余曦明　陳思源　余望貽

[摘要] 目的 建立符合中醫(yī)特色的慢性疲勞綜合征動物模型。 方法 采用中醫(yī)的形勞、神勞、房勞等復合因素刺激，建立慢性疲勞動物模型。對BALB/c小鼠應用游泳+夾尾+合籠等不同刺激，并對其一般狀態(tài)和體重進行觀察，通過肝糖原、血清乳酸、血清尿素氮等實驗室指標檢測，與游泳組進行比較。 結(jié)果 實驗研究表明，模型組小鼠的慢性疲勞行為表現(xiàn)較明顯；與正常組相比，模型組小鼠體重和肝糖原水平顯著降低，血清乳酸和尿素氮水平顯著升高。 結(jié)論 中醫(yī)的形勞、神勞、房勞等復合因素刺激建立的慢性疲勞動物模型，其改變更接近人的慢性疲勞的臨床表現(xiàn)，可以作為研究慢性疲勞綜合征的動物模型。

[關(guān)鍵詞] 中醫(yī)；慢性疲勞綜合征；動物模型

[中圖分類號] R332 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）24-22-03

慢性疲勞綜合征（chronic fatigue syndrome，CFS）是在現(xiàn)代節(jié)奏緊張的生活方式下出現(xiàn)的一組以長期疲勞為突出表現(xiàn)的全身性癥候群[1]。1988年美國疾病控制與預防中心（centre for disease control and prevention，CDC）制訂CFS診斷標準，以持續(xù)或反復發(fā)作不少于6個月嚴重疲勞為特征，伴有頭痛、睡眠障礙，注意力和記憶力下降，抑郁、肌肉骨關(guān)節(jié)疼痛等多種軀體及精神神經(jīng)癥狀[2]。1994年CDC將該指標進行了修訂，認為CFS是一組以無力、疲勞、睡眠質(zhì)量差、認知功能下降及一些軀體癥狀，如反復咽癢、肌肉痛、頭痛、關(guān)節(jié)痛等為特征的臨床綜合征 [3]，是目前診斷CFS的通用標準。

臨床上，CFS患者的物理和實驗室檢查通常無特異性表現(xiàn)，CFS的病因和病理機制依然是個迷，因此通過實驗的方法建立較理想的CFS動物模型是研究得以深入的關(guān)鍵。目前，CFS的發(fā)病機制尚不明確，因此從西醫(yī)動物實驗的角度研究CFS很少，僅見個別通過注射病毒而建立的病毒感染模型[4]。然而，研究表明，病毒感染可能只是CFS發(fā)病的誘發(fā)因素之一，大部分CFS患者在發(fā)病前曾有過長期精神刺激、情緒低落、腦力體力過度勞累、生活不愉快及不規(guī)律等（即與心理、社會等應激因素有關(guān)），發(fā)病后常伴有急躁易怒、精神抑郁、緊張、健忘、注意力不集中等精神神經(jīng)癥狀以及免疫功能紊亂等，所以病毒感染模型不能客觀反映CFS的發(fā)病機制及癥狀特征。因此，有必要繼續(xù)改進并創(chuàng)造新的具有中醫(yī)特色的動物模型。本項目通過構(gòu)建符合中醫(yī)特色的CFS動物模型，來探討CFS的病因及發(fā)病機制，為臨床防治CFS的研究提供重要的實驗基礎(chǔ)，具有重要的理論意義及應用價值。

1 材料與試劑

1.1 實驗動物

BALB/c小鼠，SPF級，體重18～22g，雄性36只，雌性10只。由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，合格證號為SCXK（湘）2011-0003。所有實驗在湖南中醫(yī)藥大學實驗動物中心進行，實驗動物使用許可證編號：SYXK（湘）2009-0001。

1.2 主要試劑與設(shè)備

小鼠尿素氮ELISA試劑盒、小鼠乳酸ELISA試劑盒、小鼠肝糖原測試盒，均由長沙市佳和生物科技有限責任公司提供。主要設(shè)備有：小鼠游泳池：長120cm、寬80cm、深60cm，低速自平衡離心機，半自動生化儀，電子天平。

2 方法

2.1 動物分組

將36只BALB/c小鼠按照隨機數(shù)字表法分為3組：模型組、游泳組、正常組，每組12只，雌鼠作為與雄鼠合籠所用。

2.2 造模方法

所有實驗動物在SPF級實驗室適應性喂養(yǎng)3d后，首先對游泳組和模型組動物進行3d的適應性游泳訓練，每天1次，每次30min。隨后開始正式實驗。游泳組：每日在常溫下游泳，每次30min；模型組：單日讓發(fā)情期雌鼠與之合籠（且每次合籠都新?lián)Q一批雌鼠）；雙日讓其在常溫下游泳，每次30min；每日用夾尾激怒法刺激小鼠，開始刺激的時間不固定，每次30min，連續(xù)14d。在游泳過程中，當小鼠運動協(xié)調(diào)性明顯下降，出現(xiàn)反復下沉時，將動物取出游泳缸休息3min后，再放入池中繼續(xù)進行游泳。當小鼠浮在水面不運動時用木棒驅(qū)趕，使其維持運動狀態(tài)。正常組小鼠相同條件下常規(guī)飼養(yǎng)，不參與游泳運動。

2.3 指標檢測

2.3.1 一般狀態(tài)觀察 于實驗前和實驗后分別測量一次體重，每日觀察小鼠精神狀態(tài)、活動情況、飲食及睡眠、糞便等情況，并記錄。

2.3.2 實驗室指標檢測 實驗結(jié)束后，處死小鼠，摘眼球取血1mL，裝入10mL離心管中，室溫靜置2h，用離心機3000r/min離心10min取血清，裝入1.5mL離心管中，于-20℃冰箱保存，按照試劑盒方法檢測乳酸及尿素氮濃度；另取肝臟迅速以濾紙吸去附著的血液，稱取約50g，按照試劑盒方法檢測組織中糖原的含量。

2.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以（）表示。組間差異比較用單因素方差分析，方差齊性時，采用LSD方法進行組間多重比較；方差不齊時，采用Dunnetts T3方法進行組間多重比較，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 一般狀態(tài)

實驗結(jié)束后，模型組小鼠出現(xiàn)反應遲鈍、于空瓶刺激后（飲用水用盡后）易怒、皮毛光澤度減退、便軟、采食量和飲水量減少；游泳組小鼠出現(xiàn)精神欠佳、活動度下降、皮毛欠光澤、便稍軟、但采食量和飲水量尚正常；正常組小鼠行為表現(xiàn)正常，體重較實驗前明顯增加。

3.2 體重

實驗期間，小鼠由于游泳力竭死亡2只，其中游泳組和模型組各1只。表1數(shù)據(jù)顯示，實驗前各組小鼠體重無明顯差異；實驗后，游泳組體重低于正常組體重，但結(jié)果無明顯差異；模型組體重低于正常組，差異有?統(tǒng)計學意義（P<0.01）。

現(xiàn)代醫(yī)學多認為導致CFS的主要原因包括：（1）生理疲勞：如日益積累的疲勞、嚴重睡眠不足等；（2）心理疲勞：如繁重的工作與生活壓力，導致心理負擔過重、安全感降低等；（3）個性因素：如性格多愁善感、優(yōu)柔寡斷、神經(jīng)質(zhì)等；（4）生活方式：生活沒有規(guī)律、無節(jié)制、自我放縱等[7]。另有研究發(fā)現(xiàn)：應激也是導致或誘發(fā)慢性疲勞的主要因素。其中又以長期的慢性應激較急性應激更為多見。而眾多的臨床和實驗研究又表明，慢性應激能導致機體行為改變、多種功能失調(diào)，甚至會引起組織結(jié)構(gòu)的改變[8-9]。

目前，國內(nèi)外對于CFS的動物模型的建立，多采用以下的方法：（1）單因素造模：游泳法、跑臺法、慢性束縛法等；（2）復合因素造模：懸吊游泳法、束縛跑臺法、力竭游泳加剝奪睡眠等；（3）藥物誘發(fā)型模型：腎上腺皮質(zhì)激素應用-停藥法、氫化可的松肌注-冷水游泳法[10]等。

基于目前中西醫(yī)對于CFS的發(fā)病機制和臨床表現(xiàn)的認識，我們在以往研究的基礎(chǔ)上改進造模方法，采用中醫(yī)的房勞、形勞、神勞等復合因素刺激，構(gòu)建CFS動物模型。冷水游泳可以消耗小鼠體力，形成軀體的疲勞；合籠次數(shù)增加可使小鼠耗竭腎中精氣，造成房勞；夾尾可使小鼠軀體活動受限，產(chǎn)生暴躁、憤怒甚至絕望等心理變化，造成神勞。此種方法，基本涵蓋了導致CFS發(fā)病的各種因素，是一種比較可靠且操作性較強的造模方法。造模結(jié)束后，模型組小鼠出現(xiàn)典型的疲勞癥狀：體重明顯下降、反應遲鈍、于空瓶刺激后（飲用水用盡后）易怒、皮毛光澤度減退、便軟、采食量和飲水量減少等；模型組肝糖原含量明顯低于正常組，說明機體能量不足可能是導致疲勞的發(fā)生原因之一；模型組血乳酸含量明顯高于正常組，血乳酸是糖酵解的主要代謝產(chǎn)物，其堆積可能是慢性疲勞的原因之一；模型組血清尿素氮的含量明顯高于正常組，隨著機體運動強度的增加和負荷的適應性降低，蛋白質(zhì)和含氮化合物的代謝作用會加強，作為蛋白質(zhì)重要代謝產(chǎn)物的尿素氮顯著升高，說明蛋白質(zhì)消耗增加。因此，我們可以認為用房勞、形勞、神勞等中醫(yī)復合因素構(gòu)建出來的CFS動物模型是成功的，符合中醫(yī)理論的特色。

[參考文獻]

[1] 曲長江，劉白露，解坤，等.多因素誘導建立慢性疲勞綜合征動物模型的實驗研究[J].中華中醫(yī)藥學刊，2010，28（12）：2554-2557.

[2] Holmes GP，Kaplan Je，Gantz NM，et al.Chronic fatigue syndrome：A working case definition[J].Ann Intern Med，1988，108：387.

[3] Fukuda k，Straus SE，Hickie I，et al.The chronic fatigue syndrome：A comprehensive approach to its definition and study[J].Ann Intern Med，1994，121：953.

[4] 杜婧，李世梅.慢性疲勞綜合征的中醫(yī)研究概況[J].西北國防醫(yī)學雜志，2001，22（4）：369-370.

[5] 石世德，周民偉，李建軍，等.安可夢口服液對慢性疲勞模型動物行為和神經(jīng)內(nèi)分泌影響的實驗研究[J].浙江中醫(yī)學院學報，2004，28（6）：47-50.

[6] 王天芳，張翠珍，季紹良，等.慢性疲勞綜合征病人的疲勞特征及中藥的治療作用[J].中華中醫(yī)藥雜志，2000（4）：60-62.

[7] 村上正人.如何看待慢性疲勞綜合征患者的主訴[J].日本醫(yī)學介紹，1998，19：133.

[8] Aragona M，Aragona F.Chronic stress and histological effects on the human central nervous system and other organs[J].Funct Neurol，1994，9（3）：121-131.

[9] Animan H，Zacharko RM.Depression as a consequence of inadequate neurochemical adaptation in response to stressors.Br[J].Psychiatry，1992，15（Supp1）：36-43.

[10] 武淑娟，張青川，何采輝，等.電針對復合應激致慢性疲勞大鼠下丘腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響[J].針刺研究，2006，31（2）：96-99.

（收稿日期：2013-10-15）

現(xiàn)代醫(yī)學多認為導致CFS的主要原因包括：（1）生理疲勞：如日益積累的疲勞、嚴重睡眠不足等；（2）心理疲勞：如繁重的工作與生活壓力，導致心理負擔過重、安全感降低等；（3）個性因素：如性格多愁善感、優(yōu)柔寡斷、神經(jīng)質(zhì)等；（4）生活方式：生活沒有規(guī)律、無節(jié)制、自我放縱等[7]。另有研究發(fā)現(xiàn)：應激也是導致或誘發(fā)慢性疲勞的主要因素。其中又以長期的慢性應激較急性應激更為多見。而眾多的臨床和實驗研究又表明，慢性應激能導致機體行為改變、多種功能失調(diào)，甚至會引起組織結(jié)構(gòu)的改變[8-9]。

目前，國內(nèi)外對于CFS的動物模型的建立，多采用以下的方法：（1）單因素造模：游泳法、跑臺法、慢性束縛法等；（2）復合因素造模：懸吊游泳法、束縛跑臺法、力竭游泳加剝奪睡眠等；（3）藥物誘發(fā)型模型：腎上腺皮質(zhì)激素應用-停藥法、氫化可的松肌注-冷水游泳法[10]等。

基于目前中西醫(yī)對于CFS的發(fā)病機制和臨床表現(xiàn)的認識，我們在以往研究的基礎(chǔ)上改進造模方法，采用中醫(yī)的房勞、形勞、神勞等復合因素刺激，構(gòu)建CFS動物模型。冷水游泳可以消耗小鼠體力，形成軀體的疲勞；合籠次數(shù)增加可使小鼠耗竭腎中精氣，造成房勞；夾尾可使小鼠軀體活動受限，產(chǎn)生暴躁、憤怒甚至絕望等心理變化，造成神勞。此種方法，基本涵蓋了導致CFS發(fā)病的各種因素，是一種比較可靠且操作性較強的造模方法。造模結(jié)束后，模型組小鼠出現(xiàn)典型的疲勞癥狀：體重明顯下降、反應遲鈍、于空瓶刺激后（飲用水用盡后）易怒、皮毛光澤度減退、便軟、采食量和飲水量減少等；模型組肝糖原含量明顯低于正常組，說明機體能量不足可能是導致疲勞的發(fā)生原因之一；模型組血乳酸含量明顯高于正常組，血乳酸是糖酵解的主要代謝產(chǎn)物，其堆積可能是慢性疲勞的原因之一；模型組血清尿素氮的含量明顯高于正常組，隨著機體運動強度的增加和負荷的適應性降低，蛋白質(zhì)和含氮化合物的代謝作用會加強，作為蛋白質(zhì)重要代謝產(chǎn)物的尿素氮顯著升高，說明蛋白質(zhì)消耗增加。因此，我們可以認為用房勞、形勞、神勞等中醫(yī)復合因素構(gòu)建出來的CFS動物模型是成功的，符合中醫(yī)理論的特色。

[參考文獻]

[1] 曲長江，劉白露，解坤，等.多因素誘導建立慢性疲勞綜合征動物模型的實驗研究[J].中華中醫(yī)藥學刊，2010，28（12）：2554-2557.

[2] Holmes GP，Kaplan Je，Gantz NM，et al.Chronic fatigue syndrome：A working case definition[J].Ann Intern Med，1988，108：387.

[3] Fukuda k，Straus SE，Hickie I，et al.The chronic fatigue syndrome：A comprehensive approach to its definition and study[J].Ann Intern Med，1994，121：953.

[4] 杜婧，李世梅.慢性疲勞綜合征的中醫(yī)研究概況[J].西北國防醫(yī)學雜志，2001，22（4）：369-370.

[5] 石世德，周民偉，李建軍，等.安可夢口服液對慢性疲勞模型動物行為和神經(jīng)內(nèi)分泌影響的實驗研究[J].浙江中醫(yī)學院學報，2004，28（6）：47-50.

[6] 王天芳，張翠珍，季紹良，等.慢性疲勞綜合征病人的疲勞特征及中藥的治療作用[J].中華中醫(yī)藥雜志，2000（4）：60-62.

[7] 村上正人.如何看待慢性疲勞綜合征患者的主訴[J].日本醫(yī)學介紹，1998，19：133.

[8] Aragona M，Aragona F.Chronic stress and histological effects on the human central nervous system and other organs[J].Funct Neurol，1994，9（3）：121-131.

[9] Animan H，Zacharko RM.Depression as a consequence of inadequate neurochemical adaptation in response to stressors.Br[J].Psychiatry，1992，15（Supp1）：36-43.

[10] 武淑娟，張青川，何采輝，等.電針對復合應激致慢性疲勞大鼠下丘腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響[J].針刺研究，2006，31（2）：96-99.

（收稿日期：2013-10-15）

現(xiàn)代醫(yī)學多認為導致CFS的主要原因包括：（1）生理疲勞：如日益積累的疲勞、嚴重睡眠不足等；（2）心理疲勞：如繁重的工作與生活壓力，導致心理負擔過重、安全感降低等；（3）個性因素：如性格多愁善感、優(yōu)柔寡斷、神經(jīng)質(zhì)等；（4）生活方式：生活沒有規(guī)律、無節(jié)制、自我放縱等[7]。另有研究發(fā)現(xiàn)：應激也是導致或誘發(fā)慢性疲勞的主要因素。其中又以長期的慢性應激較急性應激更為多見。而眾多的臨床和實驗研究又表明，慢性應激能導致機體行為改變、多種功能失調(diào)，甚至會引起組織結(jié)構(gòu)的改變[8-9]。

目前，國內(nèi)外對于CFS的動物模型的建立，多采用以下的方法：（1）單因素造模：游泳法、跑臺法、慢性束縛法等；（2）復合因素造模：懸吊游泳法、束縛跑臺法、力竭游泳加剝奪睡眠等；（3）藥物誘發(fā)型模型：腎上腺皮質(zhì)激素應用-停藥法、氫化可的松肌注-冷水游泳法[10]等。

基于目前中西醫(yī)對于CFS的發(fā)病機制和臨床表現(xiàn)的認識，我們在以往研究的基礎(chǔ)上改進造模方法，采用中醫(yī)的房勞、形勞、神勞等復合因素刺激，構(gòu)建CFS動物模型。冷水游泳可以消耗小鼠體力，形成軀體的疲勞；合籠次數(shù)增加可使小鼠耗竭腎中精氣，造成房勞；夾尾可使小鼠軀體活動受限，產(chǎn)生暴躁、憤怒甚至絕望等心理變化，造成神勞。此種方法，基本涵蓋了導致CFS發(fā)病的各種因素，是一種比較可靠且操作性較強的造模方法。造模結(jié)束后，模型組小鼠出現(xiàn)典型的疲勞癥狀：體重明顯下降、反應遲鈍、于空瓶刺激后（飲用水用盡后）易怒、皮毛光澤度減退、便軟、采食量和飲水量減少等；模型組肝糖原含量明顯低于正常組，說明機體能量不足可能是導致疲勞的發(fā)生原因之一；模型組血乳酸含量明顯高于正常組，血乳酸是糖酵解的主要代謝產(chǎn)物，其堆積可能是慢性疲勞的原因之一；模型組血清尿素氮的含量明顯高于正常組，隨著機體運動強度的增加和負荷的適應性降低，蛋白質(zhì)和含氮化合物的代謝作用會加強，作為蛋白質(zhì)重要代謝產(chǎn)物的尿素氮顯著升高，說明蛋白質(zhì)消耗增加。因此，我們可以認為用房勞、形勞、神勞等中醫(yī)復合因素構(gòu)建出來的CFS動物模型是成功的，符合中醫(yī)理論的特色。

[參考文獻]

[1] 曲長江，劉白露，解坤，等.多因素誘導建立慢性疲勞綜合征動物模型的實驗研究[J].中華中醫(yī)藥學刊，2010，28（12）：2554-2557.

[2] Holmes GP，Kaplan Je，Gantz NM，et al.Chronic fatigue syndrome：A working case definition[J].Ann Intern Med，1988，108：387.

[3] Fukuda k，Straus SE，Hickie I，et al.The chronic fatigue syndrome：A comprehensive approach to its definition and study[J].Ann Intern Med，1994，121：953.

[4] 杜婧，李世梅.慢性疲勞綜合征的中醫(yī)研究概況[J].西北國防醫(yī)學雜志，2001，22（4）：369-370.

[5] 石世德，周民偉，李建軍，等.安可夢口服液對慢性疲勞模型動物行為和神經(jīng)內(nèi)分泌影響的實驗研究[J].浙江中醫(yī)學院學報，2004，28（6）：47-50.

[6] 王天芳，張翠珍，季紹良，等.慢性疲勞綜合征病人的疲勞特征及中藥的治療作用[J].中華中醫(yī)藥雜志，2000（4）：60-62.

[7] 村上正人.如何看待慢性疲勞綜合征患者的主訴[J].日本醫(yī)學介紹，1998，19：133.

[8] Aragona M，Aragona F.Chronic stress and histological effects on the human central nervous system and other organs[J].Funct Neurol，1994，9（3）：121-131.

[9] Animan H，Zacharko RM.Depression as a consequence of inadequate neurochemical adaptation in response to stressors.Br[J].Psychiatry，1992，15（Supp1）：36-43.

[10] 武淑娟，張青川，何采輝，等.電針對復合應激致慢性疲勞大鼠下丘腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響[J].針刺研究，2006，31（2）：96-99.

（收稿日期：2013-10-15）