丁勻浚毓，鄒穎剛，田 園，閆淑芬，王淑麗，張立會(huì)＊

β－微管蛋白及M2型丙酮酸激酶在卵巢漿液性囊腺癌診斷中的意義

丁勻浚毓1，鄒穎剛2，田 園1，閆淑芬1，王淑麗1，張立會(huì)1＊

（1．吉林大學(xué)第二醫(yī)院婦科，吉林長(zhǎng)春130041；2．吉林大學(xué)第二醫(yī)院生殖中心）

微管是組成細(xì)胞骨架的主要部分，具有聚合和解聚的動(dòng)力學(xué)特性［1］。由α－微管蛋白和β－微管蛋白異二聚體組成［2］。γ微管蛋白參與微管的組裝，但并非微管的組分。微管的動(dòng)力學(xué)特性使其在細(xì)胞有絲分裂起重要作用，其中β－微管蛋白的過(guò)表達(dá)是惡性腫瘤早期形成的關(guān)鍵［3］。Warburg效應(yīng)指腫瘤細(xì)胞在氧氣即使充足時(shí)亦經(jīng)糖酵解途徑代謝，消耗大量葡萄糖產(chǎn)生乳酸，這種現(xiàn)象被也稱為腫瘤的有氧糖酵解［4］。M2型丙酮酸激酶（PKM2）即是這一過(guò)程的限速酶。它在腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)，并以二聚體形式存在［5］。本文通過(guò)對(duì)比β－微管蛋白及M2型丙酮酸激酶在卵巢漿液性囊腺瘤與卵巢漿液性囊腺癌組織中表達(dá)的差別，進(jìn)一步探索這兩種蛋白與卵巢漿液性囊腺癌分期的關(guān)系，尋求卵巢漿液性囊腺癌早期診斷新指標(biāo)。

1 資料和方法

1．1 一般資料

取吉林大學(xué)第二醫(yī)院2009年8月—2012年11月臨床病理資料完整的石蠟切片，經(jīng)雙盲病理診斷，隨機(jī)抽取卵巢漿液性囊腺癌、卵巢漿液性囊腺瘤各40例。

1．2 試劑與儀器

C－FOS抗體購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司；SP－9710試劑盒和DAB試劑盒購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

免疫組織化學(xué)檢測(cè)：取得臨床標(biāo)本組織立即泡于10%福爾馬林固定液中固定24h，予以常規(guī)石蠟包埋、切片，制成4微米切片；先行HE染色，再切片貼附于涂有多聚賴氨酸的玻片上備用待行下一步的免疫組化染色，相應(yīng)抗體檢測(cè)采用免疫組化S－P法（鏈霉素抗生物素蛋白一過(guò)氧化物酶），按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1．3 免疫組織化學(xué)結(jié)果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

染色陽(yáng)性：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈均勻著色的棕黃色顆粒，背景清晰，無(wú)非特異性著色。依據(jù)Tanaka的定量計(jì)分法計(jì)算染色結(jié)果［6］：選取5個(gè)代表性區(qū)域，400倍鏡下評(píng)定顯色強(qiáng)度：棕褐色、棕黃色、淺黃色、未著色分別得3、2、1、0分；計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞百分率：＞75%、50%～≤75%、25%～≤50%、5%～≤25%、≤5%分別得4、3、2、1、0分；兩項(xiàng)得分相乘，取各視野得分的平均值。按照分?jǐn)?shù)分為4個(gè)等級(jí)：（＋＋＋）：≥9分，（＋＋）：5～8分，（＋）：2～4分，（－）：0～1分。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本實(shí)驗(yàn)免疫組化檢測(cè)所得結(jié)果為等級(jí)資料，采用SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)分析軟件，以χ2檢驗(yàn)為統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 β－微管蛋白、PKM2表達(dá)和定位

鏡下可見(jiàn)棕黃色顆粒均勻著色于細(xì)胞質(zhì)中（圖1，2），各組β－微管蛋白、PKM2免疫組織化學(xué)染色評(píng)分情況（表1），卵巢漿液性囊腺瘤組陽(yáng)性率低于卵巢漿液性囊腺癌組。

表1 β－微管蛋白及PKM2在不同組織中的表達(dá)情況

圖1 β－微管蛋白在卵巢漿液性囊腺瘤及漿液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中的表達(dá)

圖2 PKM2在卵巢漿液性囊腺瘤及漿液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中的表達(dá)

2．2 β－微管蛋白、PKM2表達(dá)的組間相關(guān)性

β－微管蛋白、PKM2在卵巢漿液性囊腺癌及卵巢漿液性囊腺瘤病例中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（β－微管蛋白：χ2＝39．596，P＝0．000；PKM2：χ2＝17．802，P＝0．000），但陽(yáng)性率在卵巢漿液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），且陽(yáng)性級(jí)別與腫瘤分期無(wú)明顯相關(guān)性。

3 討論

目前卵巢癌的主要標(biāo)志物為CA－125，但其早期其敏感性及特異性都不高。如在結(jié)核性胸膜炎、結(jié)核性腹膜炎、腎病綜合征并發(fā)腹水者，其CA－125均可升高［7］。有實(shí)驗(yàn)證明β－微管蛋白、PKM2在卵巢癌組織中高表達(dá)［8］。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究了卵巢漿液性囊腺癌及漿液性囊腺瘤組織中β－微管蛋白、PKM2表達(dá)情況：兩者在卵巢漿液性囊腺瘤組織中低表達(dá)，在漿液性囊腺癌組織中高表達(dá)。這種表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明這兩種蛋白在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。但是這兩種蛋白在腺癌組中，染色的陽(yáng)性級(jí)別及陽(yáng)性率與腫瘤分期無(wú)明顯相關(guān)性，并未出現(xiàn)相關(guān)雜志上報(bào)道的與腫瘤分期呈正相關(guān)的現(xiàn)象。由于樣本例數(shù)尚不夠大，卵巢漿液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的分布不均勻，且缺少IV樣本，所以仍需加大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步研究。有文獻(xiàn)報(bào)道在血清及糞便中均可檢測(cè)到PKM2。在糞便中檢測(cè)PKM2，結(jié)直腸癌的敏感性可達(dá)73%。但在血清中如何檢測(cè)β－微管蛋白，國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道，這為β－微管蛋白應(yīng)用于臨床設(shè)置了一道難題。但是，隨著科學(xué)的不斷發(fā)展，相信將來(lái)必定會(huì)找到β－微管蛋白簡(jiǎn)易方便的檢測(cè)方法。這必定為卵巢癌的患者帶來(lái)福音。

［1］Li JN，Jiang JD．Biological characteristics of microtubule and related drug research［J］．Acta Pharm Sin，2003，38：311．

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［3］尚 海，潘 莉，楊 澍等．微管蛋白抑制劑的研究進(jìn)展［J］．藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，45（9）：1078．

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［5］孫 倩．M2型丙酮酸激酶（PKM2）在腫瘤代謝和發(fā)生中的作用［J］．基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，32（5）：462．

［6］Tanaka K，Iwamoto S，Gon G，et al．Expression of survivin and its relationship to loss of apoptosis in breast carcinomas［J］．Clin Cancer Res，2000，6（1）：127．

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2013－01－29）

1007－4287（2014）02－0281－02