摘要：目的：分析研究湖南省甲型H1N1病毒感冒，在大流行之后乙型流感病情的爆發(fā)情況，對病毒基因特征開展研究，探究造成其爆發(fā)的主要原因。方法：對我省2013年23家哨點醫(yī)院門診，流感樣病例進行采集，主要是咽拭子標本收集。選取10株乙型流感病毒進行基因組測序。結果在除核蛋白（NP）外，其他聚合酶（PB2，PBI，PA）以及血凝素（HA）近10個蛋白測試序列基因對比中，依據(jù)其系的分類進行研究。NP進化樹10株病毒都出現(xiàn)在BY分支里。相對于日常測試研究的病毒，PB1，PB2和NS2的堿基不少突變。結論：乙型流感病毒部分的基因位點，發(fā)生插入中，顯示儲病毒進化的持續(xù)性，這可能是甲型H1N1流感流行后，P型流感病毒變成優(yōu)勢毒株部分原因。

關鍵詞：HINI亞型；流感病毒A型；流感病毒B型；序列分析

【中圖分類號】R254【文獻標識碼】A【文章編號】1672-8602（2014）06-0103-01

流行性感冒是正翻病毒科，根據(jù)血類型不同分甲、乙和丙型。這其中，乙型流感病毒劃分Victoria和Yamagata兩個病毒系列。和甲型流感病毒表面類似，乙型流感病毒存在兩種糖蛋白，一種是血凝素（HA），另外一種是神經(jīng)氨酸酶（NA）。它們決定著病毒的抗原性。

乙型流感病毒中，因為基因片段主要是HAl以及HA2兩部分，形成了流感病毒的主要抗原區(qū)，該區(qū)域中，氨基酸（aa）變異與病毒抗原性反應，產(chǎn)生了乙型流感的暴發(fā)。為探討乙型流感病毒中包含的兩大譜系在進化特征的規(guī)律，本研究采用特殊檢測方法，對現(xiàn)有乙型流感病毒的HAl基因，開展系統(tǒng)發(fā)育學分析，采用分子鐘方法計算乙型流感病毒系實際的起源。

1、資料與方法

1.1一般資料我省14個地市23家流感檢測地點，采集的流感樣病例以及咽拭子的標本。

1.2一般方法

1.2.1病毒分離及鑒定。咽拭子標本采用抗菌藥物處理，接受了犬腎傳代（MDCK）細胞的注射，實現(xiàn)流感病毒分離，觀察細胞疾病突變病情況。采用100豚鼠紅細胞，測定器皿中物紅細胞凝集效價，將HA凝集效價≥1：8的培養(yǎng)液中，采用血凝抑制方法，展開流感病毒型調查鑒定。

1.2.2測試病毒序列。采用Qiagen的QIAmpViralRNA試劑盒，Invitrogen公司的高保真酶的Superscript，在第一步的時候，分36段擴增道路病毒全基因組序列，PCR產(chǎn)物純化后，使用為模板展開測序。然后使用AppliedBiosystems的BigDyeTerminatorv3.1測序試劑盒，待反應產(chǎn)物純化后，使用M13引物測序儀，實現(xiàn)對序列的測試。

1.2.3分析基因序列

基因進化樹中選擇GenBank里的WHO疫苗株BV系中，B/Malaysia/2506/2009（北半球2011-2012年）和B/Brisbane/60/2008（北半球2012-2013年，GenBank例包含HA和NA兩個序列。BY系中，B/Florida/4/2006（北半球2012-2013年），其他序列作為參考，使用Mega5.05測算ClustalW序列比對情況[1]。同時，構建進化樹。使用鄰一接算法以及Tajima-

Nei模型，Bootstrap重復值大小為1000，氨基酸同源性計算時候，使用Mega5.05完成。病毒表面蛋自作為N2編號，其余D編號為B型序列。

2、結果

2.1疫情暴發(fā)監(jiān)測。通過對14個地市監(jiān)測一共有標本共7993份。這其中，鑒定毒

株610份，陽性率為7.600。，乙型流感病毒一共364株，占總數(shù)的59.7%；甲型H1N1流感，一共60株，占9.800。季節(jié)性H3流感病毒一共184株，占30.2。其他沒有辦法定型一共2株，占0.3%。

2.2耐藥位點研究。對測序的10株病毒中耐藥位點研究，152位為精氨酸，198位為天冬氨酸，222位為異亮氨酸，250位為絲氨酸，其他402位使甘氨酸。所有病毒均未發(fā)現(xiàn)有NA耐藥性的突變的表現(xiàn)。

2.3疫情病毒的特征。本次研究中，共有流感樣癥患者15例，學生12例，其中教師3例。兩次疫情中，均有流感性臨川表現(xiàn)，但狀況較輕，并發(fā)癥沒有伴隨出現(xiàn)。其中，2株病毒與日常監(jiān)測病毒開展了11種蛋白的氨基酸序列特征的比較，B/HunanWuling/35/2010中，NA中74位氨基酸是亮氨酸，NB蛋白中78位氨基酸均有絲氨酸的進入，PB2發(fā)生K576R突變。

3、結論

從首例甲型H1N1病例被監(jiān)測以來，病例的人數(shù)逐漸增加，特別是在11月份為最多，之后開始回落[2]。2013年，乙型流感病毒變成優(yōu)勢毒株，BV系和BY系一同共存。當前，我國使用WHO三價疫苗中，H3亞型及乙型各1株，H1亞型1株，所以，乙型流感病毒只有1個系毒株。本研究證明，乙型流感病毒里的11種蛋白的氨基酸，在同源性方面比較高，大規(guī)模的改變沒有發(fā)現(xiàn)。病毒表面抗原HA1和NA中，突變位點的分析研究意義重大[3]。如果兩個系的病毒HA1，在4個抗原決定簇，就會產(chǎn)生120環(huán)，150環(huán)，160環(huán)和190螺旋。并且均有氨基酸的變異的可能。最終導致病毒抗原變異C97。

總的來說，基因位點插入顯示出病毒持續(xù)進化，夜市導致此甲型H1N1流感大流行后，乙型流感病毒變成優(yōu)勢毒株的主要原因。

參考文獻

[1]陳繼明，郭元吉，吳昆昱，等.乙型流行性感冒病毒兩大譜系的起源及其演變特征.病毒學報，2001，17（4）.

[2]孟勝利，徐葛林，雷永良，等.中國狂犬病病毒遺傳多樣性分析中國生物制品雜志，2010（50）

[3]潘曉玲.乙型腦炎病毒全基因組分子進化及基因重組研究.北京：中國疾病預防控制中心，2009