摘要：實踐探析的目的是，針對在礦泉水中糞鏈球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌以及銅綠假單胞菌的選擇性培養(yǎng)基的檢測效果進行比較。方法上是采用濾膜法，分別把致病菌在基礎(chǔ)培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基上產(chǎn)生的菌落的數(shù)量做一個比較，然后針對其生長率做出計算，然后針對其抑菌效果做出計算，還要對實際的樣品進行抽檢。實驗的結(jié)果，一些相關(guān)的致病菌在十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基A、十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基B、SPS、以及TSC上面的生長率是95%；而且大腸埃希菌在上面的幾種選擇性培養(yǎng)基上面都得到了抑制。在對市場上流通的20多種瓶裝礦泉水的細菌總數(shù)進行抽查的時候，都沒有檢查出致病菌來。得出結(jié)論，可以在礦泉水致病菌檢測的國家標準中引入十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基A、SPS、KF以及TST等。

關(guān)鍵詞：選擇性培養(yǎng)基 礦泉水 抑菌性 致病菌

中圖分類號：R155.5 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）12-0037-01

近年以來，隨著國家市場經(jīng)濟發(fā)展不斷的標準化，國家也開始對飲用的天然礦泉水的檢測標準不斷的完善。最新的檢測標準已經(jīng)對銅綠假單胞菌、糞鏈球菌、大腸群菌以及產(chǎn)氣莢膜梭菌等菌類明確的列入了檢測標準中。本文將會對天然飲用礦泉水的致病菌的檢查項目和在檢查過程中如何應(yīng)用選擇性培養(yǎng)基仔細的作出分析探討，下面就是要探討的主要內(nèi)容。

1研究資料以及研究方法

1.1一般性的資料

1.1.1 對本次實驗所選用的菌株

在這一次的實驗中，所選用的菌株有銅綠假單胞菌、糞鏈球菌、大腸埃希菌以及產(chǎn)氣莢膜梭菌四種標準的菌株，而且這幾種菌株都是由廣東省的微生物研究院微生物檢測技術(shù)的研發(fā)中心所提供的。

1.1.2 對于選擇性培養(yǎng)基的篩選

在本次實驗中共選用了6種培養(yǎng)基，它們分別是SPS、十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基A、十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基B、TSC、KF以及國產(chǎn)的Drake’s19培養(yǎng)基。在這六種培養(yǎng)基中，十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基A和十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基B是外國的微生物研發(fā)公司所提供的，而Drake’s19培養(yǎng)基、SPS、TST以及KF都是由北京的某科技公司所提供的。

1.1.3 其他的一些儀器和設(shè)備

這次實驗所用到的儀器有美國MILLIPORE的綠膜過濾器。還要就是用來做對照的基礎(chǔ)性培養(yǎng)基，分別是品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基以及腦心浸萃瓊脂培養(yǎng)基三種類型，也是由北京的某科技公司所提供的。本次實驗所用稀釋液是0.85%的滅菌以后的氯化鈉溶液，蛋白胨水的濃度規(guī)格是0.1%而且PH值是7.0；除此之外，本次實驗所用到的礦泉水是從市場上各個大超市中所取得的。

1.2 本次實驗的實驗方法

1.2.1 制備菌懸液

首先要把糞鏈球菌、銅綠假單胞菌以及大腸埃希氏菌的標準菌株接種在營養(yǎng)瓊脂中，然后將其放到35℃的環(huán)境中停留二十小時到二十四小時，讓其進行復(fù)蘇，然后要選取接種復(fù)蘇之后的單菌落，再一次的接種到營養(yǎng)肉湯的培養(yǎng)液之中，將其放到36℃的環(huán)境之中再培養(yǎng)二十小時到二十四小時，形成備用的菌懸液。另外，把產(chǎn)氣莢膜梭菌在皰肉營養(yǎng)液中進行接種，將其置于36℃的環(huán)境中培養(yǎng)二十小時到二十四小時，就制成了備用的菌懸液。取出一部分菌懸液并且利用比濁器制作成活菌懸液，然后再把制成的活菌懸液逐一的進行10倍的稀釋，這樣就制作成了濃度規(guī)格各不相同的細菌懸液。

1.2.2 對糞鏈球菌進行檢驗

先取三個稀釋度適宜的糞鏈球菌懸液各1ml，然后把這些糞鏈球菌懸液制作成模擬的水樣250ml，然后把這些水樣進行濾膜過濾，然后在分別的把濾膜放到腦心浸萃瓊脂培養(yǎng)基之中和KF瓊脂培養(yǎng)基之中做對照培養(yǎng)，然后把它們放置于溫度是36℃的環(huán)境之中進行培養(yǎng)，大約培養(yǎng)48小時。然后對這個實驗過程實驗8次，8次之后做菌落的計數(shù)，然后把細菌在培養(yǎng)基里面的生長率給計算出來。

1.2.3 對銅綠假單胞菌進行檢驗

同樣的取出三個稀釋度適宜的細菌懸液，每一個各1ml，然后制成模擬的水樣各250ml，然后用濾膜進行過濾，然后把濾膜分別的放置到十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基A、Drake’s19以及瓊脂培養(yǎng)液B之中，然后把它們分別放到環(huán)境溫度是36℃的地方進行48小時的培養(yǎng)，然后在做一個菌落的計數(shù)，然后對細菌在培養(yǎng)基里面的生長率進行一個計算。為了確保實驗結(jié)果的準確性，對本次實驗過程要至少重復(fù)8次。

1.2.4 抑菌的實驗

取出三個稀釋度適宜的大腸埃希菌懸液，每一個各取1ml，然后把它們稀釋成為50ml的模擬的水樣，然后在用無菌濾膜進行過濾，把濾膜放置在倒好的選擇性培養(yǎng)基的平板之上，然后再選取三個稀釋度相同的大腸埃希菌懸液做一次過濾，把濾膜放到品紅亞硫酸鈉瓊脂培養(yǎng)基的平板上面，把溫度調(diào)到和細菌檢驗環(huán)境同樣的溫度上，然后培養(yǎng)二十四到四十八小時，然后在對菌落數(shù)和細菌的生長率進行計算。

1.2.5 實驗結(jié)果的計算方法

生長率的計算公式為：生長率=選擇性培養(yǎng)基上面的菌落數(shù)/對照基上面的菌落數(shù)*100%。然后用統(tǒng)計軟件計算出生長率的平均值和95%的置信區(qū)間，把生長率當作對數(shù)進行轉(zhuǎn)換以后作方差的分析以及檢驗比較各生長率之間的差異。

2 實驗的結(jié)果

2.1 以銅綠假單胞菌為實驗的生長率的比較

通過對實驗結(jié)果之間的比較發(fā)現(xiàn)，銅綠假單胞菌在十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基B上面細菌的生長率和其他兩組的選擇性培養(yǎng)基上細菌的生長率相比較，很明顯的要低于其他的兩組，有十分顯著的差異。

2.2 對一些不是目標菌的抑菌效果

本次實驗采用濾膜的方法，分別把含有大腸埃希菌的濾膜轉(zhuǎn)移到選擇性培養(yǎng)基十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基A、KF糞鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基十六烷三甲基溴化銨瓊脂培養(yǎng)基B、Drake’s19、SPS、以及TST培養(yǎng)基還有對照組的品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上面，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑菌性質(zhì)控菌的大腸埃希菌在六組選擇性培養(yǎng)基上都沒用出現(xiàn)生長，抑菌效果非常的好，抑菌率甚至已經(jīng)到達100%。

3 結(jié)語

通過本次實驗的抽樣檢驗，我們可以明確的發(fā)現(xiàn)，目前我們國內(nèi)市場上流通的瓶裝礦泉水的致病菌的污染是控制的非常好的，基本上沒有什么問題。而且本次實驗還間接的證明了選擇性培養(yǎng)基的檢查方法可以引入到國家標準的檢查方法中。

參考文獻

[1]徐紅，吳清平，孟凡亞，張菊梅.選擇性培養(yǎng)基在礦泉水致病菌檢測中的應(yīng)用研究[A].中國微生物學(xué)會環(huán)境微生物專業(yè)委員會.第十次全國環(huán)境微生物學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C].中國微生物學(xué)會環(huán)境微生物專業(yè)委員會，2007.

[2]孟凡亞，吳清平，蔡芷荷，劉秀梅，郭偉鵬.選擇性培養(yǎng)基在礦泉水致病菌檢測中的應(yīng)用研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2007（01）.