龐 蕾，胡海霞，李 偉※

(1.尚義縣醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 尚義 076750； 2.中國(guó)人民解放軍251醫(yī)院病理科，河北 張家口 075000)

宮頸癌是第二位最常見(jiàn)的女性惡性腫瘤，其以鱗狀細(xì)胞癌最常見(jiàn)，占60%～80%[1]。腫瘤細(xì)胞的形成是細(xì)胞失控性、無(wú)限性增殖的表現(xiàn)，這一過(guò)程是多種細(xì)胞因子、多種基因共同參與的結(jié)果。胰島素樣生長(zhǎng)因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)被認(rèn)為與組織細(xì)胞的增殖、分化、凋亡關(guān)系密切，而生存蛋白(Survivin)是迄今發(fā)現(xiàn)的作用最強(qiáng)的凋亡抑制因子[2-3]，但兩者在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的研究少見(jiàn)。本研究主要探討IGF-1、Survivin在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的臨床病理特征的關(guān)系和兩者的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2009年1月至2012年2月尚義縣醫(yī)院收治的經(jīng)臨床病理醫(yī)師診斷為宮頸鱗狀細(xì)胞癌的患者75例、宮頸上皮內(nèi)瘤變患者35例、慢性宮頸炎患者30例，將其不同疾病列為三組。宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者年齡29～66(47±1)歲，年齡<47歲者49例，≥47歲者26例；腫瘤直徑<3 cm者6例，≥3 cm者69例；宮頸上皮內(nèi)瘤變患者年齡27～59(41±2)歲。慢性宮頸炎患者年齡26～57(40±4)歲。組織學(xué)類型分類[4]：角化型20例、非角化型50例、小細(xì)胞型5例。根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2000年修訂的宮頸腫瘤TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期11例，Ⅱ期19例，Ⅲ期25例，Ⅳ期20例。淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者54例，無(wú)轉(zhuǎn)移者21例。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者25例，無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者50例。癌細(xì)胞增殖指數(shù)(Ki-67)≥75%者68例，<75%者7例；癌細(xì)胞p53陽(yáng)性者61例，陰性者14例。所有患者術(shù)前均未接受放化療。

1.2主要試劑和方法 即用型鼠抗人IGF-1單克隆抗體、即用型兔抗人Survivin多克隆抗體及相關(guān)配套試劑均由福州邁新生物技術(shù)有限公司提供。染色采用免疫組織化學(xué)法(EnVisionTM)，步驟參照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3判斷標(biāo)準(zhǔn) IGF-1著色以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒染色為陽(yáng)性，應(yīng)用陽(yáng)性細(xì)胞百分比法進(jìn)行結(jié)果整理。陰性：陽(yáng)性細(xì)胞<1%；弱陽(yáng)性(+)：陽(yáng)性細(xì)胞2%～25%；中度陽(yáng)性(++)：陽(yáng)性細(xì)胞26%～50%；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：陽(yáng)性細(xì)胞>51%[5]。Survivin以細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒染色為陽(yáng)性，顯微鏡下隨機(jī)選擇10個(gè)有代表性的視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞占鏡下細(xì)胞的百分比，其比值>10%為陽(yáng)性表達(dá)[6]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1IGF-1、Survivin在宮頸病變組織中的表達(dá) IGF-1在慢性宮頸炎組織的胞質(zhì)和胞核中均未著色，顯示為陰性(圖1，見(jiàn)封三)，而在宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織病變中的腫瘤細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒，顯示為陽(yáng)性(圖2、3，見(jiàn)封三)。Survivin在慢性宮頸炎組織無(wú)胞質(zhì)著色，顯示為陰性(圖4，見(jiàn)封三)，而在宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織病變中的腫瘤細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒，顯示為陽(yáng)性(圖5、6，見(jiàn)封三)。IGF-1在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、慢性宮頸炎組織中陽(yáng)性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，IGF-1在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和慢性宮頸炎組(χ2=3.89，P<0.05；χ2=25.67，P<0.01)。Survivin在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、慢性宮頸炎組織中陽(yáng)性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，Survivin在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組織、慢性宮頸炎組織(χ2=6.40，P<0.05；χ2=22.46，P<0.01)(表1)。

圖1 圖2 圖3

圖4 圖5 圖6

表1 IGF-1、Survivin在宮頸病變組織中的陽(yáng)性表達(dá) [例(%)]

2.2IGF-1、Survivin的表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理因素的關(guān)系 在宮頸鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)臨床病理因素中，IGF-1的表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移、FIGO分期有關(guān)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與年齡、組織學(xué)類型、增殖指數(shù)(Ki-67)、p53無(wú)關(guān)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Survivin的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移、FIGO分期、p53有關(guān)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與腫瘤大小、年齡、組織學(xué)類型、增殖指數(shù)(Ki-67)無(wú)關(guān)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

表2 IGF-1、Survivin的陽(yáng)性表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理因素的關(guān)系 [n=75，例(%)]

2.3宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中IGF-1與Survivin表達(dá)的相關(guān)性 在75例宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中，IGF-1陽(yáng)性而Survivin陰性者3例，IGF-1陰性而Survivin陽(yáng)性者5例，兩者均為陽(yáng)性、陰性者分別為40例、27例，經(jīng)Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)分析顯示，兩者呈顯著正相關(guān)(rs= 0.78，P<0.01)(表3)。

表3 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中IGF-1與Survivin表達(dá)的相關(guān)性 (例)

3 討 論

IGF-1是IGFs家族的成員之一，主要由肝細(xì)胞合成、分泌，肝外組織也可分泌IGF-1，主要功能有降血糖、促物質(zhì)代謝、促進(jìn)細(xì)胞分裂及細(xì)胞增殖等。唐泓波等[7]研究IGF-1基因缺失小鼠(LID小鼠)乳腺癌模型發(fā)現(xiàn)，LID小鼠與正常小鼠相比，腫瘤潛伏期延長(zhǎng)、發(fā)生率降低、瘤體生長(zhǎng)緩慢、腫瘤細(xì)胞凋亡比例升高，提示血清低IGF-1對(duì)乳腺癌的發(fā)生有抑制作用。也有資料顯示，男性血清中IGF-1水平升高可提示發(fā)展成前列腺癌的風(fēng)險(xiǎn)升高[8]。本研究資料顯示，IGF-1在慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)率分別為3.33%、37.14%、57.33%，表明IGF-1的表達(dá)隨著宮頸病變的發(fā)展而不斷的升高，推測(cè)IGF-1的高表達(dá)預(yù)示著宮頸癌發(fā)生的可能性增大。同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)，IGF-1的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移有關(guān)。IGF-1蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組或遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組或遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移組，顯示IGF-1的高表達(dá)預(yù)示著腫瘤轉(zhuǎn)移的可能性增大。

人類Survivin基因位于染色體17q25，全長(zhǎng)14.7 kb，由3個(gè)內(nèi)含子和4個(gè)外顯子組成，其編碼產(chǎn)生的蛋白由142個(gè)氨基酸組成。在正常狀態(tài)下，Survivin僅在少數(shù)組織中表達(dá)，如胎盤(pán)、胚胎、睪丸、胸腺等。但在病理狀態(tài)下，Survivin過(guò)表達(dá)于乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、胃癌、食管癌等多種惡性腫瘤組織中，且Survivin在惡性病變組織中的表達(dá)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于良性病變組織，其過(guò)度表達(dá)被認(rèn)為是惡性度增高及預(yù)后不良的重要指標(biāo)[9-11]。本研究結(jié)果表明，Survivin在慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)率分別為6.67%、31.43%、60.00%，隨著宮頸病變嚴(yán)重程度的升高Survivin的表達(dá)逐漸增高，進(jìn)一步證實(shí)Survivin參與了宮頸病變的演變過(guò)程。在宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理因素中，Survivin的陽(yáng)性表達(dá)與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移、p53有關(guān)，說(shuō)明Survivin在癌組織中表達(dá)越強(qiáng)，癌細(xì)胞的生存能力越高，進(jìn)而為癌細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件，其機(jī)制可能是與Survivin有效地維持微小血管網(wǎng)的結(jié)構(gòu)，抑制胱天蛋白酶的凋亡，促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)功能有關(guān)。

本研究Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)分析顯示，IGF-1與Survivin在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，提示兩者存在一定程度的相互協(xié)調(diào)作用，共同促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞抗凋亡的能力，但兩者相互作用的機(jī)制或信號(hào)通路以及與腫瘤細(xì)胞耐藥的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。總之，IGF-1、Survivin在宮頸癌中表達(dá)越高，則預(yù)示著癌細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的能力越強(qiáng)。

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