趙晶 李英姿 韓瑩 張巖 李懷軍

[摘要]目的：觀察七菊蘆薈飲對黃褐斑模型小鼠的治療作用。方法：采用紫外線照射法建立黃褐斑小鼠模型，觀察七菊蘆薈飲對黃褐斑模型小鼠皮膚組織和血漿中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及酪氨酸酶含量的影響。結(jié)果：與模型組比較，七菊蘆薈飲低、中、高劑量組的皮膚及血液中SOD活性明顯增高，MDA、酪氨酸酶含量明顯降低，且有顯著性差異。結(jié)論：七菊蘆薈飲對紫外線照射引起的黃褐斑模型小鼠具有較好的保護(hù)和治療作用。

[關(guān)鍵詞]七菊蘆薈飲；黃褐斑；超氧化物歧化酶；丙二醛

[中圖分類號]R758.4+2R332 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1008-6455（2014）05-0373-03

The experimental study on the treatment of Potion of Pseudo-ginseng Chrysanthemum Aloes to chloasma mouse model

ZHAO Jing,LI Ying-zi,HAN Ying,ZHANG Yan,LI Huai-jun

(Jia Musi College, Heilongjiang University of Chinese Medicine,Jiamusi 154007,Heilongjiang,China)

Abstract:ObjectiveDiscussing the therapeutic effect of The Potion of Pseudo-ginseng Chrysanthemum Aloes to chloasma mouse model induced by UV irradiation.MethodsThe model mice of chloasma had been set up by ultraviolet irradiation,with the xanthine oxidase method and thiobarbituric acid method for detection of SOD activity and MDA content.The content of tyrosinase measured by spectrophotometer.ResultsCompared with the model group,the SOD activity increased and the MDA and monophenyl oxidase content decreased in the group of the potion of pseudo-ginseng chrysanthemum aloes.ConclusionThe Potion of Pseudo-ginseng Chrysanthemum Aloes has protective and therapeutic effect on chloasma model induced by UV irradiation.

Key words: The Potion of Pseudo-ginseng Chrysanthemum Aloes; chloasma;superoxide dismutase (SOD);malonaldehyde(MDA)黃褐斑臨床表現(xiàn)為常見的發(fā)生于面部的局限性淡褐色或黃褐色色素沉著斑。多見于成年女性。相當(dāng)于中醫(yī)的“黧黑斑”“肝斑”“面塵”等。由于該病好發(fā)于顏面部位，屬多發(fā)性損容性慢性皮膚病，嚴(yán)重影響患者的身心健康，且發(fā)病有逐年增加的趨勢，所以近幾年逐漸成為皮膚科最常見的病種之一。本實(shí)驗(yàn)以紫外線照射法建立黃褐斑模型小鼠，研究七菊蘆薈飲對模型小鼠皮膚和血液中SOD、MDA及黑色素組織分布形態(tài)的影響，并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。

1材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組：選取昆明種普通級雌性小白鼠60只，體重18g～20g，隨機(jī)分為6組：空白對照組（A）、模型對照組（B）、陽性藥物對照組（C）、中藥低劑量組（D）、中藥中劑量組（E）和中藥高劑量組（F），稱重標(biāo)記，分開飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)動物由佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.2 模型制備：先用剪刀剪去以上各組小鼠鼠背上的粗毛,再用電動剃須刀將剩余的絨毛剃除干凈,使背部皮膚充分暴露，剃毛面積4cm×3cm。每周以10%Na2S水溶液小鼠背部脫毛一次。除空白對照組外，其余5組均以波長為320nm的中波紫外線(UVB)每日照射小鼠1次，照射時(shí)間60min，連續(xù)照射8周。

1.3 藥物與試劑：七菊蘆薈飲溶液（取三七根50g、白菊花50g煎藥取汁，將新鮮蘆薈20g榨汁加入制成）；維生素C泡騰片（國藥準(zhǔn)字H20044176，廈門美好醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)）；10%的硫化鈉水溶液(廣州化學(xué)試劑廠，批號20001204-2)；SOD和MDA活性測定試劑盒（均購自南京建成生物工程研究所，批號20041221）。

1.4 儀器設(shè)備：SS-03型紫外線光療儀（上海Sigma高技術(shù)有限公司）、半自動生化分析

SBA-710（長春塞諾邁得）、奧林巴斯BX41型研究用熒光顯微鏡（日本）、722N型分光光度計(jì)（上海精密儀器有限公司分析儀器廠）、電子分析天平FA2004N（塞多利斯）、PL602S型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司，上海）、組織粉碎機(jī)FW135（天津泰斯特）、組織勻漿機(jī)JJ-2（金壇市榮華儀器廠）。

1.5 給藥方法：各組均以灌胃方式給藥，A、B組10ml/kg/天灌服蒸餾水，C組灌服維生素C溶液（按維生素C的劑量折算）, D、E、F組分別灌服七菊蘆薈飲溶液10ml/kg/天、20ml/kg/天、30ml/kg/天，連續(xù)給藥8周。

1.6 取材及指標(biāo)測定

1.6.1 取材：實(shí)驗(yàn)第8周末，小鼠背部器械脫毛，面積為4cm×3cm。采用眼球摘除法取血3ml～5ml, 試管標(biāo)號后置于離心機(jī)3000r/min～4000r/min離心, 取血清，按試劑盒說明書指示步驟進(jìn)行血清SOD和MDA檢測；將取完血液的實(shí)驗(yàn)小鼠全部斷頸處死，取背部脫毛處全層皮膚(不含皮下脂肪)及肝臟組織適量，冷凍于-70℃冰箱內(nèi)保存待測。

1.6.2 組織勻漿的制備：切取各組小鼠被測組織標(biāo)本0.5g，用預(yù)冷生理鹽水(4℃)沖洗，除盡雜質(zhì)，用濾紙拭干，用眼科小剪盡量將組織塊剪碎, 然后倒入玻璃勻漿管中。在勻漿器中加入4.5ml冷生理鹽水進(jìn)行充分勻漿，并漿液以4000r/min的速度離心10min。取上清液，按SOD試劑盒和MDA試劑盒嚴(yán)格按說明書操作,進(jìn)行指標(biāo)測定。

1.6.3 酪氨酸酶含量測定：取試管5支, 分別加入1ml L-多巴溶液(2mg/ml)和2.8ml0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.0)，搖勻，放入25℃恒溫水浴箱中預(yù)熱10min，再向上述試管中分別加入不同濃度的酪氨酸酶溶液1ml，立即混勻并準(zhǔn)確計(jì)時(shí), 25℃水浴反應(yīng)5min。迅速加入0.2ml硫脲-乙醇溶液, 混勻, 終止反應(yīng)。以0.1M磷酸鹽緩沖液為空白對照管, 用754紫外可見分光光度計(jì)在波長475nm處測吸收值, 根據(jù)吸收值求得回歸方程。將測得吸收值代入回歸方程, 求得酪氨酸酶含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較采用方差分析。

2結(jié)果

2.1 七菊蘆薈飲對紫外線照射致黃褐斑模型小鼠皮膚組織及血液中SOD活性的影響，見表1。由表1可見，小鼠皮膚紫外線照射后,模型對照組皮膚組織及血液中SOD活性下降，與空白對照組比較，具有顯著性差異（P<0.01）；與模型對照組比較，各給藥組皮膚組織及血液中SOD活性顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與陽性對照組相比，中藥低、中、高劑量組均無顯著性差異（P>0.05）；七菊蘆薈飲低、中、高劑量組之間無顯著性差異（P>0.05）。

2.2 七菊蘆薈飲對紫外線照射致黃褐斑模型小鼠皮膚組織及血液中MDA含量的影響，見表2。由表2可見，小鼠皮膚紫外線照射后,模型對照組皮膚組織及血液中MDA含量增加，與空白對照組比較，具有顯著性差異（P<0.01）；與模型對照組比較，各給藥組皮膚組織及血液中MDA含量顯著降低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與陽性對照組相比，中藥低、中、高劑量組均無顯著性差異（P>0.05）；七菊蘆薈飲低、中、高劑量組之間無顯著性差異（P>0.05）。

2.3七菊蘆薈飲對紫外線照射致黃褐斑模型小鼠血漿中酪氨酸含量的影響，見表3。由表3可見，小鼠皮膚紫外線照射后,模型對照組血漿中酪氨酸酶含量增加，與空白對照組比較，具有顯著性差異（P<0.01）；與模型對照組比較，各給藥組血漿中酪氨酸酶含量顯著降低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與陽性對照組相比，中藥低、中、高劑量組均無顯著性差異（P>0.05）；七菊蘆薈飲低、中、高劑量組之間無顯著性差異（P>0.05）。

3討論

黃褐斑是臨床較為常見的損容性皮膚病之一，其發(fā)病的影響因素眾多，發(fā)病機(jī)理較為復(fù)雜，最終病理上導(dǎo)致局部皮膚黑色素沉著過多。有實(shí)驗(yàn)研究顯示，體內(nèi)氧化與抗氧化之間的平衡失調(diào)為黃褐斑發(fā)生的重要原因和機(jī)制，正常情況下，超氧化物歧化酶SOD能有效清除多余的超氧自由基（如MDA）等，一旦這種平衡被破壞，就會造成膜脂質(zhì)過氧化，色素細(xì)胞氧化性損傷，促進(jìn)酪氨酸酶的氧化，最終致使黑色素形成活躍，沉積于皮膚產(chǎn)生黃褐斑。

七菊蘆薈飲為自擬方，方由三七、蘆薈和菊花組成，具有活血祛斑、駐顏嫩膚的功效。經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：七菊蘆薈飲能顯著提高紫外線照射模型動物皮膚組織及血液中SOD的活性,降低MDA的含量和酪氨酸酶含量，使體內(nèi)過氧化程度降低，黑色素細(xì)胞的生成減少，皮膚色素沉著減輕。由此可見，七菊蘆薈飲對小鼠黃褐斑模型具有一定的保護(hù)和治療作用。

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[收稿日期]2013-01-18[修回日期]2014-02-28

編輯/張惠娟