王洪波，樊鳳艷，祁術(shù)元，劉娟

（空軍總醫(yī)院輸血科，北京 100142）

·論著·

聚肌胞、阿比朵爾誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素最短時(shí)效研究

王洪波，樊鳳艷，祁術(shù)元，劉娟

（空軍總醫(yī)院輸血科，北京 100142）

目的探討干擾素(IFNs)誘導(dǎo)劑聚肌胞、阿比朵爾從鼻腔給藥，分別誘導(dǎo)呼吸道局部黏膜產(chǎn)生足量干擾素的最短時(shí)間和達(dá)到平臺(tái)期的時(shí)間。方法用聚肌胞溶液(A組)、阿比朵爾溶液(B組)和注射用水溶液(C組)分別從鼻腔滴入，連續(xù)給藥1～6 d、于第2天開(kāi)始分別采集各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物鼻腔分泌物，檢測(cè)干擾素含量，各小組間進(jìn)行比較分析。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為昆明種小鼠，實(shí)驗(yàn)組156只，其中A組(聚肌胞組)、B組(阿比朵爾組)各78只；C組(對(duì)照組)13只，共計(jì)169只。結(jié)果(1)聚肌胞、阿比朵爾通過(guò)鼻腔給藥，1 d就可以誘導(dǎo)呼吸道黏膜產(chǎn)生足量IFNs。(2)持續(xù)通過(guò)鼻腔給予聚肌胞、阿比朵爾，隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，呼吸道分泌物中的干擾素的含量呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，逐步達(dá)到平臺(tái)期。(3)通過(guò)鼻腔滴入適量聚肌胞溶液從第5天開(kāi)始，誘導(dǎo)呼吸道黏膜產(chǎn)生的干擾素達(dá)到平臺(tái)期。(4)通過(guò)鼻腔滴入適量阿比朵爾溶液從第4天開(kāi)始，誘導(dǎo)呼吸道黏膜產(chǎn)生的干擾素達(dá)到平臺(tái)期。(5)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，動(dòng)物對(duì)鼻腔滴入上述制劑，都有較好的適應(yīng)性。結(jié)論聚肌胞、阿比朵爾通過(guò)鼻腔給藥，1 d均可誘導(dǎo)呼吸道局部黏膜產(chǎn)生足量干擾素，逐步增多達(dá)到較高水平的平臺(tái)期的時(shí)間分別為5 d和4 d。

干擾素；誘導(dǎo)劑；呼吸道；最短實(shí)效

為了探討高效干擾素(IFNs)誘導(dǎo)劑聚肌胞、阿比朵爾從鼻腔給藥，誘導(dǎo)呼吸道局部黏膜產(chǎn)生足量干擾素的最短時(shí)間和達(dá)到平臺(tái)期的時(shí)間，筆者進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 干擾素誘導(dǎo)劑 0.1%聚肌胞溶液(A液)，由濟(jì)南維爾康生化制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20003566，生產(chǎn)批號(hào)1212301，有效期兩年；0.1%鹽酸阿比朵爾溶液(B液)，由江蘇吳中醫(yī)藥集團(tuán)有限公司蘇州制藥廠饋贈(zèng)；鹽酸阿比朵爾原料粉劑，批號(hào)Y1111209R，取樣時(shí)間2013年3月；硝酸毛果蕓香堿滴眼液(匹羅卡品)，沈陽(yáng)興齊制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)120701，有效期兩年，規(guī)格8 ml：80 mg。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，雄性，5～8周齡，質(zhì)量25～30 g，SPF級(jí)。購(gòu)于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。試驗(yàn)動(dòng)物共計(jì)169只，分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組分A組(聚肌胞組)、B組（阿比朵爾組）兩大組，每大組再分為1 d組(24 h，A1組、B1組)、2 d組(48 h，A2組、B2組)、3 d組(72 h、A3組、B3組)、4 d組(96 h，A4組、B4組）、5 d組(120 h、A5組、B5組)、6 d組(144 h、A6組、B6組)共六個(gè)小組，每小組小鼠13只。共計(jì)156只。對(duì)照組(C組)給予注射用水(C液)，小鼠13只。

1.3 試驗(yàn)方法 A組和B組按每只小鼠30 μl/次(每側(cè)鼻腔各15 μl/次)，鼻腔點(diǎn)滴的方式給藥[1]，A組為每日上、下午各一次，給予A液；B組為每日上午給藥一次，給予B液。按照分組分別連續(xù)給藥1 d、2 d、3 d、4 d、5 d和6 d，同時(shí)觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的用藥反應(yīng)（有無(wú)活動(dòng)弱、倦縮、食量減少、毛色差、嘶咬等）。并分別于給藥后的第2天、3天、4天、5天、6天和7天上午，采集各組小鼠呼吸道分泌液。C組按每只小鼠30 μl/次(每側(cè)鼻腔各15 μl/次)，鼻腔點(diǎn)滴的方式給予注射用水(C液)，每日上午一次，連續(xù)給藥6 d，于給藥后的第7天上午，采集小鼠呼吸道分泌液。

1.4 采集呼吸道及鼻腔分泌液方法 腹腔注射0.01%匹羅卡品60 μl/只·次，1 min后采集呼吸道及鼻腔分泌液，置于0.5 ml EP管中，-20℃保存[1]。分別檢測(cè)干擾素。干擾素檢測(cè)試劑購(gòu)于北京中尚博奧生物技術(shù)有限公司，分裝eBioscience試劑，貨號(hào)ME020，批號(hào)140206。檢測(cè)儀器全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀(MULTISKAN MK3，Thermo，USA)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 A組INFs檢測(cè)結(jié)果 A組內(nèi)各小組鼻腔分泌物中檢測(cè)的干擾素，呈逐步增多趨勢(shì)，其中A5組達(dá)到峰值，各小組與對(duì)照組比較差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。A組內(nèi)A1組分別與其他各組間進(jìn)行比較分析，A1組與A2組、A1組與A3組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，A1組與A4組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，A1組與A5組、A1組與A6組比較差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)表1和圖1。

表1 A組與C組INFs檢測(cè)結(jié)果比較()

表1 A組與C組INFs檢測(cè)結(jié)果比較()

注：A1組與C組比較，t=3.244、P=0.004；A1組與A2組比較，t=-0.962、P=0.346；A1組與A3組比較，t=-1.834、P=0.079；A1組與A4組比較，t=-2.276、P=0.032；A1組與A 5組比較，t=-5.522、P=1.12×10-5；A1組與A6組比較，t=-3.697、P=0.001。

圖1 A組干擾素產(chǎn)生的動(dòng)態(tài)變化

2.2 B組INFs檢測(cè)結(jié)果 B組內(nèi)各小組鼻腔分泌物中檢測(cè)的干擾素呈逐步增多趨勢(shì)，其中B5組達(dá)到峰值，各小組與對(duì)照組比較，除B1組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.037)，其他各組與對(duì)照組比較差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。除B1組與B2組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.155)，B1組與B3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P=0.032)，B1組與組內(nèi)其他各組比較差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)表2和圖2。

表2 B組INFs檢測(cè)結(jié)果及小組間比較

圖2 B組干擾素產(chǎn)生的動(dòng)態(tài)變化

3 討論

IFNs誘導(dǎo)劑可誘導(dǎo)機(jī)體呼吸道黏膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生IFNs，使局部形成抗病毒狀態(tài)，從而可以應(yīng)用于呼吸道病毒感染性疾病的預(yù)防和治療。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)IFNs誘導(dǎo)劑作為抗病毒藥物的研究和應(yīng)用報(bào)道越來(lái)越多[2-6]，給藥方式包括涂(軟膏)于鼻腔、滴鼻和口服，研究涉及的呼吸道感染性病毒包括：流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠狀病毒等[7]。

本研究是在證實(shí)了多種高效IFNs誘導(dǎo)劑通過(guò)呼吸道給藥，可以有效誘導(dǎo)小鼠呼吸道產(chǎn)生IFNs[8]，又證實(shí)了聚肌胞、阿比朵爾誘導(dǎo)小鼠呼吸道產(chǎn)生IFNs達(dá)到峰值的時(shí)間，以及持續(xù)給藥可以持續(xù)誘導(dǎo)產(chǎn)生足量IFNs的基礎(chǔ)之上[9]，進(jìn)一步對(duì)比觀察了聚肌胞、阿比朵爾從鼻腔給藥，誘導(dǎo)小鼠呼吸道產(chǎn)生足量IFNs的最短時(shí)間，和達(dá)到平臺(tái)期（是指該期各組的數(shù)值與同組初始期數(shù)值比較，差異非常顯著）的時(shí)間。結(jié)果表明：(1)聚肌胞、阿比朵爾通過(guò)鼻腔給藥，1 d(24 h)就可以誘導(dǎo)呼吸道黏膜產(chǎn)生足量IFNs。(2)持續(xù)通過(guò)鼻腔給予聚肌胞、阿比朵爾，隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，呼吸道分泌物中的干擾素含量呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，逐步達(dá)到平臺(tái)期。(3)通過(guò)鼻腔滴入適量聚肌胞溶液從第5天開(kāi)始，誘導(dǎo)呼吸道黏膜產(chǎn)生的干擾素達(dá)到平臺(tái)期。(4)通過(guò)鼻腔滴入適量阿比朵爾溶液從第4天開(kāi)始，誘導(dǎo)呼吸道黏膜產(chǎn)生的干擾素達(dá)到平臺(tái)期。動(dòng)物在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中都有較好的適應(yīng)性。

此次實(shí)驗(yàn)證明：聚肌胞、阿比朵爾制劑通過(guò)呼吸道局部給藥，可以在較短時(shí)間(24 h)誘導(dǎo)呼吸道局部黏膜產(chǎn)生足量干擾素，分別于第5天、第4天在呼吸道分泌物中達(dá)到較高水平的平臺(tái)期，在呼吸道局部形成廣譜抗病毒狀態(tài)。高效干擾素誘導(dǎo)劑溶液呼吸道給藥，比其他途徑給藥以及注射疫苗產(chǎn)生作用時(shí)間（一般為14 d[10]左右)短、抗病毒范圍寬，尤其是對(duì)于應(yīng)急預(yù)防對(duì)干擾素敏感的呼吸道病毒感染性疾病，特別是對(duì)未知的呼吸道病毒感染性疾病暴發(fā)流行的預(yù)防有重要意義，應(yīng)用前景廣闊。

(志謝：江蘇吳中醫(yī)藥集團(tuán)有限公司蘇州制藥廠饋贈(zèng)鹽酸阿比朵爾原料粉劑，特此感謝！)

[1]沈富兵,鄭崛村,程曦,等.新城疫病毒合用中藥黃芪誘生內(nèi)源性干擾素的研究[J].成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,3(1):24-60.

[2]曹悅?cè)?孫乃玲.鹽酸阿比朵爾對(duì)呼吸道合胞病毒活性抑制作用[J].中國(guó)公共衛(wèi)生,2013,29(12):1838-1840.

[3]田兆興,任乃剛,閆崴,等.鹽酸阿比朵爾干混亂懸劑治療病毒性上呼吸道感染的臨床研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志,2013,29 (2):104-105.

[4]Wu QF,Wang W,Dai XY,et al.Chemical compositions and anti-influenza activities of essential oils from Mosla dianthera[J].J Ethnopharm,2012,139(2):668-671.

[5]Masycheva VI,Danilenko ED,Sergeev AN.The influence of interferon inducer,a stimulator of innate immunity,on influenza[J].Eur J Immuno,2009,39(1):S250.

[6]Romantsov MG,Golofeevskiǐ SV.Cycloferon efficacy in the treatment of acute respiratory tract viral infection and influenza during the morbidity outbreak in 2009-2010[J].Antibiot Khimioter,2010, 55(1-2):30-35.

[7]Kumaki YL,Day CW,Bailey,et al.Induction of interferon-gamma-inducible protein 10 by SARS-CoV infection，interferon alfacon 1 and interferon inducer in human bronchial epithelial Calu-3 celland BAL B/c mice[J].Antivir Chem Chemother,2010,20 (4):169-177.

[8]王洪波,樊鳳艷,劉娟,等.呼吸道給藥誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素的實(shí)驗(yàn)研究[J].海南醫(yī)學(xué),2012,23(19):16-18.

[9]王洪波,樊鳳艷,李景琦,等.聚肌胞、阿比朵爾呼吸道給藥誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素時(shí)效性研究[J].海南醫(yī)學(xué),2013,24(21):3133-3135.

[10]金奇.醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,2001:656.

Study on the shortest time of interferon production induced by Poly I:C and Arbidol.

WANG Hong-bo,FAN Feng-yan,QI Shu-yuan,LIU Juan.
Department of Blood Transfusion,General Hospital of Air Force,Beijing 100142, CHINA

ObjectiveTo discuss the shortest time for the interferon inducers Poly(I:C)and Arbidol to produce enough interferon in the local respiratory tract mucosa and the time to reach a plateau by administration. MethodsWe respectively gave experimental animals poly(I:C)(group A),Arbidol(group B)and water for injection(group C,control group)for nasal adminstration for 1～6 days,and then collected the nasal secretions since one day after the drug administration,detected the contents of interferon and compared the difference between two groups. There were a total of 169 Kunming mice,as experimental animals,with 78 in groupAand 78 in group B,13 in group C..Results(1)Poly(I:C)and Arbidol can induce adequate IFNs in the respiratory tract mucosa since the first day of nasal administration.(2)After the continuous stimulation of Poly(I:C)and Arbidol,we found that contents of interferonin respiratory tract secretions increased gradually,and finally reached to the plateau.(3)Poly(I:C)can induce respiratory tract mucosa to produce interferon to reach a plateau since the fifth day of nasal administation.(4)Arbidol can induce respiratory tract mucosa to produce interferon to reach a plateau since the fourth day of nasal administation.(5)All experimental animals had good adaptability to the above inducers during the whole experiment process..ConclusionNasal administration of both Poly(I:C)and Arbidol can induce respiratory tract mucosa to produce enough interferon from the first day while their times of reaching to a plateau were respectively 5 days(Polyinosinic) and 4 days(Arbidol).

Interferon(IFNs);Inducer;Pespiratory;Time

R-332

A

1003—6350（2014）22—3280—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.22.1288

2014-05-15)

王洪波。E-mail：15611161158@163.com