摘要：目的：分析地龍配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以保證地龍配方顆粒的臨床療效。方法：本次研究主要采用高效液相色譜法對地龍配方顆粒中的次黃嘌呤進(jìn)行定量

測定；采用薄層色譜法對地龍配方顆粒進(jìn)行定性研究；采用高效毛細(xì)管電泳法對地龍配方顆粒中的琥珀酸含量進(jìn)行測定。結(jié)果：地龍配方顆粒中次黃嘌呤的含量與峰面積呈現(xiàn)的線性關(guān)系良好。薄層色譜法檢測中的地龍配方顆粒與對照品在相應(yīng)的位置上，會呈現(xiàn)相同顏色的斑點。地龍配方顆粒中琥珀酸的濃度與峰面積的線性關(guān)系良好。結(jié)論：高效液相色譜法、薄層色譜法以及高效毛細(xì)管電泳法能夠有效地控制地龍配方顆粒的質(zhì)量，值得大力推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：地龍配方顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；分析研究

【中圖分類號】R927.2【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-8602（2014）06-0240-02

地龍原名為白頸蚯蚓，最初記載于《本經(jīng)》，書中將其列為下品[1]。其中，地龍蛋白主要提取于地龍，含有豐富的膠原酶、核酸以及微量元素等多種成分，被廣泛地運用于各種藥物中。地龍配方顆粒具有清熱、通絡(luò)以及利尿等功效，可用于腦梗塞、中風(fēng)以及關(guān)節(jié)麻痹等病癥的治療。本文選取高效液相色譜法對地龍配方顆粒中的次黃嘌呤進(jìn)行定量測定；采用薄層色譜法對地龍配方顆粒進(jìn)行定性研究；采用高效毛細(xì)管電泳法對地龍配方顆粒中的琥珀酸含量進(jìn)行測定。以期為更好地保證地龍配方顆粒的質(zhì)量提供一定的指導(dǎo)意義。

1儀器與試藥

1.1儀器

對地龍配方顆粒中的次黃嘌呤進(jìn)行定量測定主要采用高效液相色譜儀。日本島津LC-10ATVP溶劑輸入泵，HW-2000色譜工作站（南京千譜軟件有限公司制造），上海之信儀器有限公司制造的超聲波清洗器，AY-120電子天平，由廣州市富誠科技儀器有限公司制造的8W-離心機。

1.2試藥

地龍原藥材主要來自于江西樟樹和廣東惠州等地。地龍配方顆粒則來自于江陰天江藥業(yè)有限公司，批號分別為0412055、0407132。次黃嘌呤則來自于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號為F20050219。甲醇、色譜純；水、超純水；硅膠G由青島海洋化工廠制造。

2方法與結(jié)果

2.1地龍配方顆粒中次黃嘌呤含量的測定

色譜柱為ODS-EP5um，4.6mm*150mm，填充柱為不銹鋼材質(zhì)，來自于迪馬公司，編號為4DI81506。流動相為水、流速為1.0ml/min，波長為254nm[2]。同時，在此基礎(chǔ)上保證柱溫為室溫，地龍配方顆粒中的次黃嘌呤分類效果較為理想。其中，供試品溶液的制備抽取本品所研制成的細(xì)小粉末約0.073克，并對其進(jìn)行精密地稱定。同時，試驗人員將其放置于30毫升的容量瓶中，加入適量的水將其溶解和稀釋。在稀釋的過程中，試驗人員將容量瓶輕輕地?fù)u勻和過濾，然后取出過濾后的液體，作為試品的溶液標(biāo)本。然后，試驗人員參照供試品溶液制備的方法，制備適量的陰性對照品溶液。首先，實驗人員用精密稱稱取次黃嘌呤對照品約20毫克，并放置于100毫升的容量瓶中，通過加入一定比例的水對其進(jìn)行超聲處理和溶解，并進(jìn)行搖勻，形成貯備液。其次，試驗人員抽取貯備液20毫升，將其放置于100毫升的容量瓶中，然后加入一定比例的水對其進(jìn)行進(jìn)一步地稀釋至刻度，分別稀釋成溶度為不同型號的對照品溶液。再次，試驗人員分別吸取不同濃度的對照品，并將其分別注入液相色譜儀器進(jìn)行線性關(guān)系考察。其中，測定的回歸方程可以參照峰面積對對照品溶液濃度的回歸。最后，試驗人員提取濃度為8.0ug/ml-1的次黃嘌呤對照品溶液，并注入液相色譜儀器中進(jìn)行連續(xù)地測定，記錄每次測定的面積。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，次黃嘌呤峰面積的平均值為335.6，證明儀器的精密度良好。

2.2對地龍配方顆粒進(jìn)行定性研究

本次試驗中主要選取地龍配方顆粒1.0克，并加入清水20毫升，對其進(jìn)行加熱和放冷，將上清液進(jìn)行提取，作為供試品的溶液。同時，試驗人員選取0.5克的空白顆粒作為陰性對照溶液。在試驗過程中，地龍飲片的薄層鑒定方法與空白顆粒的鑒定方法相同。試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在供試品色譜中，斑點的顏色與對照品色譜的相同。最后，試驗人員將已經(jīng)制作好的溶液采用照薄層色譜法進(jìn)行試驗。具體步驟為：先每一種溶液吸取5ul，依次滴于同一材質(zhì)的硅膠G薄層板上，使用甲苯丙酮作為展開劑，依次展開、取出和晾干，在紫外燈下進(jìn)行檢視，與對照藥材色譜的相應(yīng)位置上也具有相同顏色的斑點。通過對地龍配方顆粒裝量情況進(jìn)行檢查發(fā)現(xiàn)，批號為0412055裝量差異值為4.17%，規(guī)定量為10%；水分含量為3.00%，規(guī)定量為6%；結(jié)果合格；批號為0407132裝量差異值為4.16%，規(guī)定量為10%；水分含量為4.50%，規(guī)定量為6%；結(jié)果合格。

2.3琥珀酸毛細(xì)管電泳的測定

本次試驗中主要采用反向毛細(xì)血管電泳分離對地龍藥材中的琥珀酸含量進(jìn)行測定。通常，在堿性條件下，琥珀酸陰離子的電離方向是由負(fù)極流向正極。為了使電滲流的方向與待分析成分琥珀酸陰離子的流動方向一致，試驗人員在試驗的過程中加入了電滲流抑制劑和改向劑。具體操作方法如下：首先稱取適量的琥珀酸對照品，加入一定比例的蒸餾水制作成儲備溶液。然后，試驗人員稱取適量的儲備溶液，分別配置成不同濃度的琥珀酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。同時，試驗人員對每一種濃度的琥珀酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積進(jìn)行測定。其中，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積作為縱坐標(biāo)形成一種線性回歸方程，得出A=5.589*104C+46.38[3]，R=0.998。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，琥珀酸的濃度與峰面積的線性關(guān)系良好。按照樣品溶液的制作方法，試驗人員還對不同批號的地龍配方顆粒中的琥珀酸的含量進(jìn)行了測定。

3討論

通過不斷的臨床研究表明，地龍能夠在治療濕疹、蕁麻疹以及糖尿病等過程中具有顯著的效果[4]。在本次試驗中分別使用水和不同濃度的乙醇對樣品進(jìn)行溶解，測定次黃嘌呤的含量，其中水溶解樣品中的提取含量較高，乙醇溶解樣品中次黃嘌呤的含量與乙醇的濃度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。由此可知，水溶液中次黃嘌呤的溶解度要大于乙醇溶液中次黃嘌呤的溶解度。

同時，在本次試驗中發(fā)現(xiàn)依照藥典中的方法出現(xiàn)了嚴(yán)重的脫尾現(xiàn)象，需要對該方法進(jìn)行進(jìn)一步地改進(jìn)。例如，試驗人員在試驗過程中可以將已經(jīng)準(zhǔn)備好的薄層板放置于烘箱里進(jìn)行烘干，從而可以明顯地改善脫尾問題。相對于傳統(tǒng)的使用薄層掃描法對地龍藥材中的琥珀酸含量進(jìn)行測定，本文采用毛細(xì)管電泳法對地龍配方顆粒中的琥珀酸進(jìn)行測定，具有快速、檢測成本低等優(yōu)點，因而值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]張紅梅，宋景政，譚紅勝，徐宏喜，李松林，陳士林.從湯劑到顆粒劑：中藥配方顆粒20年回顧與展望[J].世界科學(xué)技術(shù)（中醫(yī)藥現(xiàn)代化）.2012，08（20）：123-124.

[2]唐婉清，廖彩震，馮艷妮.劉法錦地龍藥材及地龍配方顆粒中鉛的含量測定[J].廣東藥學(xué).2013，06（30）：111-112.

[3]楊豐云，付廷明，郭立瑋，劉峰，張偉.地龍濕法超微粉碎提取物在模擬胃腸環(huán)境中的降解研究[J].藥學(xué)學(xué)報.2012，01（12）：156-157.

[4]李勇文.地龍的研究進(jìn)展[J].廣西醫(yī)學(xué).2004，05（15）：113-114.