【摘要】無論是在組織胚胎學等醫(yī)學基礎課中，還是在臨床檢驗工作中，冰凍切片都有著舉足輕重的作用，冰凍切片被廣泛的運用在科研、教學和臨床診斷中。所謂冰凍切片就是組織在低溫狀態(tài)下在很短的時間內變硬并進行切片。在臨床外科手術中常常需要進行快速病理診斷，而冰凍切片就是一個很好的方法。

【關鍵詞】冰凍切片；制作；體會

【中圖分類號】R197.324【文獻標識碼】A【文章編號】1004-4949（2013）11-71-02

冰凍切片是一種在低溫的條件下使組織快速冷凍到一定的硬度然后進行切片的方法。其制作過程簡單方便快捷，在手術中快速進行病理診斷從而為手術在中快速確定組織性質，對醫(yī)生的手術方案具有指導意義。冰凍切片的組織在送檢前不需要進行處理，其組織沒有發(fā)生變化，使得原來的生活形態(tài)得以保持，特別是在免疫組織化學染色中，組織中的糖、酶、抗原、脂類等成分由于沒有受到干擾而存在，組織中的細胞抗原的免疫性也得到了保存，對于需要檢測糖、酶、抗原、脂類的不會受到影響。但是，冰凍切片的制作過程要比普通的蠟切片難度大、要求高，而且組織冰凍的程度不好把握，在切片的過程中組織較易破碎，很難切成符合要求的薄片，在染色的過程中很容易脫片，所有以上這些因素都會影響到切片的質量，從而影響到了檢測結果。對于如何能有效快速高質量的制作符合要求的冰凍切片一直使我們面對的問題。

1材料和方法

1.1 材料： 恒冷切片機，切片刀，固定液，膠水，實驗用用的新鮮組織如肝、腎、脾、皮膚、食管、胃、淋巴結、心肌、腦、卵巢、小腸等組織。

1.2 方法： 采用新鮮的實驗用的新鮮組織，取一塊大小為1.5cm×1.5cm×3cm的新鮮實驗用組織，去除組織中的脂肪組織，在取組織的時候要注意保持干燥以免引起組織細胞發(fā)生變性和變化，把組織放在低溫液氮中快速冷凍放置于冰凍臺上。在切片機內快速冰凍2分鐘之后待切。如果組織的體積較大冰凍時間相應延長，如果所取組織體積較小則相應的縮短冰凍時間，切片刀的溫度控制在零下25℃-零下30℃之間。在開始切片之前要對切片刀和防卷板之間的角度進行調整以防切出來的組織薄片卷曲。使用有粘結劑的載玻片把切下來的薄片直接吸附，這個過程要迅速的完成，以免產生皺折，隨后立即放入固定液中1分鐘。把固定好的切片在自來水中稍作洗滌，隨后放入已經預熱到40℃的蘇木素染色液中染色1分鐘，水洗之后使用1%的鹽酸乙醇分化，再次水洗后放入37℃的溫水中藍化，隨后放入到37℃復制伊紅染液中染色1分鐘，上行遞度酒精（70%、80%、95%、100%）加溫到37℃左右逐級脫水，電吹風吹干，不用二甲苯透明，中性樹膠直接封周即可。

2結果

根據這種方法做出來的冰凍切片具有較好的效果，而且方法相對較為簡單、節(jié)約時間，全部過程大約在一刻鐘左右。冰凍切片較為完整、無冰晶裂隙、組織細胞形態(tài)結構清晰分明、厚薄均勻、無脫片現(xiàn)象、胞核顯鮮明的藍色細胞質染成粉紅色顏色對比鮮艷，切片質量優(yōu)良，組織染色理想。細胞抗原的免疫性得以保存，組織中的糖、酶、抗原、脂類等成分由于沒有受到干擾而存在。

3 討論

冰凍切片是利用迅速冷凍從而使新鮮組織中的水分結冰變硬的原理。包埋劑起托起組織和黏固組織的作用，將組織固定在標本托上短時間內凍好進行切片。所以冰凍切片的質量和兩個方面的因素有關：（1）第一個是組織的冰凍程度，組織的冰凍程度和切片的質量有著很大的關系，在冰凍的過程中如果中如果冰凍不足或者冰凍過很都會影響到切片的質量，只有冰凍到恰好的程度才可以切成質量較高的切片；（2）切片刀的鋒利程度，切片刀的鋒利程度會直接影響到切片的質量的，只有鋒利的刀鋒才能夠快速的切成符合要求的切片，鈍的刀鋒是不可能切出符合要求的切片的。對于不同的器官、不同質地、組織的大小不同、不同的組織需要采用針對性的處理措施。①為使組織不發(fā)生冰晶，在制取組織標本時不可以使用水或者生理鹽水沖洗，也不可以把組織浸泡到酒精或生理鹽水中，所使用的器械要保持干燥；因為如果在制取組織時帶有水分的話會引起細胞間針狀裂隙，導致組織正常結構改變。再者，切片機內的溫度要適當?shù)目刂圃诹阆?5℃-零下30℃之間時間控制在10分鐘左右，貼片后立即用電吹風吹干后人固定液固定1～2分鐘，再吹干，盡量避免緩慢冷凍造成過多的冰晶形成。②包埋劑經常使用的是進口材料，有資料報道膠水的包埋效果也可以，可以節(jié)約一部分成本。③掌握好最佳的切片溫度，組織在冷凍的過程中一旦達到中央透明消失就要及時進行固定和切片，這時為最佳切片時機。④冰凍切片在切片的時候，切片機的切片刀與防卷片板之間的角度尤為重要，一般在5°的夾角時效果最好；切片完成后要迅速的貼片，不然組織切片的溫度升高，切片變軟無法貼片為了防止脫片，除了預先在載片涂上黏附劑。⑤組織固定液要選擇穿透力強的液體，可以使蛋白質迅速沉淀，同時又可以讓細胞的染色構架清楚。⑥組織的染色結果和溫度的關系較為密切，在染色之前把染色液預熱到37℃，其染色效果要優(yōu)于偏離此溫度的染色液所染的色。染色之后使用37℃的乙醇逐級脫水，可以保持糖、酶、抗原、脂類等化學成分不發(fā)生變化。⑦脫水后要直接封片，可以縮短制片時間和節(jié)約二甲苯試劑，減少了污染和保護了工作人員。

參考文獻

[1] 王穎，范幼奇.提高卵巢腫瘤冷凍切片質量的體會[J].臨床與實驗病理雜志，2008，24（3）：373.

[2] 胡未鳴，湯建國，蘇立眾，等.喉部分切除術術中冰凍切片對預后評估的意義[J].中國耳鼻咽喉頭頸外科，2009，16（5）：242.

[3] 仇玲玲，翟梅娟，黃斌，等.冰凍切片1000例制作的體會[J].腫瘤研究與臨床，2006，21（10）：710-711.