熊鐵一* 羅 禹

(1 四川省自然資源科學(xué)研究院，四川 成都 610015；2 四川省生物資源保護(hù)與可持續(xù)利用實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610015；3 四川愛眾生物醫(yī)藥科技有限公司，四川 成都 610041)

獼猴桃籽油的提取、成分和增強(qiáng)免疫功能的研究

熊鐵一1,2* 羅 禹2,3

(1 四川省自然資源科學(xué)研究院，四川 成都 610015；2 四川省生物資源保護(hù)與可持續(xù)利用實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610015；3 四川愛眾生物醫(yī)藥科技有限公司，四川 成都 610041)

目的 從獼猴桃籽中提取獼猴桃籽油，進(jìn)行成分分析和增強(qiáng)免疫功能研究。方法 以超臨界CO2萃取法提取獼猴桃籽油，測(cè)定其理化性質(zhì)及有效成分含量。并進(jìn)行體液免疫試驗(yàn)以研究其增強(qiáng)免疫功能。結(jié)果 超臨界CO2萃取法工藝參數(shù)為萃取溫度40 ℃、萃取壓力28 MPa、萃取時(shí)間240 min，出油率為22.59%。獼猴桃籽油中α-亞麻酸為59.5%。體液免疫試驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量組與陰性對(duì)照組比較，HC50極顯著提高。低劑量組、中劑量組與陰性對(duì)照組比較，HC50顯著提高。結(jié)論 獼猴桃籽油具有顯著的增強(qiáng)免疫功能。

獼猴桃籽油；超臨界CO2萃??；α-亞麻酸；增強(qiáng)免疫

中國(guó)是獼猴桃的原產(chǎn)地，種植面積居世界第一。獼猴桃除鮮食外，大部分用于獼猴桃濃縮汁、獼猴桃果酒、獼猴桃罐頭及獼猴飲料的加工，產(chǎn)生大量果渣廢料。從果渣中分離出獼猴桃籽，再經(jīng)超臨界CO2萃取技術(shù)提取出的獼猴桃籽油，是一種具有生物活性成分的高級(jí)保健品原料。

經(jīng)研究測(cè)定，獼猴桃籽中油脂含量達(dá)20%以上，獼猴桃籽油主要含棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、α-亞麻酸等。不飽和脂肪酸含量接近90%，其中α-亞麻酸含量高達(dá)50%～70%。亞油酸和亞麻酸是兩種對(duì)人體健康特別重要的必需脂肪酸，只能從外界攝取而不能在體內(nèi)自行合成。藥理實(shí)驗(yàn)證明，亞麻酸及其代謝物EPA、DHA具有調(diào)節(jié)血脂，降低血壓，增強(qiáng)自身免疫，延緩衰老等多種功效。大多數(shù)植物油中亞油酸含量均較豐富，但亞麻酸含量豐富的植物油則不多。獼猴桃籽油可成為人體補(bǔ)充亞麻酸的重要來源[1,2]。獼猴桃籽油維生素E含量達(dá)到0.81 mg/g，與常見食用植物油相比位居前列，豐富的VE可有效地防止α-亞麻酸等不飽和脂肪酸氧化。維生素E也是一種強(qiáng)有效的自由基清除劑，能保護(hù)機(jī)體細(xì)胞膜及生命大分子免遭自由基的攻擊，具有抗衰老、防治心血管疾病、提高機(jī)體免疫力、抗腫瘤等作用[3]。

紅陽(yáng)獼猴桃（又名紅心獼猴桃）是在四川蒼溪縣野生資源中發(fā)現(xiàn)并經(jīng)實(shí)生選育的世界級(jí)珍稀特優(yōu)獼猴桃新品種，中國(guó)獨(dú)有。與傳統(tǒng)獼猴桃品種相比，具有果實(shí)子房鮮紅色、營(yíng)養(yǎng)豐富、品質(zhì)優(yōu)良、濃甜清香、風(fēng)味特佳等特色[4]。在四川蒼溪、都江堰等地區(qū)產(chǎn)量很大。紅陽(yáng)獼猴桃籽油的成分和功能研究目前還未見報(bào)道。

1 提取工藝

傳統(tǒng)從獼猴桃籽油中提取油的方法主要有壓榨法、有機(jī)溶劑萃取法。壓榨法收率低，后續(xù)處理工序繁瑣。有機(jī)溶劑萃取會(huì)有溶劑殘留，所得的獼猴桃籽油顏色深并有點(diǎn)異味。與傳統(tǒng)方法相比，超臨界CO2萃取具有操作溫度低、溶解能力強(qiáng)、無毒、無污染、無溶劑殘留及產(chǎn)品易分離等優(yōu)點(diǎn)，特別適合食品工業(yè)生物活性物質(zhì)和熱敏性物質(zhì)的分離提取。另外，它還不需要油脂工業(yè)經(jīng)常采用的除磷脂、膠質(zhì)、蛋白、溶劑和臭味等雜質(zhì)的精煉工藝，可以極大地保持油脂的天然本色[5,6]。

1.1 材料與方法

新鮮獼猴桃籽：來自紅陽(yáng)獼猴桃，產(chǎn)自都江堰，由四川省自然資源科學(xué)研究院提供。經(jīng)石油醚萃取試驗(yàn)，測(cè)知其含油率為24.5%。超臨界二氧化碳萃取儀：型號(hào)TC-SFE-35-300-221Z。生產(chǎn)商沈陽(yáng)天誠(chéng)超臨界萃取有限公司。

獼猴桃籽油的超臨界CO2萃取工藝近幾年得到了一定的研究[7,8]。但由于設(shè)備和原料的不同，工藝參數(shù)及流程有所不同。本研究單位曾對(duì)根據(jù)現(xiàn)有條件對(duì)超臨界CO2萃取工藝的溫度、壓力和時(shí)間等參數(shù)進(jìn)行了單因素考察，綜合工藝流程如下：

干燥獼猴桃籽粉碎至20目；超臨界二氧化碳萃取，萃取工藝參數(shù)為萃取溫度40 ℃、萃取壓力28 MPa、萃取時(shí)間240 min，分離釜壓力8 MPa、溫度30 ℃；萃取所得植物油靜置18 h，減壓抽濾，得成品油。

表1 獼猴桃籽油超臨界CO2萃取收率

表2 獼猴桃籽油（批號(hào)120606/1）理化參數(shù)分析及含量測(cè)定

表3 獼猴桃籽油對(duì)小鼠體液免疫功能的影響（）

表3 獼猴桃籽油對(duì)小鼠體液免疫功能的影響（）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 劑量[mg/(kg·wb)] 動(dòng)物數(shù)(n) 溶血空斑數(shù)(×104/全脾) 半數(shù)溶血值陰性對(duì)照 10 5.14±0.14 79.55±11.35獼猴桃籽油低劑量組 100 10 7.23±0.18* 93.73±12.71*獼猴桃籽油中劑量組 200 10 8.62±0.13** 97.29±10.98*獼猴桃籽油高劑量組 400 10 8.96±0.28** 105.86±14.37**

1.2 結(jié)果與分析

三批獼猴桃籽經(jīng)超臨界CO2萃取后產(chǎn)油率見表1。

由表1可知該工藝條件下獼猴桃籽產(chǎn)油率平均為22.59%，三批生產(chǎn)出油率穩(wěn)定。如果將萃取溫度升至45 ℃或萃取壓力升至35 MPa，均可提升產(chǎn)油率。但油顏色變深偏紅，可能是由于色素雜質(zhì)被附帶萃出的緣故。

2 理化參數(shù)分析及含量測(cè)定

2.1 材料與方法

獼猴桃籽油：批號(hào)120606/1。儀器設(shè)備：GC-2010氣相色譜儀(島津)，氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)，HGA-2LB空氣發(fā)生器，KCH-500Ⅱ型氫氣發(fā)生器；依利特P200II型液相色譜儀，Diamonsil C18（2）柱。α-亞麻酸和亞油酸的含量測(cè)定，檢驗(yàn)依據(jù)：《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部。酸價(jià)和過氧化值測(cè)定，檢驗(yàn)依據(jù)：GB 2716-2005食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法。碘值測(cè)定，檢驗(yàn)依據(jù)：GB/T 5532-2008 動(dòng)植物油脂碘值的測(cè)定。皂化值測(cè)定，檢驗(yàn)依據(jù)：GB/T 5534-2008動(dòng)植物油脂皂化值的測(cè)定。維生素E測(cè)定，檢驗(yàn)依據(jù)：NY/T 1598-2008食用植物油中維生素E組分和含量的測(cè)定。

2.2 結(jié)果與分析

獼猴桃籽油（批號(hào)120606/1）理化參數(shù)分析及含量測(cè)定結(jié)果見表2。

根據(jù)GB 2716-2005食用油通用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求，食用油酸值應(yīng)不超過3 mg/g，過氧化值不超過0.25 g/100g，本批次產(chǎn)品符合要求。但在上一批次的試驗(yàn)中，由于采用了放置1年以上的獼猴桃籽，酸值和過氧化值均大量超標(biāo)，需采用堿煉、活性炭處理等工藝才能使產(chǎn)品精煉合格，步驟繁鎖，而且油的損失較大。故在提取獼猴桃籽油時(shí)，應(yīng)以新鮮獼猴桃籽為宜。

本產(chǎn)品取自都江堰所產(chǎn)的紅陽(yáng)獼猴桃，與以往文獻(xiàn)報(bào)道的原料來源有所不同。所得獼猴桃籽油中α-亞麻酸為59.5%，亞油酸含量為13.7%，與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的其他原料來源的獼猴桃籽油大致相符。碘值和皂化值差別也不大，提示其不飽和脂肪酸的含量大致接近。參照其他各文獻(xiàn)報(bào)道的維生素E含量偏差較大，除品種差異外，很可能是因?yàn)楂J猴桃籽油純化后易被氧化，維生素E起到抗氧化劑的作用，以自身分解保證獼猴桃籽油的穩(wěn)定。故獼猴桃籽油在貯存過程中還應(yīng)加入維生素E等抗氧化劑。

3 獼猴桃籽油體液免疫試驗(yàn)

根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003版），以獼猴桃籽油為供試樣品與市售產(chǎn)品進(jìn)行了體液免疫試驗(yàn)，以測(cè)試其在增強(qiáng)免疫方面的作用。

3.1 材料

供試品：獼猴桃籽油（批號(hào)120606/1），自制。動(dòng)物：昆明種小鼠，18～22 g，全雄，由成都中醫(yī)藥大學(xué)提供。豚鼠，350～400 g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)提供。儀器：溶血空斑自動(dòng)圖象分析儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、分光光度計(jì)、恒溫水浴、離心機(jī)、手術(shù)器械。

3.2 方法

3.2.1 抗體生成細(xì)胞檢測(cè)

取受試小鼠50只，根據(jù)體質(zhì)量按表3隨機(jī)分為陰性對(duì)照、獼猴桃籽油低劑量組、獼猴桃籽油中劑量組、獼猴桃籽油高劑量組。按表3灌胃給藥，每日1次。給藥25 d后，經(jīng)腹腔注射2%(v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC 0.2 mL。免疫5 d后的小鼠處死，取脾，制成細(xì)胞懸液，200目篩網(wǎng)過濾，洗滌、離心（1000 rpm）10 min。將瓊脂糖加熱溶解后，與等量雙倍Hank's液混合，分裝小試管，每管0.5 mL，再向管內(nèi)加10%(v/v，用SA液配制)壓積SRBC50 μL、脾細(xì)胞懸液20 μL，迅速混勻后，傾倒在已刷瓊脂糖薄層的玻片上，待瓊脂凝固后，將玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中溫育1.5 h，然后用SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體(1∶8)加入到玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)溫育1.5 h后，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。

3.2.2 血清溶血素測(cè)定

取受試小鼠50只，根據(jù)體質(zhì)量按表3隨機(jī)分為陰性對(duì)照、獼猴桃籽油低劑量組、獼猴桃籽油中劑量組、獼猴桃籽油高劑量組。按表3灌胃給藥，每日1次。給藥25 d后，經(jīng)腹腔注射2%(v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC 0.2 mL。免疫5 d后，摘除眼球取血于離心管內(nèi)，放置約1 h，使血清充分析出，2000 rpm離心10 min，收集血清。用SA緩沖液將血清稀釋為400倍，取1 mL置試管內(nèi)，依次加入10%(v/v，用SA緩沖液配制)壓積SRBC0.5 mL，補(bǔ)體1 mL(用SA緩沖液按1∶8稀釋)。另設(shè)不加血清的對(duì)照管(以SA緩沖液代替)。置37 ℃恒溫水浴中保溫25 min后，冰浴終止反應(yīng)。2000 rpm離心10 min，取上清1 mL，加都氏試劑3 mL。同時(shí)取10%(v/v，用SA緩沖液配制)的壓積SRBC0.25 mL，加都氏試劑至4 mL于另一試管中，充分混勻，放置10 min后，于540 nm處以對(duì)照作空白，分別測(cè)定各管光密度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值(HC50)表示，按下式計(jì)算：

樣品HC50=樣品光密度值/SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光密度值×稀釋倍數(shù)。

3.3 結(jié)果與分析

結(jié)果表明：獼猴桃籽油高劑量組與陰性對(duì)照組比較，HC50極顯著提高。獼猴桃籽油低劑量組、獼猴桃籽油中劑量組與陰性對(duì)照組比較，HC50顯著提高。見表3。

由試驗(yàn)結(jié)果可以看出，獼猴桃籽油具有顯著的增強(qiáng)免疫功能。這與其主要成分α-亞麻酸等不飽和脂肪酸的生理功能是相符的。

4 結(jié) 論

本次研究所用獼猴桃籽油均提取自產(chǎn)自都江堰的紅陽(yáng)獼猴桃。由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，所得獼猴桃籽油中α-亞麻酸為59.5%，亞油酸含量為13.7%，與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的其他原料來源的獼猴桃籽油大致相符。碘值和皂化值差別也不大，提示其不飽和脂肪酸的含量大致接近。體液免疫試驗(yàn)表明，獼猴桃籽油具有顯著的增強(qiáng)免疫功能。這與其主要成分α-亞麻酸等不飽和脂肪酸的生理功能是相符的。

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The Studies of Extraction, Composition and Enhancing Immune Function of the Kiwi Seed Oil

XIONG Tie-yi1,2, LUO Yu2,3
(1 Sichuan Nature Resources Science Academy, Chengdu 610015, China; 2 Sichuan Province Laboratory for Natural Resources Protection and Sustainable Utilization, Chengdu 610015, China; 3 Sichuan Aizhong Bio-pharmaceutical Technology Co., Ltd, Chengdu 610041, China)

Objective To extract oil from kiwi seeds for component analysis and enhancing immune function studies. Methods Kiwi fruit seed oil was extracted by supercritical CO2extraction. Its physicochemical properties and content of active ingredients were determined. And humoral immunity test was taken to study its enhancing immune function. Results The process parameters of supercritical CO2extraction are as follows: extraction temperature is 40 ℃, extraction pressure is 28 MPa, and extraction time is 240 min.The yield of oil is 22.59%. In kiwi seed oil the content of alpha linolenic acid is 59.5%. The humoral immunity test shows that the HC50in high-dose group very significantly increased compared with the negative control group. And the HC50in low-dose group and middle dose group significantly increased compared with the negative control group. Conclusion Kiwi seed oil has significant enhancing immune function.

Kiwi seed oil; Supercritical CO2extraction; Alpha linolenic acid; Enhancing immune function

R9

B

1671-8194（2014）20-0096-03

四川省科技支撐項(xiàng)目(2013GZX0161-6)資助

*通訊作者：E-mail：xiongtieyi@163.com