蔣佩琴等

【摘要】 目的：探討血塞通注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法：SD大鼠150只，雌雄不拘，采用Pulsinelli方法建立大鼠急性全腦缺血/再灌注型；按照隨機(jī)數(shù)字表法分為三組，分別為假手術(shù)組，腦缺血再灌注組即對(duì)照組和血塞通組，分別于再灌注后3、6、12、24和48 h 5個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠取出腦組織，每組10只。血塞通組于再灌注時(shí)給予血塞通注射液（5 mg/100 g）腹腔內(nèi)注射后，其他組給予等容量的生理鹽水（0.5 mL/kg）腹腔內(nèi)注射后，均每間隔6 h等量注射；檢測(cè)用于腦組織勻漿液的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）。結(jié)果：腦缺血再灌注期間，體內(nèi)SOD減少，MDA增多，對(duì)照組與假手術(shù)組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示在腦缺血再灌注期間氧自由基大量生成而清除減少。而血塞通組與對(duì)照組相比較，SOD增多，MDA減少，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：血塞通注射液對(duì)于大鼠腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，可減少氧自由基的產(chǎn)生。

【關(guān)鍵詞】 腦缺血再灌注損傷； 神經(jīng)保護(hù)； 血塞通

心肺復(fù)蘇后腦復(fù)蘇的本質(zhì)就是一個(gè)全腦缺血/再灌注的過程，這一過程必然存在再灌注損傷，如何減少腦缺血/再灌注損傷，提高心肺腦復(fù)蘇成功率，減少后遺癥成為醫(yī)學(xué)上面臨的難題。腦缺血/再灌注發(fā)病機(jī)制復(fù)雜[1-2]。盡管對(duì)腦缺血再灌注損傷機(jī)制的研究在不斷深入和發(fā)展，但是腦缺血再灌注損傷各種機(jī)制的樞紐點(diǎn)/交匯點(diǎn)尚不明確，治療尚缺乏有效的藥物，現(xiàn)已成為當(dāng)今世界醫(yī)學(xué)界研究的重點(diǎn)，有待于更深入地研究[3]。本試驗(yàn)選用中成藥血塞通對(duì)大鼠全腦缺血/再灌注后超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的影響來探討血塞通對(duì)腦復(fù)蘇的保護(hù)作用。

1 資料與方法

1.1 試劑 血塞通注射液，由西安力邦制藥有限公司購買；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）試劑盒由南京建成生物工程研究所購買。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 健康SD大鼠150只，雌雄不拘，體質(zhì)量250～300 g，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為三組，分別為假手術(shù)組，腦缺血再灌注組即對(duì)照組和血塞通組，每組50例。每組按再灌注的時(shí)間又分為3、6、12、24和48 h共5個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)10只大鼠。

1.3 動(dòng)物模型制備 采用Pulsinelli四血管阻塞的方法建立急性全腦缺血再灌注損傷模型，Pulsinelli大鼠全腦缺血四血管模型是研究多種缺血性腦疾病經(jīng)典模型之一[4]。以25%氨基甲酸乙酯，4 mL/kg的劑量腹腔注射麻醉，在大鼠頸部背側(cè)切開皮膚，假手術(shù)組大鼠只分離第一頸椎兩側(cè)橫突孔，不阻塞雙側(cè)椎動(dòng)脈，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈不夾閉；對(duì)照組和血塞通組阻塞雙側(cè)椎動(dòng)脈并分別用無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈10 min，然后松開動(dòng)脈夾形成再灌注，血塞通組于再灌注時(shí)給予血塞通注射液（5 mg/100 g）腹腔內(nèi)注射后，每間隔6 h給予等量注射；假手術(shù)、對(duì)照組給予等容量的生理鹽水（0.5 mL/kg）腹腔內(nèi)注射后，每間隔6 h等量注射；大鼠實(shí)驗(yàn)中保持體溫（37±0.5）℃，未昏迷或缺血后有癲癇、抽搐等并發(fā)癥均放棄。

1.4 標(biāo)本采集 所有大鼠分別于再灌注3、6、12、24和48 h 5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，快速斷頭處死，剝?nèi)∧X組織。用于腦組織勻漿液的SOD、MDA測(cè)定：于視交叉前緣處及向前延伸8 min處各做一冠狀切面，取兩切面間的右側(cè)腦組織用于制作勻漿液。所有腦組織勻漿液標(biāo)本集中統(tǒng)一用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD；用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA，嚴(yán)格按試劑盒操作步驟完成。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 12.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

缺血再灌注后對(duì)照組的腦組織勻漿液SOD活性明顯低于假手術(shù)組，MDA濃度顯著高于假手術(shù)組，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。血栓通組SOD活性明顯明顯高于對(duì)照組，MDA濃度顯著低于對(duì)照組，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1和表2。

3 討論

在腦缺血再灌注的病理過程中，自由基生成增多[5]。實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí)自由基水平明顯升高，能引起細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能更大的損傷，造成腦組織損傷[6]。蓄積在體內(nèi)的氧自由基容易攻擊含有磷脂成分的生物膜，同時(shí)還能破壞酶的活性[7]。生物膜的磷脂與自由基反應(yīng)而生成MDA。MDA是脂質(zhì)過氧化的終末產(chǎn)物，細(xì)胞中MDA量的多少能反映體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化的程度，間接反應(yīng)細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度和細(xì)胞損傷的程度[8]。因此，通過檢測(cè)機(jī)體內(nèi)MDA的含量可以估計(jì)血清中氧自由基水平和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的強(qiáng)弱。機(jī)體內(nèi)部同時(shí)存在分解清除自由基的抗氧化酶，其中SOD是體內(nèi)特異性歧化超氧陰離子自由基的抗氧化酶，他的作用是將氧自由基歧化，生成氧氣和過氧化氫，從而阻斷毒性更強(qiáng)的羥自由基的產(chǎn)生。SOD活力的高低可反映機(jī)體清除氧自由基的能力[9]。

隨著對(duì)腦缺血再灌注研究不斷深入，尋求更理想的治療藥物迫在眉睫，我國研究人員發(fā)現(xiàn)，中藥對(duì)治療腦缺血亦有很好的效果[10-11]。中藥在腦缺血治療中越來越引起人們重視，具有巨大的開發(fā)潛力。血塞通為我國傳統(tǒng)名貴中藥三七的提取物，主要成分為三七總皂苷，通常能抑制血小板和紅細(xì)胞過度聚集，提高紅細(xì)胞變形能力，降低血液黏稠度，能溶解血栓，使缺血部位再灌注，減輕缺血所致的病理損害[12-14]。本研究顯示，腦缺血再灌注期間，體內(nèi)SOD減少，MDA增多，對(duì)照組與假手術(shù)組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。提示在腦缺血再灌注期間氧自由基大量生成而清除減少。而血塞通組與對(duì)照組相比較，SOD增多，MDA減少，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表明血塞通注射液可以有效地保護(hù)內(nèi)源性SOD活性，提高機(jī)體清除氧自由基的能力，減輕機(jī)體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化的程度。因此，血塞通注射液在腦缺血再灌注損傷過程中具有一定的保護(hù)作用。endprint

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2013-11-21） （本文編輯：黃新珍）endprint

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（收稿日期：2013-11-21） （本文編輯：黃新珍）endprint

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