敖立實(shí)

（吉林省白城市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 白城 137000）

HPLC法同時(shí)測(cè)定五加芪菊顆粒中刺五加、菊花含量

敖立實(shí)

（吉林省白城市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 白城 137000）

目的 建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定五加芪菊顆粒中刺五加（以紫丁香苷計(jì)）和菊花（以3，5-O-二咖啡?；鼘幩嵊?jì)）含量的方法，為相關(guān)研究提供方法學(xué)參考。方法 采用DiamonsilC18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇為流動(dòng)相A，0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫。檢測(cè)波長(zhǎng)為348 nm。結(jié)果 紫丁香苷和3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸的線性范圍分別為0.10～40.0 μg/mL（r=0.9984）、0.05～10.0 μg/mL（r=0.9991），方法回收率分別為98.76%（n=6）、94.26%（n=6）。結(jié)論 所建立的方法準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好，在同一試驗(yàn)過(guò)程中，同時(shí)測(cè)定五加芪菊顆粒中刺五加、菊花含量。

五加芪菊顆粒；高效液相色譜法；刺五加；菊花；紫丁香苷；3，5-O-二咖啡?；鼘幩?/p>

五加芪菊顆粒具有益氣健脾，消食導(dǎo)滯的功效，用于脾虛食滯所致的高血脂癥的治療[1]。以黃芪、刺五加、菊花、山楂、麥芽五味藥材制成，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編 中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分 內(nèi)科 氣血津液分冊(cè)》[2]，標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)黃芪質(zhì)量進(jìn)行了控制，但對(duì)刺五加和菊花未進(jìn)行質(zhì)量控制。本方法采用同一實(shí)驗(yàn)方法，同時(shí)測(cè)定刺五加和菊花的含量，填補(bǔ)了標(biāo)準(zhǔn)的空白，更好的控制了五加芪菊顆粒質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 儀器

美國(guó)安捷倫液相色譜儀1260；BS-223電子天平；ZBS水浴鍋。

1.2 試藥試劑和對(duì)照品

圖1 對(duì)照（A：紫丁香苷；B：3，5-O-二咖啡?；鼘幩幔?/p>

圖2 紫丁香苷陰性對(duì)照

圖3 3，5-O-二咖啡?；鼘幩彡幮詫?duì)照

表2 紫丁香苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸回收率試驗(yàn)結(jié)果

紫丁香苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110279-201214；3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100094-201139）；甲醇為色譜純；水為純化水。

1.3 色譜條件

色譜柱：DiamonsilC18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相：甲醇為流動(dòng)相A，0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)：348 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：35 ℃。色譜柱的理論塔板數(shù)按紫丁香苷峰計(jì)算＞3000。見(jiàn)表1。

表1 色譜條件

1.4 對(duì)照品溶液的制備

取紫丁香苷對(duì)照品，精密稱定10.13 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得；取3，5-O-二咖啡?；鼘幩釋?duì)照品，精密稱定10.05 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，精密量取2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。

1.5 供試品溶液的制備

取本品，研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10 mL，置圓底燒瓶中，置水浴上蒸去甲醇，加2.5 mol/L硫酸溶液20 mL，超聲處理10 min使溶解，置水浴上加熱1 h，取出，放冷，用乙醚提取4次，每次25 mL，合并乙醚液，用水洗滌，低溫回收至干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2 方法學(xué)考察

2.1 專屬性實(shí)驗(yàn)

在上述色譜條件下測(cè)得的色譜圖，分別為混合對(duì)照、樣品陰性對(duì)照，紫丁香苷、3，5-O-二咖啡?；鼘幩岱蛛x良好，其他成分不干擾紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸的測(cè)定。見(jiàn)圖1～3。

2.2 線性范圍

分別精密量取紫丁香苷對(duì)照品溶液加甲醇制成0.10、0.20、1.0、5.0、20.0、40.0 μg/mL，3，5-O-二咖啡?；鼘幩釋?duì)照品溶液0.05、 0.1、0.5、2.0、5.0、10.0 μg/mL注入安捷倫1260高效液相色譜儀，以紫丁香苷對(duì)照品峰和3，5-O-二咖啡?；鼘幩釋?duì)照品峰面積積分值為縱坐標(biāo)，其進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，分別得回歸方程為y=0.0085+0.0578x，r＝0.9984（n=6），y=1.2021+4.8955x，r=0.9991（n=6）說(shuō)明紫丁香苷、3，5-O-二咖啡?；鼘幩嵩?.10～40.0 μg/mL和0.05～10.0 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn)

取紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸對(duì)照品溶液，注入安捷倫1260液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)樣量為20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積的平均值分別為7502356、5036511，其RSD為0.37%（n=6）。表明精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取紫丁香苷、3，5-O-二咖啡?；鼘幩釋?duì)照品溶液，注入安捷倫1260液相色譜系統(tǒng)，進(jìn)樣量為20 μL，在2、4、6、10、12、24、48 h分別測(cè)定。結(jié)果峰面積平均值分別為7482365、5012398，其RSD為0.56%（n=6）。表明溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 回收率試驗(yàn)

分別精密稱取紫丁香苷、3，5-O-二咖啡?；鼘幩釋?duì)照品20.24 mg、5.08 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

另精密稱取5批已知含量的五加芪菊顆粒內(nèi)容物適量，置100 mL量瓶中，加甲醇約50 mL，溶解，精密加上述對(duì)照品溶液10 mL，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得，分別精密吸取20 μL，注入高效液相色譜儀，按1.3項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2、3。

3 小 結(jié)

本實(shí)驗(yàn)對(duì)五加芪菊顆粒中刺五加、菊花中的有效成分紫丁香苷、3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸進(jìn)行分析，探索用一種實(shí)驗(yàn)方法對(duì)2種成分的同時(shí)測(cè)定，填補(bǔ)了標(biāo)準(zhǔn)的空白，有效的控制了五加芪菊顆粒的質(zhì)量。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)[S].2010版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.

[2] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002.

Simultaneous Determination the Content of Acanthopanax, Chrysanthemum in Wujia Qiju Granule by HPLC

AO Li-shi
(Baicheng Institute for Food and Drug Control, Baicheng 137000, China)

Objective To establish a method for simultaneously determining the content of acanthopanax (as measured by syringin), Chrysanthemum(as measure by (-)-3,5-Dicaffeoyl quinic acid) in Wujia Qiju granule. Methods Simultaneously determined by HPLC on DiamonsilC18(250 mm×4.6 mm,5 μm) by mobile phase of methanol (A) and 0.1% phosphonic acid solution (B) with gradient elution. Detection wavelength is 348 nm. Results The linear concentration ranges of the calibration curves for syringin and (-)-3,5-dicaffeoyl quinic acid were 0.10～40.0 μg/mL(r=0.9984),0.05～10.0 μg/mL(r=0.9991), respectively. The average recoveries for syringin and (-)-3,5-dicaffeoyl quinic acid were 95.42% (n=6),91.73%(n=6), respectively. Conclusion The method is accurate, highly sensitive and reproducible for simultaneously determination of content for acanthopanax and chrysanthemum in a single run by HPLC.

Wujia Qiju granule; HPLC; Acanthopanax; Chrysanthemum; Syringin; (-)-3,5-dicaffeoyl quinic acid

R914.1

B

1671-8194（2014）20-0035-02