摘要：建立HPLC測定荷葉配方顆粒中荷葉堿含量的方法。方法：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水-三乙胺-冰醋酸（27：70.6：1.6：0.8）為流動相；流速：1ml/min；檢測波長為270nm；柱溫：30℃。理論板數(shù)按荷葉堿峰計應不低于2000。結果：荷葉堿在0.0408～0.3072g 范圍內(nèi)具有良好的線性關系，r= 0.9999，平均回收率為97.39%，RSD=2.04%（n=6）。結論：本法簡便、準確，靈敏度高，重復性好，可用于荷葉成分的含量測定。

關鍵詞：荷葉 高效液相色譜 含量

中圖分類號：R151 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）04-0022-02

荷葉為睡蓮科植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn的葉。屬于“既是食品又是藥品”的物品，其在食用及藥用兩方面均有較廣泛的應用[1]，具清熱解暑、升發(fā)清陽、涼血止血之功[2-4]?！侗静菥V目》載“荷葉服之，令人瘦劣”[5]。民間有用荷葉治療肥胖癥的記載[6]。荷葉富含生物堿和黃酮類兩大主要活性成分[7-9]?，F(xiàn)代研究顯示荷葉堿為荷葉中的主要降脂活性成分。荷葉配方顆粒是以荷葉飲片為原料，經(jīng)過提取、分離、濃縮、干燥、制粒、包裝等生產(chǎn)工藝，加工制成的一種新型配方用藥，本實驗采用高效液相色譜技術，對荷葉配方顆粒中的荷葉堿進行了含量測定。以期為荷葉資源進一步的開發(fā)和利用提供幫助。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent Technologies 1260 Infinity高效液相色譜儀。

荷葉堿化學對照品：購自中國藥品生物制品檢定所提供，批號：111566-201208，規(guī)格：20mg。其他所用試劑均為色譜純和分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液制備

取荷葉堿對照品10.2mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得荷葉堿對照品的儲備液；吸取1ml儲備液，置于10ml量瓶中，加甲醇定容，即得（每1ml含荷葉堿20.4g）。

2.1.2 供試品溶液制備

取荷葉干膏適量，研磨，精密稱取0.5g，置具塞三角燒瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞后稱定重量，超聲處理30分鐘，取出放冷后，稱定，補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇，搖勻，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（依利特 4.6mm×250mm）。流動相：乙腈-水-三乙胺-冰醋酸（27：70.6：1.6：0.8）。檢測波長：270nm。流速：1ml/min。柱溫：30℃。理論板數(shù)：按荷葉堿峰計，應不低于2000。

2.3 線性關系考察

精密吸取系列對照品溶液依次為2ul、4ul、8ul、12ul、16ul、18ul，注入液相色譜儀中，并以進樣量（g）為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，進行線性關系考察，并繪制標準曲線，計算回歸方程：y=3959.2x-5.3897，r=0.9999，說明荷葉堿在0.0408～0.3072g范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.4 精密度考察

精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20l，連續(xù)進樣6次，依法測定，記錄峰面積積分值，計算，考察精密度，葉堿峰面積的平均值為1739.517，RSD為0.34%。

2.5 穩(wěn)定性考察

精密吸取同一供試品溶液及對照品溶液各20l，每隔一定時間分別注入液相色譜儀，依法測定，以荷葉堿峰面積積分值為指標，進行穩(wěn)定性考察。結果顯示對照品溶液和供試品溶液在24小時內(nèi)測定結果的RSD值分別為0.52%、1.62%，表明荷葉堿的穩(wěn)定性良好，即24小時內(nèi)測定結果可靠。

2.6 重復性試驗

精密稱取同一批樣品6份，按供2.1.2溶液項下制備，獨立測定，計算樣品含量用以考察重復性，以荷葉堿含量為測定指標，考察本法重現(xiàn)性，結果顯示RSD值為2.46%，平均含量為0.3463mg/g，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率

精密稱取測定的已知含量樣品6份，分別精密加入對照品適量，依法測定，計算回收率，結果顯示平均回收率為 97.39%，RSD值為2.04%，表明本法準確性較好，方法可行。

2.8 樣品含量測定

取十批樣品（每袋1g），依法制備供試品溶液，每批二份，分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各20l，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算十批樣品中荷葉堿含量。

3 討論

溶劑提取的過程是由潤濕、滲透、解吸、溶解及擴散、置換等幾個相互聯(lián)系的作用綜合而成。對藥材進行提取時，藥材經(jīng)粉碎后，一部分細胞會破裂，其中成分可直接擴散到溶劑中，但大部分細胞在粉碎后仍保持完整，提取溶劑需要穿透細胞壁進入到細胞質中將成分浸出，因此荷葉藥材在含量測定的供試品溶液即采用熱提法，目的是提高提取效率，以保證指標成分的溶出率。因此供試品溶液Ⅱ的提取方法擬以甲醇作為提取溶劑，采用超聲提取法代替加熱回流提取，達到即可保證有效成分的提取率，又能使檢驗過程更方便快捷。

參考文獻

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