紀(jì)濤，朱水波，董永強(qiáng)，張曉明，梁江水，殷桂林

（廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院心胸外科，武漢，430070）

組織因子途徑抑制物-2和趨化因子受體-4在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

紀(jì)濤，朱水波，董永強(qiáng)，張曉明，梁江水，殷桂林

（廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院心胸外科，武漢，430070）

目的探討非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織中組織因子途徑抑制物-2（TFPI-2）和趨化因子受體-4（CXCR4）蛋白表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測60例NSCLC癌組織及癌旁組織及10例正常組織中的TFPI-2及CXCR4，并分析TFPI-2和CXCR4的表達(dá)水平與性別、年齡、組織類型、分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果TFPI-2在NSCLC組織中的表達(dá)水平明顯低于癌旁組織和正常組織，CXCR4表達(dá)水平在癌組織中明顯高于癌旁組織和正常組織（P＜0.05）。TFPI-2和CXCR4表達(dá)與性別、年齡、組織類型、分化程度、TNM分期無關(guān)，僅僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。TFPI-2和CXCR4在NSCLC組織中呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)（r=-0.26，P＜0.05）。結(jié)論TFPI-2可能通過抑制增高的CXCR4表達(dá)來影響腫瘤的遷徙轉(zhuǎn)移。

癌，非小細(xì)胞肺；受體，CXCR4；絲氨酸蛋白酶抑制劑

肺癌是全球發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，目前一直呈上升趨勢，其中約80%為非小細(xì)胞肺癌［1］。抑制腫瘤的侵襲性生長和轉(zhuǎn)移是改善患者5年生存率的關(guān)鍵因素。研究發(fā)現(xiàn)，趨化因子及其受體介導(dǎo)腫瘤特異性器官轉(zhuǎn)移主要通過基質(zhì)細(xì)胞衍生因子／趨化因子受體-4（CXCR4）通路實(shí)現(xiàn)的［2-3］。組織因子途徑抑制物-2（TFPI-2）在維持細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)完整性以及調(diào)控腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移方面起著重要作用，具有抗炎、抑制血管生成和腫瘤生長，抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等多種生物功能［4-5］。本研究通過檢測CXCR4和TFPI-2在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)合臨床資料，分析其與臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 資料來源 收集2011年11月至2012年11月在廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院行非小細(xì)胞肺癌腫瘤切除標(biāo)本60例，分別收集癌組織和癌旁組織（距離腫瘤邊緣5 cm）標(biāo)本，35例為男性（58.3%），25例為女性（41.7%），年齡36～76歲，平均年齡61歲。按國際抗癌協(xié)會（UICC）1997年修訂的肺癌TNM臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：I期33例（55.0%）、Ⅱ期12例（20.0%）、Ⅲ期15例（25.0%）；高分化4例（6.7%）、中分化41例（68.3%）、低分化15例（25%）；腫瘤直徑＞3 cm 47例，≤3 cm 13例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例。10例正常肺組織取自肺大皰行手術(shù)切除的患者。所有標(biāo)本切取后均經(jīng)10%中性甲醛溶液固定、石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，所有患者術(shù)前均未行放化療，所切除標(biāo)本均經(jīng)常規(guī)病理確診。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟 CXCR4、TFPI-2兔抗人多克隆抗體購自武漢博士德生物工程有限公司，DAB酶底物顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用免疫組織化學(xué)SP法染色，按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行。石蠟切片常規(guī)脫蠟后采用高壓鍋進(jìn)行抗原修復(fù)，滴加100 mL／L正常血清，中和非特異性抗原。一抗VEGF（1∶100）、CXCR4（1∶100）、TFPI-2（1∶100）孵育過夜，滴加生物素化二抗工作液，辣根過氧化物標(biāo)記鏈霉卵白素、DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水、透明后中性樹膠封固。PBS代替一抗，作為陰性對照，用已知的非小細(xì)胞肺癌切片作為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 以胞漿或胞核中出現(xiàn)黃色或棕褐色顆粒為陽性。采用半定量計分法，隨機(jī)選擇5個高倍視野（400倍），計數(shù)1000個腫瘤細(xì)胞，計算陽性細(xì)胞百分率。陽性細(xì)胞數(shù)評分標(biāo)準(zhǔn)：＜5%記為0分；5%～25%計為1分，26%～50%計為2分。51%～75%計為3分，＞75%計為4分。染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)：無色計為0分，淡黃色計為1分；棕黃色計為2分；棕褐色計為3分。上述兩種評分的乘積≥4為陽性，＜4為陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料采用 χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 TFPI-2及CXCR4在NSCLC、癌旁組織及正常肺組織中的表達(dá) TFPI-2和CXCR4蛋白表達(dá)主要定位于NSCLC的細(xì)胞漿。TFPI-2蛋白在NSCLC中的陽性表達(dá)水平為57.6%；低于癌旁組織的64.8%和正常肺組織的73.4%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。分析CXCR4發(fā)現(xiàn)在NSCLC中的陽性表達(dá)水平78.3%，在癌旁組織和正常組織中表達(dá)水平分別為30.5%和8.9%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 TFPI-2及CXCR4表達(dá)與NSCLC臨床病理學(xué)的關(guān)系 TFPI-2及CXCR4蛋白表達(dá)水平與NSCLC患者的年齡、性別、病理類型、腫瘤大小、分化程度、臨床分期無關(guān)，僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），見表1。

表1 TFPI-2、VEGF的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理資料的關(guān)系［例（%）］

2.3 NSCLC組織中TFPI-2及CXCR4表達(dá)的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果表明，TFPI-2和CXCR4蛋白在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，見表2。

表2 非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本中TFPI-2與CXCR4表達(dá)相關(guān)性

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，對于胰腺癌患者，TFPI-2高表達(dá)患者術(shù)后生存時間明顯優(yōu)于低表達(dá)組，且其表達(dá)水平可作為影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素，可作為判斷胰腺癌患者預(yù)后的因素［6-7］。我們通過研究發(fā)現(xiàn)，TFPI-2在正常肺組織中的表達(dá)明顯高于非小細(xì)胞肺癌組織，提示其可能在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中發(fā)揮一定的作用［8-9］。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)TFPI-2可以通過抑制新生血管的形成來抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，抑制腫瘤細(xì)胞對周圍組織的侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移［10］。本研究結(jié)果顯示，TFPI-2蛋白在NSCLC中的陽性表達(dá)水平為57.6%；低于癌旁組織的64.8%和正常肺組織的73.4%，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），可見在正常肺組織中其表達(dá)水平明顯高于癌組織。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，TFPI-2蛋白表達(dá)水平與NSCLC患者的年齡、性別、病理類型、腫瘤大小、分化程度、臨床分期無關(guān)，僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，可見TFPI-2在抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中具有一定的抑制作用。

近來研究發(fā)現(xiàn)趨化因子及其受體在腫瘤器官中的特異性轉(zhuǎn)移中具有重要作用［11-12］。我們通過對60例NSCLC組織中CXCR4的表達(dá)水平的檢測發(fā)現(xiàn)，CXCR4發(fā)現(xiàn)在NSCLC中的陽性表達(dá)水平78.3%，在癌旁組織和正常組織中表達(dá)水平分別為30.5%和8.9%，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義，分析發(fā)現(xiàn)CXCR4蛋白表達(dá)水平與NSCLC患者的年齡、性別、病理類型、腫瘤大小、分化程度、臨床分期無關(guān)，僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，對于TFPI-2和CXCR4的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，兩者的相關(guān)系數(shù)為-0.26，可見在TFPI-2高水平的表達(dá)能抑制CXCR4的表達(dá)水平，兩者究竟有何種關(guān)系，目前仍需進(jìn)一步研究。

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Clinical significance of TFPI-2 and CXCR4 expression in non-small cell lung cancer

JITao，ZHU Shuibo，DONG Yongqiang，ZHANGXiaoming，LIANG Jiangshui，YIN Guilin
（Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery，Wuhan General Hospital of Guangzhou Command，Wuhan 430070，China.）

Dong Yongqiang，Email：yongqiang.dong＠live.com

ObjectiveTo explore the expression of tissue factor way inhibitor-2（TFPI-2）and chemokine receptor-4（CXCR4）protein，clinical pathological characteristics and prognosis in the non-small cell lung cancer（NSCLC）.Methods The expression of TFPI-2 and CXCR4 in tumor issues and adjacentnormal lung tissues collected from 60 NSCLC patients，and normal tissue collected from 10 healthy subjectswere detected by immunohistochemistry.The correlation of the level of CXCR4 and TFPI-2 and the gender，age，histological type，degree of differentiation，lymph nodemetastasis，TNM stage was analyzed.ResultsThe level of TFPI-2 in tumor tissueswas significantly lower than that in carcinoma adjacent tissues and normal tissues，and the level of CXCR4 in the tumor tissue is obviously higher than that in the carcinoma adjacent tissues and normal tissues（P＜0.05）.There was an correlation of TFPI-2 and CXCR4 level with lymph node metastasis（P＜0.05），but this correlation was not seen in the gender，age，histological type，degree of differentiation and TNM staging.The TFPI-2level was negatively correlated with CXCR4 level in NSCLC（r=0.26，P＜0.05）.Conclusions TFPI-2 may influence the migration of tumor metastasis through the inhibition of increased CXCR4 expression.

Carcinoma，non-small-cell lung；Receptors，CXCR4；Serine proteinase inhibitors

R734.2

A

10.3969／J.issn.1672-6790.2014.03.021

2013-08-05）

武漢市青年科技晨光計劃項(xiàng)目（201050231090）

紀(jì)濤，主治醫(yī)師，Email：wuhanjitao＠yahoo.cn

董永強(qiáng)，副主任醫(yī)師，Email：yongqiang.dong＠live.com