盧立榮，盧立青，肖小敏

(1、吉安市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西 吉安343000；2、新干縣沂江鄉(xiāng)衛(wèi)生院，江西 新干；3、吉安市樟山鄉(xiāng)衛(wèi)生院，江西 吉安)

正常人胸膜腔內(nèi)每天約有500～1000ml的液體形成和吸收，通常情況下，胸膜腔內(nèi)有少量液體，在呼吸運(yùn)動(dòng)時(shí)起潤(rùn)滑作用，當(dāng)發(fā)生某種病理情況影響到胸膜，無(wú)論是壁層胸膜產(chǎn)生胸水或是臟層胸膜吸收胸水的速率有變化，都可形成胸水，如胸膜炎癥、腫瘤、門(mén)靜脈肝硬化，結(jié)核是形成胸水的主要病因[1]。

為了診斷胸水的性質(zhì)，明確病因，臨床上常要求對(duì)胸水做抗酸染色查找抗酸桿菌，目前臨床上應(yīng)用廣泛的是直接離心沉淀涂片法，但多數(shù)送檢的胸水中含有大量的紅細(xì)胞，即所謂血性胸水，其導(dǎo)致抗酸染色不易著色，抗酸桿菌檢出率低，筆者在臨床工作中發(fā)現(xiàn)使用0.3%的氯化鈉溶液預(yù)處理血性胸水可以使抗酸染色更易著色，提高抗酸桿菌檢出率，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源 本院臨床送檢經(jīng)過(guò)乙二胺四乙酸二鉀抗凝處理的血性胸水標(biāo)本73份。

1.2 儀器 常州平凡儀器儀表有限公司 TDZ4-WS型離心機(jī)。

1.3 試劑 石碳酸復(fù)紅染液，亞甲藍(lán)染液，2%的鹽酸乙醇，0.3%氯化鈉溶液。

1.4 方法 把每份胸水分成兩管，其中一管經(jīng)3000 r/min離心30min取試管底部沉淀物0.01 ml涂于載玻片上10×10mm范圍烘干。另一管按1∶10的比例放入0.3%氯化鈉溶液，視紅細(xì)胞的多少可適當(dāng)增減氯化鈉溶液的量，放置5min，溶血后顯微鏡下觀察沒(méi)有紅細(xì)胞和碎片，再以3000r/min離心30 min，棄去上清液，按照第一管的方法取試管底部沉淀物0.01ml涂于載玻片上10mm×10mm范圍，然后兩管均按以下方法染色：(1)滴加石碳酸復(fù)紅染色液布滿胸水液膜，小心加熱，出現(xiàn)蒸汽后脫離火焰，保持染色5min；(2)讓細(xì)流水自玻片左側(cè)的1/3處輕輕沖洗，洗去染色液，瀝干剩余水分；(3)自液膜上端外緣滴加2%的鹽酸乙醇脫色液，布滿液膜，脫色至液膜無(wú)紅色為止；(4)洗去脫色液，瀝干剩余水分，滴加亞甲藍(lán)復(fù)染液復(fù)染30s；(5)流水洗去復(fù)染液，瀝干剩余水分，待涂片自然干燥后鏡檢[2]。

1.5 結(jié)果判斷 (-)：連續(xù)觀察300個(gè)不同視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌；(±)：1～2條/300視野；(1+):3～9條/100視野；(2+):1～9條/10視野；(3+):1～9條/每視野；(4+)≥10 條/每視野。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

以找到1～2條抗酸桿菌/300個(gè)油鏡視野作為陽(yáng)性。73份血性胸水經(jīng)直接沉淀涂片法查出抗酸桿菌陽(yáng)性標(biāo)本2例，陽(yáng)性率為2.68%，而加入0.3%氯化鈉溶液處理后的涂片查出抗酸桿菌陽(yáng)性標(biāo)本6例，陽(yáng)性率為8.21%。采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

結(jié)核桿菌是引起結(jié)核病的病原菌，可侵犯全身各器官，但以肺結(jié)核為最多見(jiàn)，并且可擴(kuò)散至胸腔引起胸膜炎而造成胸腔積液。結(jié)核桿菌細(xì)長(zhǎng)略彎曲，端極鈍園，呈單個(gè)或分枝狀排列，有莢膜、無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞。在陳舊的病灶和培養(yǎng)物中，形態(tài)常不典型，可呈顆粒狀，串球狀，短棒狀，長(zhǎng)絲形等，臨床上檢測(cè)結(jié)核桿菌有分離培養(yǎng)法，多聚酶鏈反應(yīng)法(PCR)，涂片抗酸染色法等[4]，但細(xì)菌培養(yǎng)法耗時(shí)較長(zhǎng)，需孵育2～6周方可見(jiàn)到菌落，不利于病人的早期診斷和治療，PCR有一定條件限制，不適合基層醫(yī)院，而涂片抗酸染色查找結(jié)核桿菌快速、簡(jiǎn)便、成本低，陽(yáng)性可作為結(jié)核診斷的重要依據(jù)。

創(chuàng)傷、惡性腫瘤、結(jié)核性積液均可引起血性胸水，血性胸水涂片抗酸染色常作為基層醫(yī)院的常規(guī)檢驗(yàn)。在血性胸水中用抗酸染色查找抗酸桿菌時(shí)血性胸水中紅細(xì)胞可蓋在抗酸桿菌上面，影響抗酸染色的效果和染色后鏡檢視野的清晰度，造成漏檢。用0.3%氯化鈉溶液處理血性胸水，可以使血液中的紅細(xì)胞在低滲環(huán)境中充分裂解。清除血性胸水中的紅細(xì)胞后，抗酸桿菌與染料結(jié)核能力結(jié)合增強(qiáng)，利于診斷，提高了抗酸染色陽(yáng)性的檢出率，且該法具有操作簡(jiǎn)便、快速、價(jià)廉，是基層醫(yī)院的一種有效方法。

[1]王兆宇.多項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)在胸腔積液鑒別中的應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2008,26(6):629-630.

[2]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:981－983.

[3]熊立凡,劉成玉.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M].第4版．北京:人民衛(wèi)生出版社2008:225-232.

[4]李寧,伍嚴(yán)安,胡辛蘭,等.結(jié)核分枝桿菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法學(xué)評(píng)價(jià)及耐藥情況分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,31(3):214-216.