汪建良 劉 芳 徐小燕 紀(jì) 磊 岑江杰 陳杰

（浙江省化工研究院有限公司，浙江 杭州 310023）

2-嘧啶氧基-N-芳基芐胺類(lèi)化合物是由浙江省化工研究院和中科院上海有機(jī)化學(xué)研究所共同發(fā)現(xiàn)的、具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的農(nóng)藥先導(dǎo)結(jié)構(gòu)。該類(lèi)化合物已獲得中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利ZL 00130735.5[1]，并申報(bào)了 PCT 國(guó)際發(fā)明專(zhuān)利[2]，目前已獲得美國(guó) （US6,800,590 B2）、 加拿大（CA2425984）、 韓國(guó) （KR0511489）、 墨西哥（MX 234202）、 歐 盟 （EP 1327629 B1） 和 日 本 （JP 4052942）發(fā)明專(zhuān)利，具有國(guó)際原創(chuàng)性。自1998年以來(lái)在國(guó)家農(nóng)藥創(chuàng)新項(xiàng)目的資助下，對(duì)此先導(dǎo)結(jié)構(gòu)進(jìn)行系統(tǒng)的優(yōu)化研究，已成功開(kāi)發(fā)了油菜田除草劑丙酯草醚、異丙酯草醚和溴嘧草醚（ZJ0777），以及玉米田除草活性物ZJ2528，水稻田除草活性物ZJ0862，棉花田除草活性物SIOC0426和SIOC0991等。ZJ1835是在對(duì)該先導(dǎo)結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化時(shí)發(fā)現(xiàn)的棉花田除草活性化合物，化學(xué)名稱(chēng)為N-苯基-2-(4,6-二甲氧基-2-嘧啶氧基)-6-氯-芐胺（Ⅰ）。該化合物除草活性較高，殺草譜較廣，施藥方法簡(jiǎn)單且生產(chǎn)成本較低[3]。鑒于對(duì)該先導(dǎo)結(jié)構(gòu)不可預(yù)知的安全性問(wèn)題，本文根據(jù)GB15670-1995《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法》的規(guī)定和要求，對(duì)本公司自主研發(fā)的98%氯胺嘧草醚原藥（開(kāi)發(fā)代號(hào)：ZJ1835）進(jìn)行了急性經(jīng)口、經(jīng)皮、吸入毒性試驗(yàn)以及眼刺激、皮膚刺激試驗(yàn)研究，為該類(lèi)藥的安全使用提供毒理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料

受試物為98%氯胺嘧草醚原藥，白色顆粒，有刺激性氣味，由本公司自主研發(fā)，試驗(yàn)時(shí)根據(jù)需要進(jìn)行粉碎過(guò)篩或用玉米油配制成所需濃度。

1．2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

急性經(jīng)口、經(jīng)皮、吸入毒性試驗(yàn)各選用SD品系清潔級(jí)健康成年大鼠10只，雌雄各半，體重180～220 g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證號(hào)：SCXK<浙>2008-0033）。眼刺激、皮膚刺激試驗(yàn)各選用普通級(jí)健康新西蘭種家兔，體重2～3 kg，雄性。由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證號(hào)：SCXK<浙>2009-0039）。試驗(yàn)前檢疫觀察1周。

1．3 實(shí)驗(yàn)方法

按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB15670-1995《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法》[4]進(jìn)行。

1．3．1 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 采用灌胃方式。按限量法設(shè)染毒劑量為5000 mg/kg·BW。

1．3．2 急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn) 采用皮膚涂藥方式，按限量法設(shè)染毒劑量為2000 mg/kg·BW，敷貼4 h。4 h后用溫水除去殘留受試物。

1．3．3 急性吸入毒性試驗(yàn) 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果按限量法設(shè)染毒劑量為2000 mg/kg·BW，染毒2 h。采用天津合普HOPE-MED8050A/B型吸入染毒系統(tǒng)進(jìn)行全身暴露式動(dòng)式吸入染毒。受試物用CO型氣流粉碎機(jī) （中日合資宜興清新粉體機(jī)械公司）粉碎后，經(jīng)粉塵發(fā)生器送入染毒柜內(nèi)噴射粉塵形成氣溶膠，連接FC-1A型大氣采樣器（北京勞動(dòng)保護(hù)科學(xué)研究所）進(jìn)行采樣，用濾膜質(zhì)量法監(jiān)測(cè)濃度。停止染毒后取出動(dòng)物置新鮮空氣處。

1．3．4 家兔眼刺激試驗(yàn) 粉狀受試物0.1 g倒入左側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，右側(cè)以蒸餾水為正常對(duì)照。

1．3．5 家兔皮膚刺激性試驗(yàn) 剪去脊柱兩側(cè)被毛，皮膚無(wú)損傷。將受試物0.5 g加約0.50 mL玉米油濕潤(rùn)涂布于左側(cè)皮膚去毛區(qū)，右側(cè)以玉米油為對(duì)照，敷貼4 h。4 h后用溫水洗去殘留受試物。

1．3．6 觀察指標(biāo) 動(dòng)物癥狀及死亡數(shù)、眼損傷程度評(píng)分、皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分。

2 結(jié)果

2．1 大鼠急性經(jīng)口和經(jīng)皮毒性試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)期間大鼠精神和身體狀況未見(jiàn)異常，無(wú)死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后解剖未見(jiàn)異常。結(jié)果顯示，雌雄大鼠經(jīng)口LD50>5000 mg/kg，經(jīng)皮LD50>2000 mg/kg。根據(jù)《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法》的標(biāo)準(zhǔn)，受試物的急性經(jīng)口和經(jīng)皮毒性均屬于低毒。

2．2 大鼠急性吸入毒性試驗(yàn)

染毒期間平均濃度為2060±125 mg/m3，濃度監(jiān)測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表1）。動(dòng)物染毒后1 h出現(xiàn)扎堆、活動(dòng)減少及閉眼等癥狀。染毒結(jié)束，動(dòng)物呼吸新鮮空氣后逐漸恢復(fù)正常。動(dòng)物體重在試驗(yàn)期間正常增長(zhǎng)（見(jiàn)表2）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后解剖未見(jiàn)異常。雌雄大鼠急性吸入LC50>2000 mg/kg。根據(jù)農(nóng)藥急性吸入毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判定為低毒。

表1 急性吸入毒性試驗(yàn)氣溶膠濃度監(jiān)測(cè)表

表2 急性吸入毒性試驗(yàn)動(dòng)物體重變化表

2．3 家兔眼刺激試驗(yàn)

給藥1 h后家兔眼結(jié)膜輕微充血伴少量分泌物，虹膜和角膜無(wú)異常。24 h所有家兔恢復(fù)正常。1 h眼刺激積分指數(shù)（I.A.O.I.）最高為4，眼刺激的平均指數(shù)（M.I.O.I.）48 h后為0。根據(jù)農(nóng)藥眼刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)判斷為“無(wú)刺激性”。

2．4 家兔皮膚刺激性試驗(yàn)

家兔背部皮膚試驗(yàn)側(cè)與對(duì)照側(cè)皮膚均未見(jiàn)異常，根據(jù)農(nóng)藥皮膚刺激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判斷為“無(wú)刺激性”。

3 討論

伴隨農(nóng)業(yè)發(fā)展水平的不斷提高，我國(guó)創(chuàng)制新農(nóng)藥品種也越來(lái)越多，農(nóng)藥的安全性問(wèn)題也越為人們所關(guān)注。氯胺嘧草醚是新創(chuàng)制的對(duì)棉田主要雜草防效較高的除草劑，具有較高的市場(chǎng)開(kāi)發(fā)潛力，該化合物的急性毒性研究未見(jiàn)有報(bào)道[3]。本研究顯示其急性經(jīng)口毒性、急性經(jīng)皮毒性、急性吸入毒性均屬低毒，對(duì)眼、皮膚亦無(wú)刺激性，但吸入毒性試驗(yàn)和眼刺激試驗(yàn)表現(xiàn)出輕微癥狀。其結(jié)果表明，氯胺嘧草醚是較為安全的除草劑，在生產(chǎn)和使用過(guò)程中應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)對(duì)眼和鼻的防護(hù)，防止眼睛粘膜和鼻粘膜的接觸。

氯胺嘧草醚是2-嘧啶氧基-N-芳基芐胺類(lèi)化合物。本研究結(jié)果顯示該化合物的急性毒性安全性較高，但由于急性毒性試驗(yàn)只是了解了農(nóng)藥進(jìn)入機(jī)體的途徑、急性中毒癥狀、有無(wú)刺激性、中毒劑量及致死量，而不能說(shuō)明長(zhǎng)期接觸微量農(nóng)藥引起的后果[5,6]。為保護(hù)生產(chǎn)者和施用者的安全，在急性毒性基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)該類(lèi)化合物的遺傳毒性和長(zhǎng)期毒性進(jìn)行研究，加強(qiáng)對(duì)人類(lèi)和環(huán)境的保護(hù)。

[1] 呂龍，吳軍，陳杰，等．2-嘧啶氧基芐基取代苯基胺類(lèi)衍生物：中國(guó)，ZL00130735．5[P]．2003-11-12．

[2] 呂龍，陳杰，吳軍，等．2-嘧啶氧基芐基取代苯基胺類(lèi)衍生物制備方法和應(yīng)用：世界PCT專(zhuān)利，WO 02/34724 A1[P]．2002-05-02．

[3] 徐小燕，臺(tái)文俊，陳杰，等．N-苯基-2-(4,6-二甲氧基-2-嘧啶氧基)-6-氯-芐胺(ZJ1835)的除草活性研究[J]．農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011，13(4)：427-430．

[4]GB15670-1995．農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法[S]．

[5] 王捷，羅紅嘩，宋宏宇．農(nóng)藥工業(yè)與安全評(píng)價(jià)[J]．農(nóng)藥，1999，38(10)：25-26．

[6] 劉政．農(nóng)藥的開(kāi)發(fā)與安全性評(píng)價(jià)[J]．化工勞動(dòng)保護(hù)，1990，11(4)：184-186．