摘要：本文以生姜為原料，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)來確定生姜黃酮乙醇提取的工藝，結(jié)果表明提取溫度70℃，乙醇濃度70%，提取時(shí)間5h，料液比1：25為最佳提取工藝。

關(guān)鍵詞：生姜 黃酮 乙醇 提取

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2014）04-0002-02

姜屬姜科，為植物姜的干燥根莖或鮮根莖，多年生草本植物。具有散寒解表，溫中止吐，回陽通脈，燥濕消痰的功效[1]除含有姜油酮姜酚等主要生理活性物質(zhì)外，還含有蛋白質(zhì)、多甙、維生素和多種微量元素，集營養(yǎng)、調(diào)味、保健于一身。近年來一些研究表明：生姜中還含有大量的黃酮類化合物[2]黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。李文智[3]發(fā)現(xiàn)將粗姜汁離心分離得到的上清液比沉淀物的抗氧化性能要大得多，造成這種差異的原因是上清液中含有黃酮類物質(zhì)，本文以生姜為原料，乙醇作為提取劑，通過正交實(shí)驗(yàn)研究生姜黃酮的最佳提取條件，為開發(fā)利用生姜提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

材料：生姜 購于南京蘇果超市。

試劑：蘆丁 生化試劑，上?；瘜W(xué)試劑公司，氫氧化鈉、硝酸鋁乙醇、無水乙醇、亞硝酸鈉均為分析純。

儀器：鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9240A型）、高速萬能粉碎機(jī)（XL-400B型）、精密電子天平（FA1204N型）、數(shù)控超聲波清洗器（KQ-500DB型）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（EV351型）、循環(huán)水多用真空泵（SHB-）、紫外可見分光光度計(jì)（UV752型）、試管、10mL離心管、移液搶等。

1.2 生姜總黃酮測(cè)定方法

1.2.1 樣品的制備

生姜洗凈晾干，切成5mm厚的姜片，于70℃烘干，用萬能粉碎機(jī)粉碎，存放4℃冰箱中待用。

1.2.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[4]

稱取蘆丁0.02g，用60%乙醇溶解并定容至100mL，得濃度為0.2mg/ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH絡(luò)合-分光光度計(jì)法，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)樣測(cè)定生姜提取物總黃酮含量。吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶0.5mL、 1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL于6個(gè)25ml容量瓶中，加30%乙醇至5ml，加5%NaNO2溶液1ml，搖勻放置6min，加10%Al（NO3）3溶液1ml，搖勻放置6min后加1mol/LNaOH溶液10ml，加70%乙醇至刻度，搖勻放置15分鐘。以試劑作為空白，于510nm波長處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=12.300x+0.0200，R2=0.9988，見圖1：

由圖1可知，在0.02～0.1mg/ml范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。

1.2.3 生姜總黃酮含量的測(cè)定

稱取生姜粉2g，用70%乙醇溶液50ml溶解，70℃水浴下回流提取3h，趁熱過濾，濾渣進(jìn)行二次提取，合并濾液用乙醇定容至100mL，得生姜提取液。取提取液 1.0ml按照標(biāo)準(zhǔn)曲線反應(yīng)方法，測(cè)得吸光值，帶入回歸方程，計(jì)算出黃酮質(zhì)量濃度C。提取率按此公式計(jì)算

Y=（m×V×100）/M×100%

Y為總黃酮得率，%；m為1.0mL總黃酮的含量，mg；M為稱取的生姜粉質(zhì)量，mg；V為提取液總體積，mL。

1.3 單因素試驗(yàn)

按照1.2.3的試驗(yàn)方法，精確稱量固定其他因素的條件下，考慮乙醇濃度（50%，60%，70%，80%，90%）、料液比（1：10、1：15、1：20、1：25、1：30）、浸提時(shí)間（1h、2h、3h、4h、5h）、浸提溫度（30℃、40℃、50℃、60℃、70℃）四個(gè)因素做單因素試驗(yàn)。

1.3.1 乙醇濃度對(duì)提取率的影響

固定料液比1：20（g：ml）、浸提時(shí)間5h、提取溫度 70℃，考察乙醇濃度分別為50%、60%、70%、80%和90%時(shí)對(duì)生姜總黃酮得率的影響。

1.3.2 料液比對(duì)提取率的影響

固定浸提時(shí)間5h、提取溫度70℃，乙醇濃度為80%，考察料液比分別為1：10、1：15、1：20、1：25、1：30時(shí)對(duì)生姜總黃酮得率的影響。

1.3.3 浸提時(shí)間對(duì)提取率的影響

固定提取溫度70℃，乙醇濃度為80%、料液比1：25?？疾旖釙r(shí)間分別為1h、2h、3h、4h、5h時(shí)對(duì)生姜總黃酮得率的影響。

1.3.4 浸提溫度對(duì)提取率的影響

固定乙醇濃度為80%、料液比1：25、浸提時(shí)間5h，考察浸提溫度30℃、40℃、50℃、60℃、70℃時(shí)對(duì)生姜總黃酮得率的影響。

1.4 生姜總黃酮提取正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇乙醇濃度、料液比、浸提時(shí)間、浸提溫度4個(gè)因素，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)，對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化，正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙醇濃度對(duì)提取率的影響

由圖2可知：黃酮的提取率與乙醇濃度成正比，呈上升趨勢(shì)，但當(dāng)乙醇濃度大于80%時(shí)，黃酮提取率下降。由圖2可知，乙醇濃度為60%～80%時(shí)提取率高于其他濃度時(shí)的提取率。

2.2 料液比對(duì)提取率的影響

由圖3可知生姜的提取率隨著料液比列的增大而提高，當(dāng)料液比為1：25時(shí)提取率陡增，超過1：25后提取率增加緩慢。

2.3 浸提時(shí)間對(duì)提取率的影響

由圖4可知：生姜黃酮類物質(zhì)的提取率與浸提時(shí)間成正比。

2.4 浸提溫度對(duì)提取率的影響

由圖5可知，黃酮的提取率隨著提取溫度升高成上升趨勢(shì)，由于黃酮類化合物的活性受溫度的影響比較大，溫度太高對(duì)活性造成破壞，因此，提取溫度最好不要超過70℃。

2.5 生姜黃酮的正交試驗(yàn)與分析

由表2可知生姜黃酮乙醇提取的最佳提取工藝為A3B3C2D3，即乙醇濃度70%，提取溫度70℃，料液比1：25，提取時(shí)間5h。從極差R值可以看出RB>RD>RA>RC，即影響的順序?yàn)椋禾崛囟?gt;提取時(shí)間>料液比>乙醇濃度。

3 結(jié)語

試驗(yàn)通過對(duì)影響生姜總黃酮提取率的各個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)，得出生姜中總黃酮最佳提取條件為提取溫度70℃，乙醇濃度70%，提取時(shí)間5h，料液比1：25。

參考文獻(xiàn)

[1]黃泰康.常用中藥成分及藥理手冊(cè)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1994.178.

[2]吳建華，張麗君.藥用姜研究進(jìn)展[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，25（1）：61.

[3]李文智.我國天然抗氧化劑的研究及應(yīng)用[J].西部糧油科技，2003，3（9）：39-40.

[4]莫開菊，柳圣，程超.生姜黃酮的抗氧化活性研究[J].食品科學(xué)，2006，27（9）：111-112.