脈壁,并吞噬脂蛋白形成泡沫細(xì)胞,參與粥樣斑塊的形成[9-10]。另外,激活的巨噬細(xì)胞還通過(guò)蛋白基質(zhì)降解酶,促進(jìn)基質(zhì)降解,導(dǎo)致斑塊的不穩(wěn)定、破裂甚至血栓形成,導(dǎo)致病情急劇惡化,甚至危及生命[11-12]。針灸防治動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)缺血性疾病,臨床上已有較多應(yīng)用,療效顯著。研究發(fā)現(xiàn),針灸對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊發(fā)生、發(fā)展有防治作用[13-14]。結(jié)合臨床應(yīng)用針刺治療冠心病獲得療效,本研究將從炎癥角度探討電針對(duì)AS的干預(yù)作用。

        1 材料與方法

        1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

        電針治療儀(G6805-Ⅱ型,青島鑫升實(shí)業(yè)有限公司);全自動(dòng)生化儀(7080型,日立)。小鼠抗兔RAM11單克隆抗體(Dako Cytomation);抗小鼠二抗(美國(guó)vector公司);兔MCP-1ELISA試劑盒(美國(guó)R&D公司)

        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、模型制備及治療

        選用健康雄性日本純系大耳白兔27只,體重(2.0±0.2)kg,由北京華阜康動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組和針灸組。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,對(duì)照組飼以普通料,不做任何處理;模型組、高脂飼料喂養(yǎng)2周,參照文獻(xiàn)[15]行股動(dòng)脈球囊拉傷術(shù)復(fù)制腹主動(dòng)脈易損斑塊模型,造模后繼續(xù)高脂飼養(yǎng)10周;針灸治療組:高脂飼養(yǎng)2周后行球囊拉傷術(shù),造模后繼續(xù)高脂飼養(yǎng)8周,之后再給予2周的電針治療。

        選穴:參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位選取[16]。簡(jiǎn)述如下:家兔仰臥于兔臺(tái)上四肢綁縛固定。局部常規(guī)消毒,足三里直刺1.5~2.5 cm,內(nèi)關(guān)穴直刺0.5~1 cm。針刺得氣后接通電針治療儀,輸出電路一組接左側(cè)足三里和內(nèi)關(guān)穴,一組接右側(cè)足三里和內(nèi)關(guān)穴。電針波形為疏密波,輸出電流強(qiáng)度以兔能耐受及局部肌肉微微抽動(dòng)為宜,每日 1次,每次20 min,持續(xù)14 天。

        1.3 形態(tài)學(xué)觀察

        腹主動(dòng)脈標(biāo)本行HE染色,在光學(xué)顯微鏡下觀察斑塊的形態(tài)學(xué)改變。

        1.4 免疫組織化學(xué)檢測(cè)

        利用RAM11單克隆抗體行免疫組織化學(xué)檢測(cè),計(jì)數(shù)RAM11陽(yáng)性細(xì)胞。每組切片隨機(jī)選取5個(gè)視野,每個(gè)視野數(shù)100個(gè)總細(xì)胞,計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占總細(xì)胞百分比。

        1.5 血清MCP-1的檢測(cè)

        采用ELISA法測(cè)定MCP-1含量。實(shí)驗(yàn)步驟按照說(shuō)明書操作步驟進(jìn)行。

        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        2.1 病理學(xué)檢查結(jié)果

        HE染色觀察,高倍鏡下可見:對(duì)照組主動(dòng)脈管壁薄厚均勻,內(nèi)膜完整,中膜、外膜分界清楚,無(wú)AS病灶。模型組,AS各期病變均可見,但以粥樣斑塊期多見,多表現(xiàn)為偏心斑塊,具有較大的脂質(zhì)核心薄的纖維帽,有豐富的泡沫細(xì)胞和明顯的炎細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組相比,針灸組病變明顯減輕,見封三彩圖1。

        2.2 免疫組織化學(xué)結(jié)果

        RAM11抗體標(biāo)記的巨噬細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)為胞漿內(nèi)棕黃色顆粒。模型組和針灸組均可見染成棕黃色的RAM11陽(yáng)性表達(dá)信號(hào),對(duì)照組胸主動(dòng)脈未檢測(cè)到RAM11的表達(dá),針灸組RAM11陽(yáng)性表達(dá)標(biāo)記的巨噬細(xì)胞與總細(xì)胞的比值降低,與模型組相比差異有顯著性,P<0.05。見封三彩圖2和表1。

        2.3 血清MCP-1表達(dá)結(jié)果

        模型組血清MCP-1水平升高,與對(duì)照組相比,差異有顯著性,P<0.01;電針可有效降低血清MCP-1水平,與模型組相比有顯著性差異(P<0.01)。見表2。

        表1 電針對(duì)鼠抗兔巨噬細(xì)胞抗體11的影響(±s)

        表1 電針對(duì)鼠抗兔巨噬細(xì)胞抗體11的影響(±s)

        注:與模型組相比,*P <0.05。

        組別 n MCP-1陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比(%)54.57 ±12.20針灸組 9 26.79 ±11.58模型組9*

        表2 電針對(duì)血清MCP-1的影響(±s)

        表2 電針對(duì)血清MCP-1的影響(±s)

        注:與正常對(duì)照組相比,*P <0.01;與針灸組相比,※P <0.01。

        組別 n MCP-1濃度(ng/L)正常對(duì)照組943.25 ±7.8022.85 ±6.41模型組 9 57.73 ±5.22*※針灸組9

        3 討論

        中醫(yī)學(xué)把AS歸屬于“痰凝血瘀”范疇,其病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)。治療采用化痰軟堅(jiān)行氣散結(jié)及活血化瘀之法。內(nèi)關(guān)穴為手厥陰心包經(jīng),具有行氣活血之功;足三里為足陽(yáng)明胃經(jīng),具有濁降、除痰濕之功。

        針刺對(duì)AS斑塊發(fā)生發(fā)展有改善作用,可縮小斑塊的厚度和面積[13]。針刺內(nèi)關(guān)穴可以減少大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜脂質(zhì)的沉積及泡沫細(xì)胞的形成,同時(shí)降低致炎因子的表達(dá)[17]。由此推測(cè),針刺通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)達(dá)到穩(wěn)定效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn),動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中MCP-1表達(dá)增高,與斑塊的穩(wěn)定密切相關(guān)[18]。

        本研究結(jié)果提示,電針處理可以有效降低MCP-1的表達(dá),減少巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn),表明電針干預(yù)可有效預(yù)防AS的進(jìn)展,對(duì) AS有一定的治療作用,電針對(duì)MCP-1蛋白表達(dá)及巨噬細(xì)胞調(diào)節(jié)作用可能是防治AS機(jī)制之一。因此可以推測(cè),電針對(duì)AS斑塊的防治效應(yīng)與抑制MCP-1和巨噬細(xì)胞循環(huán)通路有關(guān):電針通過(guò)抑制MCP-1表達(dá),減少巨噬細(xì)胞的入侵,進(jìn)而減少由巨噬細(xì)胞分泌的MCP-1和其它多種致炎因子以及蛋白基質(zhì)降解酶表達(dá),降低斑塊內(nèi)炎癥反應(yīng),抑制斑塊不穩(wěn)定性、斑塊內(nèi)出血和斑塊破裂的發(fā)生,達(dá)到降低急性缺血綜合征發(fā)生效應(yīng)。

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