，，

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院普外科,山東 青島 266042)

胃癌是發(fā)病率最高的的胃腸道惡性腫瘤之一，其死亡率高達(dá)9.7%[1]。胃癌的預(yù)后與胃癌的浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤的分化程度密切相關(guān)。細(xì)胞分化抑制因子-1(ID-1)的表達(dá)與多種腫瘤相關(guān)，在胃癌的表達(dá)率亦很高[2]；表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)及人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體-2(HER2)都是酪氨酸激酶Ⅰ家族HER家族中的成員，兩者的過(guò)表達(dá)與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)[3]；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是目前發(fā)現(xiàn)的促血管生成活性最強(qiáng)的因子，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，同時(shí)可通過(guò)增加血管通透性使血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移，誘導(dǎo)腫瘤血管生成，維持腫瘤的生長(zhǎng)[4]。ID-1、VEGF、EGFR和HER2都是目前研究較多的且與胃癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)的因子，是目前胃癌藥物治療研究的重要作用靶點(diǎn)。但目前對(duì)4種因子綜合研究的報(bào)道較少，本研究采用免疫組織化學(xué)方法，研究它們?cè)谖赴┙M織的表達(dá)情況，旨在探討其表達(dá)的特點(diǎn)及相互關(guān)系，從而為預(yù)測(cè)胃癌臨床分期及預(yù)后提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

隨機(jī)取我院病理科2008-2012年胃癌組織標(biāo)本55例，其中男34例，女21例；年齡≤60歲23例，>60歲32例。TNM分期Ⅰ、Ⅱ期24例，Ⅲ、Ⅳ期31例；漿膜以?xún)?nèi)22例，漿膜及外層33例；高、中分化腺癌27例，低分化腺癌、印戒細(xì)胞癌28例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，未轉(zhuǎn)移19例。

1.2 主要試劑

即用型兔抗人EGFR單克隆抗體、即用型兔抗人VEGF單克隆抗體、即用型兔抗人HER2單克隆抗體、即用型S-P超敏試劑盒及DAB顯色液，均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，濃縮型兔抗人ID-1單克隆抗體購(gòu)自武漢博士德公司。

1.3 方法

1.3.1免疫組化檢測(cè) 采用常規(guī)SP法，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。

1.3.2結(jié)果判定 在高倍鏡下取10個(gè)視野，觀察陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，取其平均值。HER2表達(dá)定位于細(xì)胞膜，VEGF、ID-1及EGFR表達(dá)均定為于細(xì)胞漿。評(píng)分方法：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例≤5%為1分，6%～25% 為2分，26%～50%為3分，51%～75% 為4分， >75% 為5分；細(xì)胞膜或細(xì)胞漿呈藍(lán)色為1分，棕黃色為2分，棕色為3分，棕褐色為4分；將兩項(xiàng)評(píng)分相加，≤3分者為陰性表達(dá)，≥4分者為陽(yáng)性表達(dá)，其中以2～3分計(jì)為(-)，4～5分為(+)，6～7分為()，8～9分為()。

1.3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料比較采用樣本率比較的χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P<0.05為差異有顯著性。

2 結(jié) 果

2.1 各指標(biāo)表達(dá)情況

ID-1、VEGF、EGFR和HER2陽(yáng)性表達(dá)率分別為65.5%(36/55)、67.3%(37/55)、58.2%(32/55)、61.8%(34/55)，均呈高表達(dá)。見(jiàn)表1。

表1 胃癌組織ID-1、VEGF、EGFR和HER2表達(dá)(例)

2.2 各指標(biāo)表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

ID-1、VEGF、EGFR和HER2的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤浸潤(rùn)深度、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(χ2=7.04～24.85,P<0.01)；而與病人性別及年齡無(wú)關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 表達(dá)的相關(guān)性

ID-1、VEGF、EGFR和HER2在胃癌組織表達(dá)均呈正相關(guān)(r=0.221～0.297，P<0.05)。見(jiàn)表1。

表2 胃癌組織中各指標(biāo)表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(例(χ/%))

3 討 論

EGFR是酪氨酸激酶Ⅰ型受體家族成員之一，可與胞漿過(guò)表達(dá)的表皮生長(zhǎng)因子結(jié)合，使EGFR的酪氨酸殘基磷酸化，通過(guò)胞漿內(nèi)的信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的分化、血管形成，從而抑制細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致細(xì)胞惡化[5]。研究結(jié)果顯示，腫瘤病人的發(fā)病年齡、細(xì)胞分化程度、浸潤(rùn)深度及臨床分期均與EGFR的過(guò)表達(dá)相關(guān)，中低分化腺癌中EGFR的表達(dá)率明顯高于高分化腺癌，表明其與低分化腺癌的發(fā)生密切相關(guān)[6]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中EGFR的陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)58.2%(32/55)，隨著分化程度的降低、浸潤(rùn)深度的增加及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)，陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高。這進(jìn)一步證實(shí)了EGFR在胃癌發(fā)生發(fā)展中的促進(jìn)作用。

HER2與EGFR同屬于酪氨酸激酶Ⅰ型受體家族，正常情況下，HER2處于非激活狀態(tài)，當(dāng)受到致癌因素作用時(shí)，就會(huì)被激活，與其配體結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化，促進(jìn)新生血管形成，從而使正常細(xì)胞發(fā)生癌變[7]。大量研究顯示，HER2的過(guò)表達(dá)與很多惡性腫瘤的發(fā)生相關(guān)，已經(jīng)成為預(yù)測(cè)乳癌預(yù)后的獨(dú)立因素。胃癌組織中HER2的過(guò)表達(dá)，與胃癌的發(fā)病年齡、細(xì)胞分化程度、臨床分期及預(yù)后明顯相關(guān)[8]。本研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了上述結(jié)論。

VEGF可與血管內(nèi)皮細(xì)胞特異結(jié)合，促進(jìn)血管內(nèi)皮成活，發(fā)揮促血管生成作用[9]。其被認(rèn)為是目前對(duì)血管生成作用最強(qiáng)，特異性最高的因子。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為67.3%(35/55)，且隨著腫瘤分化程度的降低、浸潤(rùn)深度的增加及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)，其表達(dá)率顯著增高。SU等[10]的研究顯示，VEGF在多數(shù)人類(lèi)惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，對(duì)胃癌的生長(zhǎng)和侵襲同樣具有促進(jìn)作用。

ID-1是DNA結(jié)合抑制因子家族中的一員，通過(guò)抑制轉(zhuǎn)錄因子堿性HLH與NDA的結(jié)合，抑制細(xì)胞分化，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，具有永生化基因的特性[11]。研究顯示，ID-1在乳癌、結(jié)腸癌、肝癌及胃腺癌等多種惡性腫瘤組織均呈高表達(dá)[2]。HAN等[12]研究顯示，ID-1在胃癌組織高表達(dá)，且與胃癌的分化程度、浸潤(rùn)深度及轉(zhuǎn)移率呈正相關(guān)。這也與本文結(jié)果相一致，進(jìn)一步證實(shí)了ID-1在胃癌發(fā)生發(fā)展的促進(jìn)作用。

本文的研究結(jié)果還顯示，ID-1、VEGF、EGFR和HER2在胃癌組織中的表達(dá)呈顯著的正相關(guān)，說(shuō)明其作用機(jī)制之間有著緊密的聯(lián)系。國(guó)外有研究顯示，ID-1在VEGF參與血管生成過(guò)程中起著關(guān)鍵作用[13]。IBRAHIM等[14]的研究結(jié)果顯示，ID-1對(duì)胃腸道腫瘤中VEGF與EGFR的表達(dá)起著校準(zhǔn)器的作用。另外，AOYAGI等[15]的研究結(jié)果也顯示，HER2與EGFR在促進(jìn)胃癌發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中可能起著協(xié)同作用。這說(shuō)明ID-1、VEGF、EGFR和HER2具有協(xié)同作用。其作用過(guò)程可能為：ID-1通過(guò)調(diào)控HER2與EGFR的表達(dá)，進(jìn)一步調(diào)節(jié)VEGF的血管生成作用；ID-1直接調(diào)控VGFR的表達(dá)進(jìn)而控制其血管生成作用。其具體的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

總之，通過(guò)對(duì)ID-1、VEGF、EGFR和HER2聯(lián)合檢測(cè)，可為胃癌的臨床分期提供新的依據(jù)，并更好地判斷病人的預(yù)后情況。

[1] 郭凌云,劉濤,李玉民. 胃癌實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒌难芯楷F(xiàn)況[J]. 世界華人消化雜志, 2011,19(25):2609-2614.

[2] LASORELLA A. UO T, IAVARONE A. Id proteins at the cross-road of development and cancer[J]. Oncogene, 2001,20(58):8326-8333.

[3] 卞保祥,朱正秋. HER2、EGFR信號(hào)通路與胃癌的靶向治療[J]. 中國(guó)腫瘤健康與康復(fù), 2010,6(17):566-568.

[4] 張蕓,趙晶,杜雅菊. VEGF與消化系腫瘤關(guān)系的研究新進(jìn)展[J]. 世界華人消化雜志, 2011:19(26):2703-2708.

[5] SEBASTIAN S, SETTLEMAN J, RESHKIN S J, et al. The complexity of targeting EGFR signalling in cancer:from expression to turnover[J]. Biochim Biophys Acta, 2006,1766(1):120-139.

[6] CIARDIELLO F, TORTORA G. EGFR antagonists in cancer treatment[J]. N Engl J Med, 2008,358:1160-1174.

[7] SIRICA A E. Role of ErbB family receptor tyrosine kinases in intra-hepatic cholangiocarcinoma[J]. World J Gastroenterol, 2008,14:7033-7058.

[8] PARK D I, YUN J W, PARK J H, et al. HER-2/neu amplification is an independent prognostic factor in gastric cancer[J]. Dig Dis Sci, 2006,51:1371-1379.

[9] 歐希龍,關(guān)云艷,顏芳,等. 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165基因?qū)θ宋赴┘?xì)胞凋亡的影響及機(jī)制[J]. 世界華人消化雜志, 2008,16(3):307-310.

[10] SU J L, YANG P C, SHIH J Y, et al. The VEGF-C/Flt 4 axis promotes invasion and metastasis of cancer cells[J]. Cancer Cell, 2006,9(3):209-223.

[11] GOLDBERG R M, CARRATO A. Accomplishments in 2007 in treatment of advance colorectal cancer[J]. Gastrointest Cancer Res, 2008,2:S19.

[12] HAN S, GUO C, HONG L, et al. Expression and significance of Id-1 helix-loop-helix protein overexpression in gastric cancer[J]. Cancer Lett, 2004,216(1):63-71.

[13] SAKARAI D, TSUCHIYA N, YAMAGUCHI A, et al. Crucial role of inhibitor of DNA binding/differentiation in the vascular endothelial growth factor induced activation and angiogenic processes of human endothelial cells[J]. J Immunol, 2004,173(9):5801-5809.

[14] IBRAHIM METEOGLU, NEZIH MEYDAN, et al. Id-1: Regulator of EGFR and VEGF and potential target for colorectal cancer therapy[J]. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2008,27(1):69-76.

[15] AOYAGI K, KOHFUJI K,YANO S, et al. Evaluation of the epidermal growth factor receptor(EGFR)and c-erbB-2 in superspreading-type and penetrating-type gastric carcinoma[J]. Kurume Mad J, 2001,48(3):197-200.