摘要：人工合成著色劑因其具有色澤鮮艷，著色力強(qiáng)，色調(diào)多樣等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于食品加工領(lǐng)域。由于多以苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品為原料，經(jīng)過磺化、鹵化、硝化、偶氮化等一系列有機(jī)反應(yīng)化合而成，大多為含有R—N N—R′鍵、苯環(huán)或氧雜蒽結(jié)構(gòu)的化合物；同時(shí)合成著色劑中含有砷、鉛、銅、苯酚、苯胺、乙醚、氯化物和硫酸鹽等化學(xué)物質(zhì)，它們對(duì)人體存在一定的不安全性或產(chǎn)生有害作用。因此在食品加工過程中必須嚴(yán)格控制使用品種、范圍和數(shù)量，限制每日允許攝入量（ADI） 。有些色素長(zhǎng)期低劑量攝入，也存在致畸、致癌的可能性。

關(guān)鍵詞：食品檢測(cè) 著色劑 測(cè)定方法

中圖分類號(hào)：TS202 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2014）04-0030-02

鑒于食用合成色素的不安全性，國(guó)家也加強(qiáng)了對(duì)合成色素的監(jiān)管，制訂了食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)（GB 2760-2011），另外對(duì)合成色素的檢測(cè)也非常重要，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：（1）《GB/T 5009.35-2003食品中合成著色劑的測(cè)定》中規(guī)定了對(duì)新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、赤蘚紅、亮藍(lán)、靛藍(lán)這8種合成色素檢測(cè)方法；（2）《GBT 21916-2008水果罐頭中合成著色劑的測(cè)定高效液相色譜法》中規(guī)定了對(duì)水果罐頭中檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅這8種合成色素檢測(cè)方法；（3）《GBT 9695.6-2008肉制品胭脂紅著色劑的測(cè)定》中規(guī)定了對(duì)肉制品中胭脂紅著色劑的測(cè)定方法。

由于三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的適用基質(zhì)不盡相同，其樣品前處理也存較大差異?！禛B/T 5009.35-2003》雖然稱作“食品中合成著色劑的測(cè)定”，但其前處理過程中只描述了汽水、配制酒、糖果、蜜餞、巧克力糖衣等基質(zhì)的處理方法；《GBT 21916-2008》規(guī)定了適用基質(zhì)為水果罐頭；《GBT 9695.6-2008》規(guī)定了適用基質(zhì)為肉制品、參數(shù)為胭脂紅。在大量的實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，我們實(shí)際的測(cè)試基質(zhì)及測(cè)試項(xiàng)目，已經(jīng)超出以上標(biāo)準(zhǔn)的限制范圍。通過對(duì)各標(biāo)準(zhǔn)的整合，建立能適用更多基質(zhì)、測(cè)試更多參數(shù)的前處理方法，能較好地將樣品中的合成著色劑吸附提取同時(shí)對(duì)雜質(zhì)有效凈化，從而大大提高檢測(cè)的精密度和準(zhǔn)確度。

1 材料與方法

1.1 儀器與條件

（1）高效液相色譜：Agilent 1200配有二極管陣列檢測(cè)器或等同性能儀器。（2）色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18，4.6mm×250mm，5μm或等效產(chǎn)品。（3）流動(dòng)相：乙腈：磷酸鹽緩沖溶液（pH6.5±0.2）梯度洗脫。（4）流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：30℃。（5）檢測(cè)器：DAD檢測(cè)器，350nm，430nm，520nm，590nm，630nm。

1.2 試劑耗材

（1）人工合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅。超純水溶解，冷藏保存。（2）甲醇、乙腈為色譜純。（3）乙醇、乙酸、氨水、檸檬酸為優(yōu)級(jí)純。（4）實(shí)驗(yàn)用水：一級(jí)水和三級(jí)水（ISO 3696）。（5）乙醇：氨水：水=7：2：1（V/V/V）：往100mL容量瓶中加入70mL乙醇和20mL氨水，然后加超純水至刻度，混合均勻。（6）20%檸檬酸溶液：稱取20g檸檬酸（分析純），加水溶解并稀釋至100mL。（7）甲醇-甲酸溶液6：4量取甲醇600mL，甲酸400mL，混勻。（8）聚酰胺粉（尼龍6）：過200目篩。（9）針筒式過濾器0.45mm聚四氟乙烯（PTFE）。

1.3 樣品處理

（1）樣品預(yù)處理；樣品取可食部分粉碎均勻；液體飲料按《GB/T 5009.35-2003》處理。

（2）樣品提?。喝∵m量樣品于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入10～20mL乙醇-氨水-水（7：2：1）超聲提取15min，離心分去上清液于50mL容量瓶中，將殘?jiān)偬崛∫淮危喜⑸锨逡?，定?0mL。（3）樣品凈化：準(zhǔn)確分取提取液20mL于100mL燒杯中，用檸檬酸溶液調(diào)節(jié)pH=4左右，加熱至60℃，加入1.5g聚酰胺粉，加水調(diào)成粥狀，以G3垂融漏斗抽濾，用60℃、pH=4的水洗滌3～5次，然后用甲醇-甲酸溶液洗滌3～5次，再用純水洗至中性，用乙醇-氨水-水洗脫3～5次，合并洗脫液用乙酸中和，蒸發(fā)近干，用水定容至2mL，過（PTFE）膜，上機(jī)HPLC測(cè)試，DAD光譜定性。（4）標(biāo)準(zhǔn)系列配制及測(cè)定：同國(guó)標(biāo)方法。外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑（乙醇：氨水：水=7：2：1）的選擇

本方法測(cè)試的人工合成色素均為水溶性的。簡(jiǎn)單基質(zhì)如糖果、汽水等用蒸餾水提取是非常有效的；但對(duì)于脂肪、蛋白、果膠及其他固形物含量較高的樣品，其水溶性差，固形物對(duì)合成著色劑有較大吸附，影響回收率。本方法采用的提取溶劑，能夠降低水溶性雜質(zhì)的溶解，有效沉淀蛋白，合成色素不隨蛋白質(zhì)沉淀，提高色素的溶出率。

（1）乙醇的存在可降低水溶性蛋白的溶解，但是色素在乙醇中的溶解度很低，因此采用乙醇-水的混合液提取。（2）本方法測(cè)試的合成著色劑多數(shù)為酸性染料，提取液中加入氨水，可提高色素的提取效率。（3）對(duì)于果脯、蜜餞等果膠含量較高的樣品，如果用水提取，樣液非常黏稠，在聚酰胺粉凈化過程中，容易堵塞垂融漏斗，使實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。采用乙醇氨水提取，可有效降低果膠溶解度，樣品提取液較澄清，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行順利。

2.2 儀器條件選擇

流動(dòng)相中緩沖鹽的pH為6.5左右時(shí)，目標(biāo)物的保留時(shí)間和峰形較好，雖有個(gè)別物質(zhì)拖尾，但所有被測(cè)組分能夠有效分離，滿足分析要求。

2.3 精密度和準(zhǔn)確度

經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)積累，本方法的測(cè)試精密度和準(zhǔn)確度滿足相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，加標(biāo)回收率70%～120%。

3 結(jié)論

采用本方法測(cè)試食品中水溶性人工合成著色劑，方法適用范圍廣泛，提取效率高，損失小，方法穩(wěn)定，精密度和準(zhǔn)確度均得到滿意結(jié)果，能夠滿足分析要求。在處理簡(jiǎn)單基質(zhì)時(shí)，能大幅度節(jié)約測(cè)試時(shí)間，提高工作效率，很有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1]《GB/T 5009.35-2003食品中合成著色劑的測(cè)定》.

[2]《GB/T 21916-2008 水果罐頭中合成著色劑的測(cè)定 高效液相色譜法》.

[3]《GB/T 9695.6-2008 肉制品 胭脂紅著色劑的測(cè)定》.