麻丹丹，施萬(wàn)英，張永剛，徐甲芬

（1.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床營(yíng)養(yǎng)科，沈陽(yáng)110001；2.遼寧省丹東市疾病預(yù)防控制中心，遼寧丹東118002）

HIV/AIDS患者體內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)的研究

麻丹丹1，施萬(wàn)英1，張永剛2，徐甲芬1

（1.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床營(yíng)養(yǎng)科，沈陽(yáng)110001；2.遼寧省丹東市疾病預(yù)防控制中心，遼寧丹東118002）

目的了解HIV/AIDS患者體內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)，探討氧化應(yīng)激與HIV疾病進(jìn)展的關(guān)系，以期為外源性抗氧化劑的補(bǔ)充提供參考。方法應(yīng)用分光光度法分析遼寧省丹東市36例HIV/AIDS患者體內(nèi)谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPx）、丙二醛（MDA）水平，并分析它們與CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的關(guān)系。結(jié)果HIV/AIDS患者血漿MDA水平為（6.33±2.35）nmol/ mL，與正常對(duì)照［（4.41±0.82）nmol/mL］比較顯著升高（P＜0.01）；血漿GSH水平為（5.09±2.84）mg/L，與正常對(duì)照［（6.89±2.56）mg/ L］比較顯著減少（P＜0.05）；血漿GSH-Px活性為（171.16±41.40）μmol/L，與正常對(duì)照［（195.78±28.35）μmol/L］比較顯著減少（P＜0.05）；并且GSH水平、GSH-Px活性與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)（r分別為0.469、0.432；P均＜0.05），MDA水平與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.414，P＜0.05）。結(jié)論隨著病程進(jìn)展，HIV/AIDS患者體內(nèi)抗氧化能力持續(xù)下降，機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。

HIV；AIDS；氧化應(yīng)激

近年來(lái)，越來(lái)越多的研究表明HIV感染和AIDS進(jìn)展與機(jī)體的氧化應(yīng)激密切相關(guān)，HIV/AIDS患者處于慢性氧化應(yīng)激狀態(tài)，體內(nèi)抗氧化劑嚴(yán)重缺乏，對(duì)免疫功能造成了嚴(yán)重影響［1，2］。這些研究多集中于歐美國(guó)家，國(guó)內(nèi)相關(guān)的研究較少。人體抗氧化功能受地域、人種、民族等因素影響較大，本研究以遼寧丹東市HIV/AIDS患者為對(duì)象，檢測(cè)其體內(nèi)的氧化應(yīng)激指標(biāo)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）和谷胱甘肽（glutathione，GSH），分析氧化應(yīng)激與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)、HIV疾病進(jìn)展的關(guān)系，以期為外源性抗氧化劑的補(bǔ)充提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象：實(shí)驗(yàn)組患者36例，為HIV抗體陽(yáng)性（經(jīng)Genelab公司蛋白印跡試劑盒確認(rèn)）、未經(jīng)抗病毒治療的遼寧丹東市HIV/AIDS患者，其中男30例，女6例，年齡（41.28±9.65）歲；正常對(duì)照組20例，為HIV抗體陰性、未暴露于HIV的健康人，血常規(guī)、肝、腎功能及心電圖正常，無(wú)免疫系統(tǒng)疾病史，性別、年齡均與HIV/AIDS患者匹配，其中男16例，女4例，年齡（39.50±6.92）歲。

1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備及試劑：流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司，F(xiàn)ACSAria），721分光光度計(jì)，GSH-Px、MDA和GSH測(cè)試盒均購(gòu)自南京建成生物技術(shù)有限公司，F(xiàn)ITC標(biāo)記的抗CD4單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.2 方法

1.2.1 CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)：用EDTA抗凝負(fù)壓真空采血管采集研究對(duì)象外周靜脈血。將20μL CD4/ CD8/CD3 TriTEST試劑加入CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)管中，加入50 μL抗凝血，室溫避光15 min，加入免洗溶血素450 μL，室溫避光15 min，F(xiàn)ACS Multiset軟件檢測(cè)并進(jìn)行自動(dòng)分析，計(jì)算CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值及相應(yīng)比值等。

1.2.2 GSH水平、GSH-Px活性和MDA水平測(cè)定：均采用分光光度法，分別按照南京建成生物工程研究所的GSH、GSH-Px和MDA測(cè)試盒操作步驟進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 HIV/AIDS患者GSH、GSH-Px，MDA水平變化

HIV/AIDS組患者血漿MDA水平與正常對(duì)照組比較顯著升高（P＜0.01）；血漿GSH水平與正常對(duì)照組比較顯著減少（P＜0.05）；血漿GSH-Px活性與正常對(duì)照組比較顯著減少（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 HIV/AIDS患者血漿GSH、GSH?Px和MDA水平的變化Tab.1 Alterations of plasma GSH，GSH?Px and MDA in HIV/AIDS patients

2.2 HIV/AIDS患者GSH、GSH-Px、MDA水平與CD4+T淋巴細(xì)胞的關(guān)系

通過(guò)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，HIV/AIDS患者血漿MDA水平與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.414，P＜0.05），血漿中GSH水平與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)（r=0.469，P＜0.05），血漿GSH-Px活性與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)（r=0.432，P＜0.05）。

3 討論

體內(nèi)的氧化系統(tǒng)/抗氧化系統(tǒng)平衡是免疫系統(tǒng)發(fā)揮正常功能的的重要因素［3］。T淋巴細(xì)胞主要由CD4+和CD8+兩群細(xì)胞組成，是機(jī)體免疫系統(tǒng)內(nèi)功能最重要的細(xì)胞。CD4+細(xì)胞是HIV攻擊的主要靶細(xì)胞，HIV感染時(shí)導(dǎo)致CD4+細(xì)胞數(shù)量減少，引起機(jī)體免疫功能下降，從而導(dǎo)致各種機(jī)會(huì)性感染或腫瘤。因而CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)常常作為HIV感染診斷和分期的主要依據(jù)，是客觀(guān)評(píng)價(jià)HIV/AIDS患者疾病進(jìn)展的重要指標(biāo)［4，5］。

氧化應(yīng)激是指機(jī)體在遭受各種有害刺激時(shí)，體內(nèi)高活性分子如活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）產(chǎn)生過(guò)多，氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡，從而導(dǎo)致組織損傷［6］。機(jī)體遭受氧化應(yīng)激損傷的程度以及機(jī)體抗氧化能力的強(qiáng)弱一定程度上可以通過(guò)酶抗氧化劑、非酶抗氧化劑水平以及ROS損傷的生物分子（如DNA、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物）反映出來(lái)［7］。人體存在2類(lèi)抗氧化系統(tǒng)，一類(lèi)是酶抗氧化系統(tǒng)，包括超氧化物歧化酶、GSH-Px化物酶等；另一類(lèi)是非酶抗氧化系統(tǒng)，包括GSH、維生素C、維生素E、褪黑素、類(lèi)胡蘿卜素、微量元素硒等。各種抗氧化酶從不同角度協(xié)助清除體內(nèi)的ROS，在抗氧化過(guò)程中起著不同的作用。因而常測(cè)定血液中GSH-Px、SOD、Cat的量及活性來(lái)反映機(jī)體抗氧化活性，其中以GSH-Px最受重視。GSH-Px是生物體內(nèi)一種重要的含硒酶，它可以催化還原性的谷胱甘肽與過(guò)氧化物的氧化還原反應(yīng)，消除機(jī)體內(nèi)的過(guò)氧化氫及脂質(zhì)過(guò)氧化物，阻斷活性氧自由基對(duì)機(jī)體的進(jìn)一步損傷，保護(hù)細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的活性成分，且被認(rèn)為是機(jī)體中最有效的抗氧劑之一。GSH是非酶類(lèi)抗氧化劑，它是多種抗氧劑酶的輔酶，參加酶促反應(yīng)，協(xié)調(diào)內(nèi)源性與外源抗氧劑的作用，可以直接或在GSH-PX作用下清除ROS，防止氧化損傷。測(cè)定GSH的量可在一定程度上反映機(jī)體的抗氧化能力。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物之一，其高低常常反映脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，從而間接反映出機(jī)體細(xì)胞受到自由基攻擊嚴(yán)重的程度。

我們的研究發(fā)現(xiàn)，HIV/AIDS患者血漿中GSH、GSH-Px水平明顯低于正常人，MDA水平明顯高于正常人，并且GSH水平、GSH-Px活性與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)，MDA水平與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)呈負(fù)相關(guān)。提示隨著病程進(jìn)展，HIV感染者抗氧化能力持續(xù)下降，機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)；同時(shí)，HIV感染直接或間接地促進(jìn)氧化應(yīng)激，導(dǎo)致氧化/抗氧化失衡，推進(jìn)了疾病進(jìn)程。分析氧化應(yīng)激影響HIV感染疾病進(jìn)程的機(jī)制可能包括以下幾個(gè)方面：（1）激活HIV復(fù)制所必需的核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，增加HIV復(fù)制［8］；（2）誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，使CD4+T細(xì)胞進(jìn)行性減少［9］；（3）抑制T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，加速免疫功能喪失［10］；（4）在AIDS患者機(jī)會(huì)性感染、HIV相關(guān)性腎病及神經(jīng)系統(tǒng)損傷等并發(fā)癥發(fā)生中也都有氧化應(yīng)激的參與［11］。因而，機(jī)體的持續(xù)處于氧化應(yīng)激狀態(tài)是HIV感染發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。

綜上所述，我們的研究結(jié)果顯示氧化應(yīng)激在HIV感染疾病進(jìn)程中扮演了重要的角色，如何降低HIV引起的氧化應(yīng)激、清除體內(nèi)的ROS，成為控制HIV感染疾病進(jìn)程中關(guān)鍵的一步。有研究提出對(duì)HIV感染者補(bǔ)充外源性抗氧化劑來(lái)減輕體內(nèi)氧化損傷［12］，但目前仍需大量的臨床實(shí)驗(yàn)加以證實(shí)。

［1］Treitinger A，Spada C，Verdi C，et al.Decreased antioxidant defence in individuals infected by the human immunodeficiency virus［J］. Eur J Clin Investigation，2000，30（5）：454-459.

［2］Aquaro S，Scopelliti F，Pollicita M.Oxidative stress and HIV infection：target pathways for novel therapies?［J］.Future HIV Therapy，2008，2（4）：327-338.

［3］Jaruga P.Oxidation mechanisms and anti-oxidation in HIV infected patients--effects on disease progression［J］.Postepy Hig Med Dosw，1999，53（1）：43-54.

［4］吳姍姍，姜擁軍，張子寧，等.HIV感染后CD8+T細(xì)胞表面NK相關(guān)受體表達(dá)的變化［J］.免疫學(xué)雜志，2011，21（10）：866-874.

［5］吳姍姍，趙雪，張子寧，等.HIV感染后CD4+T細(xì)胞表面NK相關(guān)受體表達(dá)的變化［J］.免疫學(xué)雜志，2012，28（12）：1045-1050.

［6］Jones DP.Redefining oxidatiue stress［J］.Antioxid Redox Signal，2006，8（9-10）：1865-1879.

［7］王秋林，王浩毅，王樹(shù)人.氧化應(yīng)激狀態(tài)的評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)病理生理雜志，2005，21（10）：2069-2074.

［8］Westendorp MO，Shatrov VA，Schulze-Osthoff K，et al.HIV-1 tat potentiates TNF-induced NF-kappa B activation and cytotoxicity by altering the cellular redox state［J］.EMBO J，1995，14（3）：546-554.

［9］Pollicita M，Muscoli C，Gura A，et al.Apoptosis and telomeres shortening related to HIV-1 induced oxidative stress in an astrocytoma cell line［J］.BMC Neuroscience，2009，10（1）：1-11.

［10］Jaruga P，Jaruga B，Gackowski D，et al.Supplementation with antioxidant vitamins prevents oxidative modification of DNA in lymphocytes of HIV-infected patients［J］.Free Radic Biol Med，2002，32（5）：414-420.

［11］Hahn K，Robinson B，Anderson C，et al.Differential effects of HIV infected macrophages on dorsal root ganglia neurons and axons［J］. Experimental Neurol，2008，210（1）：30-40.

［12］Maggie Z，He G，Wang H.Effects of nutritional supplementation on children with HIV/AIDS in China［J］.J Cent South Univ（Med Sci），2012，37（3）：305-310.

（編輯 武玉欣）

The State ofOxidative Stressin HIV/AIDS Patients

MADan-dan1，SHIWan-ying1，ZHANGYong-gang2，XUJia-fen1
（1.Department of Clinical Nutrition，The First Hospital，China Medical University，Shenyang 10001，China；2.Liaoning Province Dandong Center for Disease Control and Prevention，Dandong 118002，China）

ObjectiveTo investigate the state of oxidative stress of HIV/AIDS patients and study on the relationship between oxidative stress and HIV disease progression，so as to provide a reference for supplement of exogenous antioxidants.MethodsSpectro-photometry analysis was performed forthe detection ofGSH，GSH-Px and MDA levels in 36 casesofHIV/AIDS Chinese patients，and theirrelationship with the CD4+Tlymphocyte count were determined.ResultsCompared with healthy controls，levels of GSH and GSH-Px were significantly decreased（P＜0.05），level of MDAwassignificantly increased（P＜0.05）in HIV/AIDS patients.LevelsofGSHand GSH-Px were correlated with CD4+T cellnumber（P＜0.05），and levelofMDA was negatively correlated with CD4+T cellnumber（P＜0.05）.ConclusionAlong with the progression，HIVpatients′antioxidant capacity continues to decline，which keepsthe body in a state ofoxidative stress.

HIV；AIDS；oxidative stress

R512.91

A

0258-4646（2014）02-0136-03

遼寧省教育廳高?？蒲杏?jì)劃（2009A769）

麻丹丹（1985-），女，碩士研究生.

施萬(wàn)英，E-mail：swying555@sina.com

2012-11-26

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：