鄧銀芝，張長江，賀建華△※

(恩施州中心醫(yī)院 1消化內(nèi)科， 2內(nèi)科心血管病中心，湖北 恩施445000)

克羅恩病(Crohn disease,CD)是一種病因尚不十分明確的非特異性慢性胃腸道炎性肉芽腫疾病,目前認(rèn)為其發(fā)病與環(huán)境、遺傳、微生物及免疫等因素有關(guān)。CD的家族聚集現(xiàn)象和CD發(fā)病的種族差異性提示遺傳因素在CD發(fā)病過程中起著至關(guān)重要的作用。NFSF15(tumor necrosis factor superfamily，member15)基因能編碼包括腫瘤壞死因子超家族成員15(Tumor necrosis factor superfamily-15,TNFSF15,TL1A又名TNFSF15)與DR3炎性因子在內(nèi)的多種細(xì)胞因子,鑒于炎癥在CD發(fā)生、發(fā)展中的作用,國內(nèi)外學(xué)者對NFSF15基因rs3810936位點(diǎn)多態(tài)性與CD易患性做了大量研究,但由于單個研究樣本量小和地區(qū)差異,導(dǎo)致各研究結(jié)論不一。為解決這些分歧,本研究對已發(fā)表的相關(guān)研究進(jìn)行Meta分析,以明確NFSF15基因rs3810936位點(diǎn)多態(tài)性與CD風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

1.1.1納入標(biāo)準(zhǔn) ①涉及NFSF15基因多態(tài)性與CD易患性相關(guān)性的文獻(xiàn)；②所有納入研究均為公開發(fā)表的病例對照或巢式病例對照；③全文發(fā)表；④文獻(xiàn)中數(shù)據(jù)完整,能直接或間接提供統(tǒng)計(jì)指標(biāo)比值比(odds ratio,OR)及95%CI；⑤病例均為經(jīng)確診CD患者,其診斷符合診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]或者內(nèi)鏡、組織、影像學(xué)綜合檢查結(jié)果。

1.1.2排除標(biāo)準(zhǔn) ①研究未設(shè)立對照組；②具體數(shù)據(jù)描述不清；③重復(fù)報(bào)道；④CD相關(guān)的綜述以及動物實(shí)驗(yàn)。

1.2檢索策略 計(jì)算機(jī)檢索英文數(shù)據(jù)庫EMbase、PubMed以及中文數(shù)據(jù)庫CBM、CNKI,檢索時間均為1990年6月至2013年6月。英文檢索式:“Crohn disease or CD or inflammatory bowel disease or IBD”AND“mutation OR variant OR polymorphism”AND“NFSF15 OR rs3810936”；中文檢索式:“克羅恩病或CD”和“基因多態(tài)性或突變”和“NFSF15 OR rs3810936 ”。文種限中、英文,手工檢索相關(guān)學(xué)術(shù)雜志。

1.3資料提取 由兩位評價者獨(dú)立根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)對文獻(xiàn)進(jìn)行篩選,通過討論達(dá)成一致。兩位評閱人獨(dú)立完成對原始文獻(xiàn)記錄數(shù)據(jù)的收集。提取以下一般信息:第一作者姓名、出版年份、國家、病例組和對照組基因型分布及其頻率(表1)。

1.4方法學(xué)質(zhì)量評價 根據(jù)STREGA原則，對納入研究進(jìn)行質(zhì)量評價[2]。文獻(xiàn)質(zhì)量指標(biāo)包括：①樣本量是否充分；②病例診斷是否清楚；③病例組和對照組匹配情況；④對照組基因型分布是否符合H-W遺傳平衡定律；⑤基因檢測方法是否合理；⑥數(shù)據(jù)是否充分。以上6項(xiàng)，每滿足一項(xiàng)記為1分，其中總分≥3分者為質(zhì)量可靠。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用Revman5.0軟件進(jìn)行Meta分析。采用χ2檢驗(yàn)分析各研究結(jié)果間的異質(zhì)性；各研究結(jié)果間的異質(zhì)性檢驗(yàn)采用Q檢驗(yàn)和P統(tǒng)計(jì)量,P<0.05提示各研究間存在異質(zhì)性,I2用來衡量異質(zhì)性大小程度，若各研究結(jié)果間不存在異質(zhì)性，合并采用固定效應(yīng)模型計(jì)算OR；反之采用隨機(jī)效應(yīng)模型，合并效應(yīng)OR，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。敏感性分析為依次排除單個文獻(xiàn)后重新進(jìn)行Meta分析,觀察合并效應(yīng)是否改變,森林圖對稱性判斷是否存在發(fā)表偏倚。

2 結(jié) 果

2.1文獻(xiàn)檢索結(jié)果 根據(jù)中英文檢索式初檢出文獻(xiàn)134篇，經(jīng)閱讀文題和摘要初篩，納入文獻(xiàn)51篇，進(jìn)一步查找和閱讀全文復(fù)篩，最終納入5篇文獻(xiàn)，包括中文文獻(xiàn)1篇和英文文獻(xiàn)4篇[3-7]。所有納入研究均為國內(nèi)病例對照研究。共納入患者3328例，其中CD患者1178例，對照人群1550例。TT、TC、CC基因型在病例組和對照組的分布分別為50.11%、41.45%、8.44%和35.81%、47.94%、16.26%。納入的研究時間分布為2005～2010年,研究人群主要分布在日本、韓國、英國、中國(表1)。

2.2納入研究質(zhì)量評價 根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)對文獻(xiàn)評分，5篇文獻(xiàn)評分分別為4,5,4,3,4分；均分為4分提示文獻(xiàn)質(zhì)量較好。

2.3Meta分析結(jié)果 NFSF15基因rs3810936多態(tài)性與CD易患性Meta分析結(jié)果顯示，純合子比較模型(CC vs TT):OR=0.34,95%CI0.17～0.72,P=0.004；雜合子比較模型(TC vs TT):OR=0.62,95%CI0.54～0.72,P<0.01；顯性遺傳模型(CC+TC vs TT):OR=2.18,95%CI1.19～4.02,P=0.01；隱性遺傳模型(CC vs TC+TT):OR=0.46,95%CI0.25～0.84,P=0.01(圖1～圖4)。

表1 納入研究的一般情況以及基因型分布

圖1 NFSF15基因rs3810936位點(diǎn)多態(tài)性與CD易患性CC vs TT比較Meta分析

圖2 NFSF15基因rs3810936位點(diǎn)多態(tài)性與CD易患性TC vs TT比較Meta分析〗

圖3 NFSF15基因rs3810936位點(diǎn)多態(tài)性與CD易患性CC+TC vs TT比較Meta分析

2.4發(fā)表偏倚分析 四種基因模型的Meta分析漏斗圖均對稱，提示無發(fā)表偏倚存在(圖5～圖8)。

2.5敏感性分析 依次單獨(dú)剔除1篇文獻(xiàn)后,各基因模型Meta分析結(jié)果未見明顯改變，提示Meta分析結(jié)果穩(wěn)定。

圖4 NFSF15基因rs3810936位點(diǎn)多態(tài)性與CD易患性CC vs TC+TT比較Meta分析

圖5 CC vs TT比較漏斗圖 圖6 TC vs TT比較漏斗圖 圖7 CC+TC vs TT比較漏斗圖 圖8 CC vs TC+TT比較漏斗圖

3 討 論

CD是多因素共同作用導(dǎo)致的疾病,其發(fā)病機(jī)制主要與腸道菌群，異常免疫介導(dǎo)的組織損傷和遺傳易患性有關(guān)。CD患者發(fā)病過程中腸膜細(xì)分泌干擾素γ、腫瘤壞死因子和白細(xì)胞介素2、白細(xì)胞介素18，這些促炎癥細(xì)胞因子在腸道黏膜的炎癥發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[8-9]。

研究表明，CD患者腸道黏膜固有層T細(xì)胞表達(dá)NFSF15基因編碼基因產(chǎn)物TL1A上調(diào)，且CD患者結(jié)腸炎性區(qū)的TL1A mRNA水平明顯高于非炎性區(qū)，目前推斷是通過促進(jìn)腸黏膜固有層單核細(xì)胞分泌干擾素γ繼而引起炎癥[10]。由此可見，NFSF15在CD黏膜炎癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。

在發(fā)展中國家對CD的研究已成為消化內(nèi)科醫(yī)師關(guān)注的一個熱點(diǎn)。激素和免疫抑制劑仍是CD內(nèi)科治療活動期的基礎(chǔ)藥物，但療效不佳。因此，明確CD的病因，以期對因治療是國內(nèi)外消化醫(yī)師迫切需要解決的問題。作為編碼NFSF15的NFSF15基因自然引起人們的關(guān)注，本研究通過Meta分析顯示，NFSF15基因rs3810936多態(tài)性與CD易患性有明顯關(guān)聯(lián)性。本研究通過Meta分析解決單個研究樣本量小和地區(qū)差異等問題，但也存在以下不足：①本研究Meta分析只檢索了國內(nèi)外幾個代表性數(shù)據(jù)庫，檢索語言僅為中文和英文，且只限于公開發(fā)表的文獻(xiàn)，影響了納入研究的全面性。②納入研究的人群無法分清民族。③飲食和社會環(huán)境是影響CD易患性的重要因素,本研究納入病例-健康對照組的研究往往忽略上述因素。由于存在以上的局限性，為進(jìn)一步明確NFSF15基因rs3810936位點(diǎn)多態(tài)性與CD易患性的內(nèi)在聯(lián)系，尚需要開展更多樣本量更大、設(shè)計(jì)更嚴(yán)謹(jǐn)、視角更寬的研究。

[1] Lennard-Jones JE.Classification of iflammatory bowel disease[J].Scand J Gastroenterol Suppl,1989(170):2-6.

[2] Little J,Higgins JP,Ioannidis JP,etal.Strengthening the reporting of genetic association studies(STREGA):an extension of the STROBE statement[J].Eur J Epidemiol,2009,24(1):37-55.

[3] Yamazaki K,McGovern D,Ragoussis J,etal.Single nucleotide polymorphisms in TNFSF15 confer susceptibility to Crohn′s disease[J].Hum Mol Genet,2005,14(22):3499-3506.

[4] Tremelling M,Berzuini C,Massey D,etal.Contribution of TNFSF15 gene variants to Crohn′s disease susceptibility confirmed in UK population[J].Inflamm Bowel Dis,2008,14(6):733-737.

[5] Yang SK,Lim J,Chang HS,etal.Association of TNFSF15 with Crohn′s disease in Koreans[J].Am J Gastroenterol,2008,103(6):1437-1442.

[6] Nakagome S,Takeyama Y,Mano S,etal.Population-specific susceptibility to Crohn′s disease and ulcerative colitis;dominant and recessive relative risks in the Japanese population[J].Ann Hum Genet,2010,74(2):126-136.

[7] 溫珍珍.中國人TNFSF15基因多態(tài)性與克羅恩病相關(guān)性研究[D].杭州：浙江大學(xué),2010.

[9] Müzes G,Molnár B,Tulassay Z,etal.Changes of the cytokine profile in inflammatory bowel diseases[J].World J Gastroenterol,2012,18(41):5848-5861.

[10] Michelsen KS,Thomas LS,Taylor KD,etal.IBD-associated TL1A gene(TNFSF15) haplotypes determine increased expression of TL1A protein[J].PLoS One,2009,4(3):e4719.