摘要：北冬蟲夏草與冬蟲夏草營養(yǎng)成分相當，但冬蟲夏草生長環(huán)境、寄存條件的特殊性導(dǎo)致其產(chǎn)量低、價格高、不能人工栽培，故而研究可以人工栽培的北冬蟲夏草具有一定的理論與實際意義。本文選取三種北冬蟲夏草鮮品，對其進行北冬蟲夏草菌種的分離純化，根據(jù)栽培后北冬蟲夏草的長勢情況進行感官評定、營養(yǎng)成分分析等，判定較優(yōu)菌種，以提供活力較高、栽培較優(yōu)質(zhì)的北冬蟲夏草菌種資源。經(jīng)分離鑒定，獲得了三株北冬蟲夏草菌，對這三種菌進行栽培評比，得出2#鮮草分離出的菌種栽培品質(zhì)較優(yōu)。

關(guān)鍵詞：北冬蟲夏草 評比 栽培

中圖分類號：S567.35 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）04-0093-03

0 引言

北冬蟲夏草[Cordyceps militaris（L）Link]又稱北冬蟲夏草、蛹蟲草，主要寄生于鱗翅目昆蟲的蛹體上，它是昆蟲蛹體和蟲草子實體構(gòu)成的復(fù)合體。北冬蟲夏草含有多種營養(yǎng)成分，其主要成分為蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、超氧化物歧化酶（SOD）、多種維生素、18種人體必需的氨基酸和硒、鋅、鈣等20多種微量元素[1]，有提高免疫力、抗菌、抗輻射、抗腫瘤、預(yù)防動脈硬化等多種功效，已被衛(wèi)生部批準為藥食兩用真菌。研究顯示：人工培育的北冬蟲夏草子實體與天然的冬蟲夏草兩者在有機和無機營養(yǎng)元素種類上基本一致，但在主要功能成分上北冬蟲夏（人工）比天然冬蟲夏草的含量高[2]。由于野生蟲草資源被大量采挖，其生存環(huán)境、寄生條件又較為特殊，導(dǎo)致資源枯竭，市場價格昂貴，一般消費者難以接受。而且隨處采集北冬蟲夏草既浪費人工，又難于控制北冬蟲夏草品質(zhì)。因此，人工大范圍栽培北冬蟲夏草實為迫切。為保證栽培成的北冬蟲夏草性狀優(yōu)良、營養(yǎng)價值豐富，應(yīng)選擇品質(zhì)較優(yōu)的北冬蟲夏草菌種進行栽培。本文選取三種不同來源的北冬蟲夏草菌種進行栽培，對蟲草長勢、營養(yǎng)成分含量等進行比較，評選出最適于栽培的菌種。

1 材料與方法

1.1 鮮品來源

選用三種途徑得到的北冬蟲夏草，分別為：（1）市售北冬蟲夏草鮮品。（2）東北林業(yè)大學(xué)生命學(xué)院栽培的北冬蟲夏草鮮品。（3）網(wǎng)上購買的北冬蟲夏草鮮品。

1.2 培養(yǎng)基

1.2.1 分離用培養(yǎng)基

改良PDA[3]。

1.2.2 液體菌種培養(yǎng)基

PDA液體培養(yǎng)基[4][5]。

1.2.3 栽培用培養(yǎng)基

改良大米培養(yǎng)基[6]。

1.3 分離純化方法（如圖1）。

1.4 液體菌種制備方法

待3種鮮草的斜面培養(yǎng)基長滿后，分別將得到的菌塊接種于制備的液體培養(yǎng)基中，標號，20℃120r/min搖床震蕩培養(yǎng)7-8d至菌種成熟[8，9，10]。

1.5 栽培及管理方法

（1）接種：將配置好的栽培培養(yǎng)基于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)121℃下滅菌30min。將3種鮮草的液體菌種分別接入栽培培養(yǎng)基中，且每組各選取3個玻璃瓶接種，作為對照試驗，以減小誤差，接種量一般為每瓶10ml，每組玻璃瓶標記為A1i、A2i、A3i（i=1、2、3）。（2）菌絲體培養(yǎng)：將接種后的玻璃瓶置于25℃的環(huán)境下進行絕對避光培養(yǎng)。（3）誘導(dǎo)子實體形成：15-20d左右菌絲長滿培養(yǎng)基基部。下一步需光照和溫差刺激。移入20-25℃的環(huán)境中進行光強為500lx的光照培養(yǎng)，每天光照10h以上。當菌絲轉(zhuǎn)色為橘黃色時，在薄膜上扎小孔進行通氣，并保持濕度70%-85%[11]。（4）待子實體成熟后進行采收檢測。

1.6 評價方法

栽種培養(yǎng)過程中，記錄每瓶子實體生長形態(tài)（包括整齊度）、色澤、轉(zhuǎn)色時間、菌絲滿瓶時間、子實體成熟所需時間及子實體粗細。以下表1對各組進行評分。

1.7 活性物質(zhì)檢測

測定采收后的北冬蟲夏草中蟲草多糖及蟲草素含量，以比較3種來源北冬蟲夏草的質(zhì)量。

（1）蟲草多糖含量測定：使用蒽酮-硫酸法測定北冬蟲夏草多糖含量[12]。（2）蟲草素含量測定：使用HPLC-DAD法測定北冬蟲夏草中蟲草素含量[13]。

2 結(jié)果與分析

2.1 鮮品分離菌株顯微形態(tài)

符合北冬蟲夏草顯微結(jié)構(gòu)，3株分離菌進行栽培試驗，分別編號為1#、2#和3#北冬蟲夏草菌。（表2）

2.2 三種鮮品分離菌種的栽培研究

將三種鮮品經(jīng)分離純化、栽培管理后，各鮮品長勢情況記錄如（表3）。

2.3 檢測結(jié)果

三種鮮品所制得的液體菌種的菌球數(shù)量分別為54個/10ml、65個/10ml、48個/10ml。測量每組蟲草的平均鮮重為12.5g、15g、10g。使用HPLC-DAD法測定北冬蟲夏草中蟲草素含量及蒽酮-硫酸法測定蟲草多糖含量，繪制如下表4。

綜合分離菌生長速度、栽培評定打分和營養(yǎng)成分分析，鮮品2分離得到的菌種栽培性能和營養(yǎng)成分較佳。

3 結(jié)語

三種不同來源的鮮草分離后，斜面培養(yǎng)基上均無雜菌產(chǎn)生，可見都未受雜菌污染，較為純正。相同條件下液體菌種中菌球數(shù)量的高低，可見菌種的繁殖能力，通過比較，繁殖能力：鮮草2>鮮草1>鮮草3。比較9個玻璃瓶中蟲草的長勢情況及每組平均評分，可知3種鮮草菌種的生產(chǎn)能力，即鮮草2>鮮草1>鮮草3。蟲草中蟲草酸含量比較結(jié)果為鮮草2>鮮草1>鮮草3。蟲草多糖的比較結(jié)果為鮮草2>鮮草3>鮮草1。

通過分析實驗所得數(shù)據(jù)，鮮草2即東北林業(yè)大學(xué)生命學(xué)院培養(yǎng)的北冬蟲夏草分離的2#菌株在繁殖能力、生產(chǎn)能力、蟲草素含量、蟲草多糖含量都明顯高于其他兩種蟲草。更加適合人工栽培，即可將鮮草2制得的菌種進行保藏，用于工業(yè)生產(chǎn)。

參考文獻

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