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(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266021 1 病理學(xué)教研室； 2 附屬醫(yī)院病理科)

乳癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率逐年增高，嚴重威脅女性健康，但其發(fā)病機制至今尚未完全闡明。Notch信號途徑是一條高度保守的信號通路，廣泛表達于哺乳動物的多種成熟組織中，對細胞的增殖和分化起重要的調(diào)控作用[1]。Notch與腫瘤組織的關(guān)系是復(fù)雜的，在不同的腫瘤組織，Notch信號傳導(dǎo)系統(tǒng)具有不同的作用[2]。其中，Notch1在多數(shù)腫瘤組織中起促癌作用，在少數(shù)癌組織中起抑癌作用，多數(shù)研究支持Notch1在乳癌中的促癌作用。已有研究結(jié)果表明，C-erbB-2基因與乳癌發(fā)生密切相關(guān)，但兩者在乳癌發(fā)生中是否有相關(guān)性鮮見報道。本文擬通過檢測Notch1 和C-erBb-2蛋白在乳癌及癌旁乳腺組織中的表達，探討Notch1 和C-erBb-2基因與乳癌臨床病理特征的關(guān)系以及兩者之間的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料

2010年12月—2012年4月，隨機選取蓬萊市人民醫(yī)院手術(shù)切除乳癌標(biāo)本60例(術(shù)前均未行放化療及內(nèi)分泌治療)，同時隨機留取癌旁正常乳腺組織標(biāo)本20例。所有標(biāo)本均為女性；年齡為24～87歲；浸潤性導(dǎo)管癌(非特殊型)48例，非浸潤性導(dǎo)管癌12例；腫瘤直徑≤2 cm者11例，>2 cm者49例；Ⅰ～Ⅱ級41例，Ⅲ級19例；有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例；臨床分期Ⅰ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期25例。

1.2 試劑及方法

所有標(biāo)本均經(jīng)40 g/L的中性甲醛固定，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。免疫組化染色步驟按試劑說明書進行。實驗分別用已知陽性組織切片作為陽性對照，用PBS代替2種一抗作為陰性對照。

1.3 Notch1和C-erBb-2蛋白的陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)

Notch1蛋白主要定位于腫瘤細胞胞質(zhì)和胞膜。C-erBb-2蛋白主要定位于腫瘤細胞膜上。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)參考文獻[3]。每張切片于腫瘤區(qū)域隨機觀察10個高倍鏡(400倍)視野，每個高倍視野計數(shù)100個癌細胞，觀察陽性細胞染色強度，并計數(shù)陽性細胞。按染色強度計分：無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。同時，按照陽性細胞百分率計分：≤5%為0分，6%～30%為1分，31%～70%為2分，≥71%為3分。以陽性細胞百分率與強度計分相加所得總分進行結(jié)果判斷，0分為陰性(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為中陽性()，5～6分為強陽性()。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，等級資料比較采用非參數(shù)統(tǒng)計秩和檢驗(Mann-Whitney Test)，不同組間率的比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)性檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同組織中Notch1和C-erBb-2蛋白的表達

乳癌組Notch1和C-erBb-2蛋白的陽性表達率分別為78%(47/60)、70%(42/60)，正常組分別為10%(2/20)、0(0/20)，兩組間比較差異有顯著意義(χ2=29.511、29.474，P<0.01)。

2.2 乳癌組織中Notch1和C-erBb-2蛋白的表達與臨床病理特征的關(guān)系

乳癌組織中Notch1蛋白陽性表達與病人的病理分級、腫瘤大小及組織類型無關(guān)(P均>0.05)；而與臨床分期及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(χ2=5.881、4.716，P<0.05)。而C-erBb-2蛋白陽性表達只與有無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(χ2=8.341，P<0.05)。見表1。

2.3 乳癌組織中Notch1和C-erBb-2蛋白表達的相關(guān)性

Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，乳癌組織中Notch1和C-erBb-2蛋白的表達呈顯著正相關(guān)(r=0.451，P<0.01)。見表2。

3 討 論

Notch信號廣泛存在于大多數(shù)脊椎動物和無脊椎動物的不同組織中，Notch家族成員較多，但結(jié)構(gòu)高度保守，其信號通路由受體、配體、下游基因及其他效應(yīng)物等構(gòu)成[4]，Notch信號途徑被認為是機體最重要的信號傳導(dǎo)途徑之一。有研究提示，Notch信號系統(tǒng)在不同的腫瘤組織中有不同的作用,甚至在同一腫瘤的不同階段也可有不同的作用。研究顯示，Notch1蛋白在胃癌組織中的表達明顯高于正常胃組織[5]，從而認為Notch1在胃癌組織中具有促癌作用；而在食管鱗癌中的表達則相反，認為其在食管鱗癌中可能是一種抑癌基因。

表1 乳癌組織中Notch1和C-erBb-2蛋白的表達與臨床病理特征的關(guān)系

Notch信號通路是維持乳腺正常發(fā)育的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因素，異常啟動的Notch信號通路可以導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因鼠乳腺惡性腫瘤的發(fā)生。MICHAEL等[6]在乳癌細胞中檢測到高表達的Notch1基因，并且發(fā)現(xiàn)Notch1基因與乳癌預(yù)后不良有關(guān)。本實驗結(jié)果顯示，乳癌組織中Notch1蛋白的陽性表達率為78%，而在正常乳腺組織中的陽性表達率僅為10%，推測Notch1蛋白與乳癌的發(fā)生可能相關(guān)。此外，本實驗的研究結(jié)果還顯示，乳癌組織中Notch1蛋白的陽性表達與腫瘤臨床分期及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，即Ⅲ～Ⅳ期的乳癌組織組中Notch1蛋白的陽性表達高于Ⅰ～Ⅱ期組，有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織組中Notch1蛋白的陽性表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。提示Notch1蛋白與乳癌的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)，這與多數(shù)學(xué)者研究結(jié)果相符。

C-erbB-2原癌基因又稱HER-2，其位于17號染色體的長臂，定位于17q21，編碼相對分子質(zhì)量為185 000的跨膜蛋白，具有胞內(nèi)酪氨酸酶活性，與表皮生長因子受體具有高度同源性，又稱人表皮生長因子相關(guān)基因。正常情況下，C-erbB-2基因處于非啟動狀態(tài)，參與細胞生長、分化的調(diào)節(jié)，當(dāng)受到某些致癌因素作用后，主要以基因擴增和蛋白過度表達的形式啟動[7]。多數(shù)學(xué)者認為，C-erbB-2基因參與腫瘤細胞的生長調(diào)控、增殖與分化，與乳癌發(fā)生密切相關(guān)。本實驗中C-erbB-2蛋白在癌組織中的表達率顯著高于癌旁正常乳腺組織，且其表達與病人的病理分級、腫瘤大小、臨床分期及組織類型均無關(guān)，而與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，C-erbB-2蛋白表達陽性者發(fā)生腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性大。文獻研究結(jié)果顯示，C-erbB-2蛋白表達也與癌組織的臨床分期有關(guān)[7]，而本實驗結(jié)果未顯示相關(guān)性，可能與本研究標(biāo)本數(shù)目相對較少有關(guān)。本實驗結(jié)果還顯示，Notch1與C-erbB-2蛋白在乳癌組織中的表達呈顯著正相關(guān)，且兩者均與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示這兩項指標(biāo)可能協(xié)同作用影響乳癌的發(fā)生與轉(zhuǎn)移，對預(yù)后的判斷具有指導(dǎo)意義。

總而言之，乳癌發(fā)生發(fā)展是以多個原癌基因啟動和抑癌基因失活為基礎(chǔ)的多步驟多階段過程。Notch1與C-erbB-2蛋白的過度表達與乳癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且兩者在此過程中具有協(xié)同作用，具體機制有待進一步深入研究，其聯(lián)合檢測對于乳癌的早期診斷及轉(zhuǎn)移預(yù)測具有一定的指導(dǎo)意義。

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