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        梓醇促進(jìn)局灶腦缺血大鼠皮質(zhì)脊髓束芽生和重塑

        2013-12-07 05:37:56?;埒P呂發(fā)金
        中國藥理學(xué)通報(bào) 2013年8期
        關(guān)鍵詞:梓醇軸突皮質(zhì)

        萬 東,?;埒P,呂發(fā)金,羅 勇,謝 鵬

        (重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院1.急診科&重癥醫(yī)學(xué)科、3.放射科、4.神經(jīng)內(nèi)科,重慶 400016;2.西南大學(xué)藥學(xué)院暨中醫(yī)藥學(xué)院,重慶 400716)

        腦卒中急性期后,神經(jīng)修復(fù)時(shí)間窗開啟,伴隨著腦內(nèi)血管新生、神經(jīng)新生、軸突芽生和突觸重構(gòu)等神經(jīng)可塑性事件的發(fā)生發(fā)展,受損的病灶周圍區(qū)神經(jīng)環(huán)路、皮質(zhì)間神經(jīng)環(huán)路以及皮質(zhì)與皮質(zhì)下神經(jīng)環(huán)路逐步修復(fù),神經(jīng)缺失功能得以恢復(fù)[1]。但成體大腦神經(jīng)可塑性明顯抑制,內(nèi)源性自發(fā)性神經(jīng)修復(fù)能力非常有限。尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)軸突生長限制性微環(huán)境的存在更不利于皮質(zhì)脊髓束(corticospinal tract,CST)等長距離軸突再生/芽生,成為受累肢體功能殘障的重要原因[2]。因此,采用藥物或細(xì)胞治療手段激發(fā)、維持或放大卒中后神經(jīng)修復(fù)機(jī)制可望使眾多的腦卒中患者獲益。但目前尚未發(fā)現(xiàn)確切有效的促神經(jīng)修復(fù)藥物。

        梓醇是地黃主要的有效單體成分,其神經(jīng)保護(hù)作用及促神經(jīng)修復(fù)效應(yīng)近年受到廣泛關(guān)注。本課題組及國內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),梓醇可誘導(dǎo)離體培養(yǎng)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元[3]及 PC12細(xì)胞[4]軸突生長,上調(diào)缺血性腦卒中大鼠腦內(nèi)軸突再生分子標(biāo)志物——生長相關(guān)蛋白43(growth-associated protein-43,GAP-43)蛋白表達(dá)[5],增加缺血周圍區(qū)大腦皮質(zhì)神經(jīng)氈內(nèi)突觸數(shù)目[6],促進(jìn)缺血性腦卒中大鼠神經(jīng)-血管單元修復(fù)[7],明顯改善模型大鼠神經(jīng)功能結(jié)局。課題組近期觀察到[8],梓醇可下調(diào)腦缺血后健側(cè)感覺運(yùn)動大腦皮質(zhì)髓鞘相關(guān)蛋白Nogo-A及其受體NgR蛋白表達(dá),但梓醇能否促進(jìn)CST等長距離軸突芽生和重塑目前尚未探討。因此,本研究觀察梓醇對局灶腦缺血大鼠皮質(zhì)脊髓束軸突芽生和重塑的影響,以期揭示梓醇促卒中后神經(jīng)功能恢復(fù)的神經(jīng)解剖學(xué)機(jī)制。

        1 材料與方法

        1.1 動物與分組 30只鼠齡相同的成年健康Sprague-Dawley大鼠,♀♂不拘,體質(zhì)量(220~250)g,購自重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心(合格證號:檢動字2002A040)。隨機(jī)數(shù)字法將動物分為假手術(shù)組、模型組、生理鹽水組、梓醇治療組和胞磷膽堿對照組,每組6只。

        1.2 藥品與器材 梓醇購自中國藥品生物制品檢定所(產(chǎn)品批號:110808-200508,規(guī)格:20 mg/支),胞磷膽堿鈉注射液為山西晉新雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品(國藥準(zhǔn)字H14021994,規(guī)格:125 g·L-1)。BDA-10000為美國Molecular Probes公司產(chǎn)品(產(chǎn)品號:D1956,產(chǎn)品編號:13-9139,規(guī)格:25 mg/支)。兔抗 GAP-43多克隆抗體、Cy3標(biāo)記羊抗兔 IgG、FITC標(biāo)記鏈霉親和素、辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記鏈霉親和素以及DAB顯色試劑盒均購于武漢博士德生物工程有限公司。CM1850型冰凍切片機(jī)及TSCPS2型激光共聚焦顯微鏡均為德國Leica公司產(chǎn)品,Olympus BS-50型生物顯微鏡為日本Olympus公司產(chǎn)品。

        1.3 模型制備 參照文獻(xiàn)[5,7],采用腹腔注射水合氯醛麻醉大鼠,顳側(cè)低位開顱法電凝右側(cè)大腦中動脈位于嗅束與大腦下靜脈之間的一段,制備局灶永久性腦缺血模型。假手術(shù)組除不凝閉右側(cè)大腦中動脈外,其余步驟和模型組相同。術(shù)中保持直腸溫度在(37.0±0.5)℃。

        1.4 模型成功的判斷與納入標(biāo)準(zhǔn) 術(shù)后24 h,采用Bederson評分評估受累肢體神經(jīng)缺失功能狀況:0分,無神經(jīng)功能缺失癥狀;1分,左前肢屈曲,但不伴其他異常,即提尾懸空實(shí)驗(yàn)陽性;2分,提尾懸空實(shí)驗(yàn)陽性,同時(shí)側(cè)推抵抗力下降(即側(cè)向推力實(shí)驗(yàn)陽性),但自由活動時(shí)無轉(zhuǎn)圈行為;3分,同2分行為,且自由活動時(shí)向癱瘓側(cè)轉(zhuǎn)圈。評分為1~3分的大鼠納入實(shí)驗(yàn)。

        1.5 藥物干預(yù) 依據(jù)課題組前期研究結(jié)果[9],確定梓醇和胞磷膽堿給藥劑量分別為5 mg·kg-1和0.5 g·kg-1,均用生理鹽水配制,每次給藥總體積為3 ml。生理鹽水組腹腔注射等體積生理鹽水。假手術(shù)組和模型組不給任何藥物干預(yù)。藥物干預(yù)組均于術(shù)后24h首次經(jīng)腹腔注射給藥,每日1次,連續(xù)7 d。

        1.6 神經(jīng)行為學(xué)測試

        1.6.1 黏貼片移除實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[10],造模前、pMCAO 術(shù)后1 d(給藥前)、4、7、14、21 及28 d,在受累前肢腕部背側(cè)黏貼6 cm×0.5 cm的膠帶,然后將大鼠放回鼠籠,密切觀察和記錄大鼠感知并移除膠帶所耗費(fèi)的總時(shí)間,以評價(jià)受累前肢感覺運(yùn)動功能狀況。各時(shí)點(diǎn)測試兩次,每次測試最長計(jì)時(shí)為120 s,兩次測試的間隔時(shí)間大于10 min。

        1.6.2 足失誤實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[11],制備長75 cm、寬45 cm、高70 cm的網(wǎng)格平臺,網(wǎng)格大小為2.5 cm×2.5 cm,網(wǎng)格線(鐵絲)直徑1.5 mm。將大鼠放在平臺上自由活動時(shí),若出現(xiàn)受累前肢(本實(shí)驗(yàn)為左前肢)踏空而掉入網(wǎng)眼中,記為足失誤1次。記錄2 min內(nèi)左前肢失誤次數(shù)和行走的總步數(shù),計(jì)算左前肢失誤次數(shù)占總步數(shù)的百分比,以評估大鼠受累前肢運(yùn)動的準(zhǔn)確性。

        1.7 磁共振成像檢測腦梗死體積 pMCAO術(shù)后1 d(給藥前)和28 d時(shí),采用TOSHIBA VISART 1.5T超導(dǎo)核磁共振成像儀,選用膝正交線圈(QD),行頭顱T2WI掃描。測量各組大鼠腦梗死絕對體積占對側(cè)大腦半球體積的百分比,即相對腦梗死體積。

        1.8 BDA順行神經(jīng)示蹤 參照文獻(xiàn)[12],pMCAO術(shù)后15 d,大鼠麻醉后固定于江彎Ⅰ型腦立體定位儀上。常規(guī)消毒后縱向切開頭皮、顱骨骨膜,暴露前囟。以前囟為原點(diǎn),標(biāo)記如下4點(diǎn),定位大鼠左前肢感覺運(yùn)動皮質(zhì)區(qū),即前囟向嘴側(cè)4.0 mm,再分別向左側(cè)旁開1 mm和5 mm;前囟向尾側(cè)1.0 mm,再分別向左側(cè)旁開1 mm和5 mm。用骨鉆去除上述區(qū)域的骨瓣,制備大小約5 mm×4 mm的骨窗。用4.5號注射針頭刺破硬腦膜,暴露左側(cè)感覺運(yùn)動皮質(zhì)區(qū),用 10μl微量進(jìn)樣器將 10% 生物素化 BDA-10000溶液(用0.01 mol·L-1磷酸鹽生理鹽水緩沖液配置,pH 7.3)分層多點(diǎn)注射于左側(cè)感覺運(yùn)動皮質(zhì)區(qū)(深度1.0~1.5 mm),每例注射5點(diǎn),每點(diǎn)注射1 μl,總量 5 μl。5 個(gè)注射點(diǎn)的坐標(biāo)定位如下:① A=-1.0 mm,L=+1.0 mm;② A=-1.0 mm,L=+5.0 mm;③ A=+4.0 mm,L=+1.0 mm;④ A=+4.0 mm,L=+5.0 mm;⑤ 為①③連線與②④連線的交點(diǎn);其中,A示以前囟為中心向前,L示以前囟為中心向左側(cè)方。每點(diǎn)注射完畢,將進(jìn)樣器針頭停留在針道內(nèi)5 min,以免藥液外溢。

        注射示蹤劑后3 h(此時(shí)大鼠麻醉已清醒),將大鼠提尾懸空,可見右上肢屈曲抱胸,癥狀持續(xù)3~5 h后自然消失。以此作為示蹤劑準(zhǔn)確注入左側(cè)大腦皮質(zhì)運(yùn)動區(qū)的成功標(biāo)準(zhǔn)。

        1.9 實(shí)驗(yàn)取材 注射示蹤劑2周后(即pMCAO術(shù)后28 d),深麻醉大鼠,用4%多聚甲醛溶液灌流固定。冰上剝離脊髓標(biāo)本,采集脊髓頸膨大(C4~C6))。用Leica-cm 1850型冰凍切片機(jī)冠狀位連續(xù)切片,脊髓片厚50 μm。收集所有脊髓片,進(jìn)行BDA標(biāo)記纖維顯色或免疫熒光雙標(biāo)組織化學(xué)染色。

        1.10 BDA標(biāo)記纖維顯色 脊髓片放人含0.3%Triton X-100 的 0.05 mol·L-1Tris-HCl(TBS,pH 7.6)中,4℃孵育過夜。用0.05 mol·L-1TBS中漂洗切片3次,每次5 min;切片轉(zhuǎn)入辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液中(1∶200稀釋),4℃孵育過夜;0.05 mol·L-1TBS漂洗切片4次,每次5 min;鎳劑預(yù)染10 min,0.05 mol·L-1TBS漂洗切片2次,每次10 min;將切片轉(zhuǎn)至二氨基聯(lián)苯胺(DAB)工作液(含 0.05%DAB、0.04% 硫酸鎳、0.03%H2O2和0.05 mol·L-1TBS)中內(nèi)呈色反應(yīng)10~20 min。用0.1 mol·L-1TBS終止反應(yīng)。切片裱于APES包被的載片上,晾干后梯度乙醇脫水,二甲苯透明,樹脂封片,光鏡下觀察并采集圖像。

        1.11 漂浮法免疫熒光雙標(biāo)記 采用自由漂浮法行免疫熒光雙標(biāo)記組織化學(xué)染色。用FITC標(biāo)記的親和素檢測BDA標(biāo)記的纖維,用Cy3標(biāo)記羊抗兔IgG二抗匹配兔抗GAP-43多克隆抗體(一抗)檢測組織中GAP-43蛋白表達(dá)。主要步驟:脊髓片用含有0.3%Triton X-100 的0.02 mol·L-1PBS(PBST)漂洗3次后,正常山羊血清工作液室溫封閉30 min;轉(zhuǎn)移至GAP-43一抗工作液(1∶300)中,4℃孵育過夜(14~16 h);0.02 mol·L-1PBST漂洗脊髓片3次后,轉(zhuǎn)移至FITC標(biāo)記的親和素(1∶100)和Cy3標(biāo)記羊抗兔IgG(1∶200)混合工作液中,37℃避光孵育2 h;0.02 mol·L-1PBST漂洗脊髓片4次后,裱片,50%緩沖甘油封片,激光共聚焦顯微鏡下觀察BDA/GAP-43共定位并采集圖像。用0.02 mol·L-1PBS代替一抗、熒光抗體工作液作為陰性對照,其余步驟同上。

        1.12 半定量分析

        1.12.1 計(jì)量CST越邊纖維 參考文獻(xiàn)[13],采用NIH Image J圖像分析軟件,以脊髓中央管和脊髓前正中裂連線為脊髓左右半側(cè)的分界標(biāo)志,計(jì)量失神經(jīng)支配側(cè)脊髓腹側(cè)運(yùn)動角BDA陽性標(biāo)記纖維(越邊纖維)數(shù)目占脊髓健側(cè)腹側(cè)運(yùn)動角BDA陽性標(biāo)記軸突數(shù)目的百分比,以校正不同動物感覺運(yùn)動皮質(zhì)神經(jīng)元對示蹤劑敏感性的差異。每只動物取5張脊髓切片,200×光鏡下觀察并采集圖像。計(jì)算5張脊髓片CST越邊纖維百分比的平均值,用實(shí)驗(yàn)組6只大鼠越邊纖維百分比的平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

        1.12.2 免疫熒光雙標(biāo)圖像采集與半定量分析 參考文獻(xiàn)[14],脊髓片置于激光共聚焦顯微鏡下觀察,測量紅色熒光強(qiáng)度系數(shù)以反映GAP-43表達(dá)強(qiáng)弱;并用系統(tǒng)自帶軟件進(jìn)行圖像疊加處理,獲得BDA/GAP-43共定位信號(呈黃色),采用NIH ImageJ圖像分析軟件,分析每組圖像的皮爾遜相關(guān)系數(shù)(Pearson相關(guān)系數(shù)),以間接反映共定位像素值大小。每只動物觀察3張切片,每組6只,取各指標(biāo)的平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

        2 結(jié)果

        30只大鼠均成功造模并進(jìn)行BDA標(biāo)記。

        2.1 各組受累前肢感覺運(yùn)動功能恢復(fù)狀況 黏貼片移除實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,術(shù)前、術(shù)后1和4 d各組黏貼片移除時(shí)間差異無顯著性(P>0.05),術(shù)后7、14、21和28 d,梓醇組和胞磷膽堿組黏貼片移除時(shí)間均比模型組和生理鹽水組對應(yīng)時(shí)點(diǎn)明顯縮短(P<0.05);其中,術(shù)后28 d,梓醇組較胞磷膽堿組黏貼片移除時(shí)間明顯縮短(P<0.05);各組間足失誤實(shí)驗(yàn)結(jié)果也存在上述差異。提示梓醇和胞磷膽堿均可促進(jìn)受累前肢感覺運(yùn)動功能恢復(fù),但梓醇作用優(yōu)于胞磷膽堿;見Fig 1。

        Fig 1 Treatment with catalpol improves performances in the behavioral tests

        2.2 各實(shí)驗(yàn)組腦梗死體積 pMCAO致腦梗死范圍包括右側(cè)大腦半球感覺運(yùn)動皮質(zhì)、紋狀體和部分丘腦。pMCAO術(shù)后1 d(給藥前)及術(shù)后28 d各組腦梗死體積差異無顯著性(P>0.05),見Tab 1。

        Tab 1 Lesion volume among groups at 1 and 28 day after pMCAO

        2.3 梓醇增強(qiáng)脊髓頸膨大區(qū)CST纖維重塑 BDA神經(jīng)示蹤顯示,大鼠CST在脊髓頸膨大節(jié)段集中走行在脊髓后(背)索。生理狀態(tài)下,CST絕大部分纖維投射至同側(cè)脊髓前角;腦缺血后,健側(cè)CST發(fā)出分支越邊支配對側(cè)脊髓前角。半定量分析顯示,模型組越邊纖維占4.7% ±1.3%,較假手術(shù)組(1.4%±0.5%)明顯增加(P<0.05);梓醇組越邊纖維占8.5%±2.1%,較模型組、生理鹽水組(5.2% ±0.8%)和胞磷膽堿組(5.5% ±1.8%)明顯增加(P<0.05)。表明梓醇可增強(qiáng)腦缺血后CST軸突重塑,見 Fig 2。

        A:sham operation group;B:pMCAO model only;C:catalpol group;D:citicoline group;Broken lines in A to D indicate the midline of spinal cord;Asterisks indicate the left denervated spinal gray matter

        2.4 梓醇促進(jìn)脊髓頸膨大區(qū)CST纖維芽生 激光共聚焦顯微鏡下觀察,綠色熒光顯示BDA標(biāo)記的健側(cè)CST,紅色熒光顯示GAP-43表達(dá)陽性的新生軸突纖維,紅色熒光強(qiáng)度系數(shù)越大,則GAP-43表達(dá)水平越高;BDA/GAP-43共定位呈黃色,顯示健側(cè)CST新生的芽生軸突。BDA/GAP-43共定位分析,Pearson相關(guān)系數(shù)越大則脊髓頸膨大區(qū)健側(cè)CST新生的芽生軸突纖維越多。結(jié)果顯示模型組紅色熒光強(qiáng)度系數(shù)為0.76±0.17,較假手術(shù)組(0.46±0.37)明顯增強(qiáng)(P<0.05);梓醇組為1.80±0.25,明顯強(qiáng)于其他各實(shí)驗(yàn)組(P<0.05);提示缺血性腦卒中可刺激CST軸突自發(fā)性芽生,而梓醇對CST軸突芽生有明顯促進(jìn)作用。進(jìn)一步分析各組Pearson相關(guān)系數(shù),結(jié)果模型組(0.17±0.06)大于假手術(shù)組(0.11±0.08),組間差異具有顯著性(P<0.05);梓醇組(0.60±0.15)較模型組、生理鹽水組(0.19±0.03)和胞磷膽堿組(0.26±0.06)均明顯增加(P<0.05);提示梓醇可明顯促進(jìn)局灶腦缺血后健側(cè)CST軸突芽生,見Fig 3。

        3 討論

        腦卒中后受累肢體功能恢復(fù)的神經(jīng)解剖學(xué)機(jī)制目前尚無完全明了,但與病灶部位、損傷程度以及卒中病程等因素密切相關(guān)。一側(cè)感覺運(yùn)動皮質(zhì)或錐體束嚴(yán)重受損時(shí),通常需要對側(cè)大腦半球的參與,以實(shí)現(xiàn)受損神經(jīng)環(huán)路結(jié)構(gòu)和功能重組[15]。因此,病灶對側(cè)大腦半球在卒中后神經(jīng)修復(fù)中的作用日益受到重視。

        本研究發(fā)現(xiàn),大鼠腦缺血后2周,受累肢體感覺運(yùn)動功能已明顯恢復(fù)。此時(shí)病灶對側(cè)感覺運(yùn)動皮質(zhì)受到傷害性刺激(如本研究中定點(diǎn)注射神經(jīng)示蹤劑),可使左前肢再度出現(xiàn)癱瘓?bào)w征,進(jìn)一步證實(shí)病灶對側(cè)感覺運(yùn)動皮質(zhì)的神經(jīng)環(huán)路重構(gòu)參與了腦缺血受累肢體功能恢復(fù)。

        皮質(zhì)脊髓束(CST)起源于大腦皮質(zhì)錐體神經(jīng)元,直接或間接與脊髓運(yùn)動神經(jīng)元聯(lián)接,是控制隨意運(yùn)動精確性的主要神經(jīng)通路。一側(cè)大腦半球缺血性卒中后,病灶對側(cè)大腦半球感覺運(yùn)動皮質(zhì)與雙側(cè)的紋狀體、丘腦、腦橋以及脊髓等皮層下運(yùn)動相關(guān)區(qū)域重建纖維聯(lián)系有助于受累肢體功能恢復(fù)。已有研究證實(shí),成體動物腦卒中后,源于病灶對側(cè)大腦半球的CST在脊髓水平的越邊纖維數(shù)量與神經(jīng)缺失功能恢復(fù)狀況呈正相關(guān)[16]。但成體中樞神經(jīng)系統(tǒng)CST等長距離軸突在腦缺血后芽生或再生非常困難,病灶對側(cè)感覺運(yùn)動皮質(zhì)與皮層下運(yùn)動相關(guān)區(qū)域建立雙側(cè)支配的能力較弱,成為腦卒中患者功能恢復(fù)不佳甚至殘留永久性神經(jīng)功能缺失的主要原因。因此,CST是腦缺血損傷后中樞神經(jīng)再生研究關(guān)注的焦點(diǎn)。本研究采用受累前肢黏貼物移除實(shí)驗(yàn)和足失誤實(shí)驗(yàn)證實(shí)缺血性腦卒中后24 h延遲給予梓醇干預(yù)仍能有效促進(jìn)受累前肢感覺運(yùn)動功能恢復(fù)。進(jìn)一步采用微量注射法,在病灶對側(cè)大腦皮質(zhì)感覺運(yùn)動區(qū)多點(diǎn)注射生物素葡聚糖胺(BDA),順行追蹤C(jī)ST,了解梓醇對CST纖維芽生和重塑的影響。結(jié)果觀察到,正常情況下,大鼠CST絕大部分纖維支配同側(cè)脊髓前角,很少繞過脊髓中央管前后越邊支配對側(cè)脊髓前角。但腦缺血后,病灶對側(cè)CST纖維芽生并越邊支配對側(cè)脊髓失神經(jīng)支配區(qū)的數(shù)量明顯增加,同時(shí)伴隨腦缺血受累前肢感覺運(yùn)動功能恢復(fù),提示病灶對側(cè)CST纖維芽生在腦缺血后功能恢復(fù)過程中發(fā)揮重要作用。梓醇干預(yù)后,病灶對側(cè)CST越邊纖維數(shù)量比模型組和胞磷膽堿組明顯增加,并伴隨受累前肢感覺運(yùn)動功能明顯優(yōu)于對照組,提示梓醇對腦缺血后神經(jīng)元長距離軸突重塑有促進(jìn)作用,有利于受累肢體功能恢復(fù)。

        Fig 3 Treatment with catalpol after pMCAO promotes CST axonal sprouting and remodeling shown in BDA/GAP-43 immunofluorescence double staining at the cervical enlargement level

        鑒于腦卒中后幸存大腦皮質(zhì)與靶神經(jīng)元間重建神經(jīng)聯(lián)接主要依賴如下3種神經(jīng)修復(fù)機(jī)制:①啟用功能未激活的既存神經(jīng)環(huán)路;②冗余神經(jīng)環(huán)路的功能替代;③ 幸存神經(jīng)纖維芽生和突觸新生。因此,本研究在證實(shí)梓醇可促進(jìn)CST軸突重塑的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步采用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)檢測BDA標(biāo)記纖維與GAP-43共定位,以期明確梓醇能否增強(qiáng)或維持CST軸突芽生能力。結(jié)果腦缺血后4周,梓醇治療組CST芽生軸突仍大量表達(dá)GAP-43,BDA/GAP-43共定位信號明顯強(qiáng)于模型組和胞磷膽堿組(P<0.05)。GAP-43是一種神經(jīng)組織特有的糖蛋白,在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和損傷再生等事件中常能監(jiān)測到GAP-43在mRNA和蛋白水平表達(dá)上調(diào),對神經(jīng)元生長、發(fā)育和軸突再生起明顯促進(jìn)作用。國際上將GAP-43作為神經(jīng)生長發(fā)育和損傷修復(fù)等神經(jīng)可塑性研究的首選分子探針,是神經(jīng)元軸突再生的分子標(biāo)志,反映軸突再生能力的強(qiáng)弱。上述研究結(jié)果表明,梓醇對CST軸突芽生有促進(jìn)和維持作用。這可能是梓醇組功能恢復(fù)狀況優(yōu)于其他實(shí)驗(yàn)組的重要原因。

        在成體中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),軸突生長狀態(tài)(尤其是長距離軸突再生)受生長促進(jìn)因子和生長抑制因子共同調(diào)節(jié)[17]。勿動蛋白(Nogo-A)、髓鞘相關(guān)糖蛋白(MAG)、少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘相關(guān)糖蛋白(OMgp)等髓鞘相關(guān)蛋白以及硫酸軟骨素(CSPG)和tenascin等細(xì)胞外基質(zhì)蛋白所構(gòu)成的中樞神經(jīng)系統(tǒng)軸突生長限制性微環(huán)境不利于皮質(zhì)脊髓束(CST)等長距離軸突再生/芽生,成為受累肢體功能殘障的重要原因[2]。Nogo-A/NgR信號軸激活可引起軸突生長錐崩解,致使軸突再生失敗。梓醇可下調(diào)缺血性腦卒中后大腦皮質(zhì)髓鞘相關(guān)蛋白Nogo-A及其受體NgR蛋白表達(dá),改善軸突生長微環(huán)境[8],這可能是梓醇明顯促進(jìn)CST軸突芽生和重構(gòu)的重要神經(jīng)生化學(xué)分子基礎(chǔ)。

        綜上,本研究從形態(tài)學(xué)角度證實(shí)了梓醇可促進(jìn)腦卒中后CST芽生和重塑,但梓醇促神經(jīng)修復(fù)的藥理作用靶點(diǎn)及分子作用機(jī)制尚待進(jìn)一步探討。深入研究這些問題,可望為腦卒中后神經(jīng)修復(fù)治療提供極具臨床轉(zhuǎn)化潛能的藥物干預(yù)手段。

        [1]Hermann D M,Chopp M.Promoting brain remodelling and plasticity for stroke recovery:therapeutic promise and potential pitfalls of clinical translation[J].Lancet Neurol,2012,11(4):369-80.

        [2]Walmsley A R,Mir A K.Targeting the Nogo-A signalling pathway to promote recovery following acute CNS injury[J].Curr Pharm Des,2007,7(24):2470-84.

        [3]萬 東,?;埒P,羅 勇,等.梓醇促大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元軸突生長的離體研究[J].中國中藥雜志,2007,32(17):1771-4.

        [3]Wan D,Zhu H F,Luo Y,et al.Study of catalpol promoting axonal growth for cultured cortical neurons from rats[J].China J Chin Mater Med,2007,32(17):1771-4.

        [4]Yamazaki M,Chiba K,Mohri T.Neuritogenic effect of natural iridoid compounds on PC12h cells and its possible relation to signaling protein kinases[J].Biol Pharm Bull,1996,19(6):791-5.

        [5]?;埒P,萬 東,羅 勇,等.梓醇上調(diào)GAP-43表達(dá)伴隨局灶腦缺血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2007,23(9):1231-6.

        [5]Zhu H F,Wan D ,Luo Y,et al.Catalpol up-regulated GAP-43 protein expression and improved behavior outcome of focal cerebral ischemia rats[J].Chin Pharmacol Bull,2007,23(9):1231-6.

        [6]Wan D,Zhu H F,Luo Y,et al.Changes in synapse quantity and growth associated protein 43 expression in the motor cortex of focal cerebral ischemic rats following catalpol treatment[J].Neural Regenerat Res,2011,6(18):1380-5.

        [7]Zhu H F,Wan D,Luo Y,et al.Catalpol increases brain angiogenesis and up-regulates VEGF and EPO in the rat after permanent middle cerebral artery occlusion[J].Int J Biol Sci,2010,6(5):443-53.

        [8]萬 東,祝慧鳳,羅 勇,等.梓醇對局灶性腦缺血大鼠感覺運(yùn)動皮質(zhì)軸突再生限制性微環(huán)境的影響[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2012,28(10):1370-5.

        [8]Wan D,Zhu H F,Luo Y,et al.Effects of catalpol on the inhibitory microenvironment for axon regeneration in sensorimotor cortex in rats after focal cerebral ischemia [J].Chin Pharmacol Bull,2012,28(10):1370-5.

        [9]萬 東,?;埒P,羅 勇,等.梓醇促進(jìn)腦缺血大鼠神經(jīng)修復(fù)的行為學(xué)觀察與評價(jià)[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2012,28(9):1208-14.

        [9]Wan D,Zhu H F,Luo Y,et al.Obseversion and evaluation of a neurologic function recovery treatment with catalpol in rat after permanent middle cerebral artery occlusion[J].Chin Pharmacol Bull,2012,28(9):1208-14.

        [10]Modo M,Stroemer R P,Tang E,et al.Neurological sequelae and long-term behavioural assessment of rats with transient middle cerebral artery occlusion[J].J Neurosci Methods,2000,104(1):99-109.

        [11]Gilmour G,Iversen S D,O'Neill MF,et al.Amphetamine promotes task-dependent recovery following focal cortical ischaemic lesions in the rat[J].Behav Brain Res,2005,165(1):98-109.

        [12]Gharbawie O A,Gonzalez C L,Whishaw I Q.Skilled reaching impairments from the lateral frontal cortex component of middle cerebral artery stroke:a qualitative and quantitative comparison to focal motor cortex lesions in rats[J].Behav Brain Res,2005,156(1):125-37.

        [13]Emerick A J,Kartje G L.Behavioral recovery and anatomical plasticity in adult rats after cortical lesion and treatment with monoclonal antibody IN-1[J].Behav Brain Res,2004,152(2):315-25.

        [14]Jaskolski F,Mulle C,Manzoni O J.An automated method to quantify and visualize colocalized fluorescent signals[J].J Neurosci Methods,2005,146(1):42-9.

        [15]Liu Z,Li Y,Zhang X,et al.Contralesional axonal remodeling of the corticospinal system in adult rats after stroke and bone marrow stromal cell treatment[J].Stroke,2008,39(9):2571-7.

        [16]Liu Z,Li Y,Zhang L,et al.Subacute intranasal administration of tissue plasminogen activator increases functional recovery and axonal remodeling after stroke in rats[J].Neurobiol Dis,2012,45(2):804-9.

        [17]Carmichael S T.Themes and strategies for studying the biology of stroke recovery in the poststroke epoch[J].Stroke,2008,39(4):1380-8.

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