（山東省濟(jì)寧市皮膚病防治院，山東 濟(jì)寧272100）

祛痤膠囊制劑處方來(lái)源于山東省濟(jì)寧市皮膚病防治院臨床經(jīng)驗(yàn)方，臨床已使用80余年，由玄參、浙貝母、桑白皮、夏枯草、當(dāng)歸等12味中藥組方，有清熱解毒、涼血活血之功，主治痤瘡熱毒血瘀證。采用現(xiàn)代制劑技術(shù)將該經(jīng)驗(yàn)方精制成膠囊劑，服用方便、療效良好，并且已獲國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利（專(zhuān)利號(hào)ZL200810138496.3）。為有效控制該制劑的質(zhì)量，采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)其主要成分玄參、夏枯草的含量進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器與試藥

DTQ500KG型多功能提取濃縮機(jī)組（湖南金一帆制藥機(jī)械有限公司）；FA1004型分析天平；Agilent1100型高效液相色譜儀（配真空脫氣機(jī)、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、紫外檢測(cè)器和Chemstation工作站，美國(guó)Agilent公司）。玄參、浙貝母、桑白皮、夏枯草、當(dāng)歸等13味中藥飲片（均購(gòu)自山東濟(jì)寧邦爾中藥飲片有限公司，質(zhì)量均符合2010年版《中國(guó)藥典（一部）》有關(guān)規(guī)定）；哈巴苷對(duì)照品（批號(hào)111729－200603）、迷迭香酸對(duì)照品（批號(hào)111871－201001），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方組成

制劑（g/1000粒）由玄參120g，浙貝母80g，桑白皮120g，夏枯草120g，當(dāng)歸120g等13味中藥組方。

2.2 制備工藝

浙貝母最細(xì)粉制備：取浙貝母真空干燥（70℃，－0.05MPa，含水分不多于5.0%），粉碎、過(guò)篩（120目），備用。

玄參、夏枯草等12味飲片提取物制備：取12味飲片加水煎煮提取3次，第1次加飲片總量6倍量的水減壓（－0.03MPa）煎煮2.0h，第2次加飲片總量5倍量的水減壓（－0.03MPa）煎煮1.5h，第3次加飲片總量3倍量的水減壓（－0.03MPa）煎煮1.0h，合并煎液，靜置24h，濾過(guò)，濾液減壓（－0.03→－0.05MPa）濃縮成相對(duì)密度為1.31～1.34（60～65℃）的稠膏，備用。

膠囊劑制備：取上述稠膏，加入浙貝母最細(xì)粉，混勻，真空干燥（70℃，－0.05MPa，含水分不多于5.0%），粉碎，過(guò)篩（120目），加入淀粉適量，使總細(xì)粉量為380g，混勻，裝入膠囊（0.38g/粒），制成1000粒，即得。

2.3 玄參的含量測(cè)定[1]

2.3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：乙腈－1%醋酸水溶液（23:77）；檢測(cè)波長(zhǎng)：278nm；流速：1mL/min，柱溫：35℃；理論板數(shù)按哈巴苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.3.2溶液制備

取哈巴苷對(duì)照品5.0mg，精密稱(chēng)定，置10mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得對(duì)照品濃貯備液；精密吸取濃貯備液適量，加50%甲醇制成60μg/mL的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取膠囊內(nèi)容物約4.0g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇50mL，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理（功率500W，頻率40kHz）50min，取出，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按祛痤膠囊處方和制備工藝制備不含玄參的陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3.3方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：分別精密吸取2.3.2項(xiàng)下3種溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖1。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜保留時(shí)間相同的位置上顯相同的最大吸收峰，而陰性對(duì)照品溶液色譜中則無(wú)此峰。結(jié)果表明，陰性對(duì)照品溶液對(duì)測(cè)定無(wú)明顯干擾。

圖1 玄參含量測(cè)定高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品濃貯備液適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為20，40，60，80，100μg/mL的系列溶液。吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液各10μL注入高效液相色譜儀，測(cè)定色譜峰面積積分值。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝2.2428×105X－1.2109×104，r＝0.989(n＝5)。結(jié)果表明，哈巴苷進(jìn)樣量在0.20～1.00μg范圍內(nèi)時(shí)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果的RSD為0.81%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液各10μL，分別于0，2，4，6，8h時(shí)測(cè)定峰面積。結(jié)果的RSD為0.92%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一供試品，依法制備5份供試品溶液并測(cè)定。結(jié)果的RSD為0.77%(n＝5)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知哈巴苷含量的同一供試品溶液5份，分別置具塞瓶中，各精密加入適量對(duì)照品溶液，搖勻，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 哈巴苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）

2.3.4樣品含量測(cè)定

取10批樣品，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL，注入高效液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算哈巴苷含量，10批樣品哈巴苷的含量平均值為0.9248mg/g，見(jiàn)表2。根據(jù)10批樣品含量測(cè)定結(jié)果，暫訂祛痤膠囊中玄參的含量標(biāo)準(zhǔn)，每粒含玄參以哈巴苷（C15H24O10）計(jì)不得少于0.28mg。

2.4 夏枯草的含量測(cè)定[2]

2.4.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：以甲醇－0.1%三氟乙酸溶液（42:58）；檢測(cè)波長(zhǎng)：330nm。理論板數(shù)按迷迭香酸峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

表2 樣品中哈巴苷含量測(cè)定結(jié)果（mg/g）

2.4.2溶液制備

取迷迭香酸對(duì)照品5.0mg，精密稱(chēng)定，置10mL容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得對(duì)照品濃貯備液；精密吸取濃貯備液適量，加70%甲醇制成50μg/mL的溶液，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取膠囊內(nèi)容物約5.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加70%甲醇50mL，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理（功率90W，頻率59kHz）30min，取出，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按祛痤膠囊處方和制備工藝制備不含夏枯草的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.4.3方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：分別精密吸取2.4.2項(xiàng)下3種溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖2。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的最大吸收峰，而陰性對(duì)照品溶液色譜中則無(wú)此峰。結(jié)果表明，陰性對(duì)照溶液對(duì)測(cè)定無(wú)明顯干擾。

圖2 夏枯草含量測(cè)定高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品濃貯備液適量，加70%甲醇制成質(zhì)量濃度為20，35，50，65，80μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取上述溶液各10μL注入高效液相色譜儀，測(cè)定色譜峰面積積分值。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝2.4703×104X－1.2916×103，r＝0.9957(n＝5）。結(jié)果表明，迷迭香酸進(jìn)樣量在0.20～0.80μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的RSD為0.46%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液各10μL，分別于0，2，4，6，8h時(shí)測(cè)定峰面積。結(jié)果的RSD為0.73%(n＝5)，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一供試品，依法制備5份供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果的RSD為0.64%(n＝5)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知迷迭香酸含量的同一供試品溶液5份，分別置具塞瓶中，各精密加入適量對(duì)照品溶液，搖勻，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 迷迭香酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（mg）

2.4.4樣品含量測(cè)定

取10批樣品，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL，注入高效液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算迷迭香酸含量，10批樣品迷迭香酸的含量平均值為0.5697mg/g，見(jiàn)表4。根據(jù)10批樣品含量測(cè)定結(jié)果，暫訂祛痤膠囊中夏枯草的含量標(biāo)準(zhǔn)為，每粒含夏枯草以迷迭香酸（C18H16O8）計(jì)不得少于0.17mg。

表4 10批樣品中迷迭香酸含量測(cè)定結(jié)果（mg/g）

3 討論

祛痤膠囊是濟(jì)寧市科技發(fā)展計(jì)劃重點(diǎn)開(kāi)發(fā)推廣應(yīng)用產(chǎn)品，已經(jīng)取得國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利。祛痤膠囊的制備精選現(xiàn)代工藝，配制過(guò)程不會(huì)使原組方中治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)生變化，生產(chǎn)可行、服用方便、患者服用依從性好。采用高效液相色譜法測(cè)定祛痤膠囊中玄參和夏枯草的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、精密度高，穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率均良好，可有效控制祛痤膠囊的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

[1]劉洪宇，鈕正睿，蔡鐵全.浙江產(chǎn)玄參不同采收季節(jié)哈巴俄苷和肉桂酸含量變化分析[J].中國(guó)藥師，2012，15（5）：613.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：989.