周翔 余楚欽 楊燕 章偉勝

硫酸沙丁胺醇(salbutamol sulfate，SS)是一種選擇性β2-受體激動(dòng)劑，用于治療支氣管哮喘、喘息性支氣管炎、肺氣腫患者的支氣管痙攣，是經(jīng)典治療哮喘病的一線用藥［1，2，3］。哮喘病常在夜間或清晨發(fā)作、加劇，普通制劑服藥不便，依從性較差。本研究將該硫酸沙丁胺醇制成的緩釋制劑，可有效抑制哮喘病的發(fā)生，提高患者用藥的依從性。本實(shí)驗(yàn)是在已有研究工作(正交實(shí)驗(yàn))的基礎(chǔ)上，以釋放度為評價(jià)指標(biāo)，對硫酸沙丁胺醇緩釋微丸處方組成的關(guān)鍵因素進(jìn)一步研究，優(yōu)選出更適于中試生產(chǎn)的處方工藝，為硫酸沙丁胺醇緩釋微丸工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料 SS(常州亞邦制藥有限公司)；硫酸沙丁胺醇對照品(中國藥品生物制品檢定所)；SS對照品(中國藥品生物制品鑒定所)；空白丸芯(杭州高成生物營養(yǎng)技術(shù)有限公司)；乙基纖維素(EC，上海 Colorcon公司)；Eudragit L100、Eudragit S100(德國Rohm公司)；共聚維酮(Plasdone S-630，美國國際特品公司)；奎二酸二丁酯(DBC，美國 Sigma公司)；微粉硅膠(SiO2，德國德固賽公司)；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 STREA-流化床(瑞士NIRO-AEROMATIC)；ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀(天津大學(xué)無線電精密儀器廠)；Ultimate高效液相色譜儀(美國戴安公司)；恒溫恒濕培養(yǎng)箱(金壇市孵化儀器有限公司)；PB-10 Sartorius pH計(jì)(廣州來普達(dá)克化玻儀器有限公司)；BS224S型十萬分之一電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方(1000粒膠囊)

2.1.1 含藥微丸處方 空白丸芯78 g，SS 10 g，SiO22 g，3%Plasdone S-630乙醇溶液103 g。

2.1.2 緩釋包衣液處方 EC 6.3 g，Eudragit L100 0.2 g，Eudragit S100 0.2 g，DBC 1.1 g，Plasdone S-630 q．s，SiO20.1 g，H2O 24.98 g，95% 乙醇溶液 75 g。

2.2 制備工藝

2.2.1 共聚維酮乙醇溶液的配制 將適量的共聚維酮加入攪拌狀態(tài)下的70%乙醇溶液中，不斷攪拌至共聚維酮完全溶解，溶液呈均一澄清狀態(tài)，制成含共聚維酮3%的乙醇溶液，備用。

2.2.2 含藥溶液的配制 在攪拌狀態(tài)下將SS加入共聚維酮乙醇溶液中，使完全溶解，再加入SiO2，繼續(xù)攪拌制成均勻的混合溶液，備用。

2.2.3 緩釋包衣液的配制 用少量水將EC潤濕后，在攪拌狀態(tài)下加入95%乙醇溶液中，待EC溶解后，依次加入Eudragit L100、Eudragit S100、Plasdone S-630、剩余的水、DBC，繼續(xù)攪拌至溶液呈半透明均一狀態(tài)，再加入SiO2，攪拌均勻，備用。

2.2 .4 緩釋微丸的制備 將空白丸芯加入流化床物料槽中，43℃預(yù)熱10 min；噴入備用的含藥溶液，上藥結(jié)束后，物料于43℃繼續(xù)流化15 min；噴入備用的緩釋包衣液進(jìn)行包衣，噴完緩釋包衣液后，物料于43℃繼續(xù)流化15 min，出料。40℃烘箱中固化12 h，檢測，填充于2號(hào)膠囊。流化床技術(shù)參數(shù)為：流速2.0～3.0 g/min、霧化壓力1.5～1.8bar、回風(fēng)壓力4.5bar、進(jìn)風(fēng)溫度40～45℃、進(jìn)風(fēng)壓力3～4bar。

2.3 含量測定方法學(xué)考察

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18柱，4.6 mm ×250 mm，5μm；流動(dòng)相：0.005 mol/L 磷酸二氫銨溶液(pH3.0)-甲醇(85∶15)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：224nm；柱溫：室溫。

2.3.2 對照品溶液配制 精密稱取SS對照品約20 mg，置于100 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液適量，超聲，放冷，稀釋并定容，搖勻。精密量取2 ml置于25 ml量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。

2.3.3 空白輔料溶液配制 取空白緩釋微丸，研細(xì)，稱取適量，置于100 ml量瓶中，其余同“對照品溶液配制”項(xiàng)下操作。

2.3.4 供試品溶液配制 取SS緩釋膠囊10粒的內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于沙丁胺醇1.6 mg)置于100 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液適量，超聲，放冷，稀釋并定容，搖勻。

2.3.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別取空白溶液、對照品溶液、供試品溶液各20 μl，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣，測定。見色譜圖1，結(jié)果表明，輔料在檢測波長處吸收峰的保留時(shí)間與主峰保留時(shí)間不一致，說明輔料不干SS的測定。

圖1 高效液相色譜

2.3.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密稱取SS對照品適量，配制成濃度為 2 μg/ml、4 μg/ml、8 μg/ml、16 μg/ml、24 μg/ml、32 μg/ml、40 μg/ml的溶液，用 0.45 μm 的濾膜濾過，進(jìn)樣 20 μl，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖。以SS濃度對其峰面積進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=0.5379x-0.0359，r2=1，結(jié)果表明藥物在 2～40 μg/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品溶液，按“4.2”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄其峰面積并計(jì)算RSD值，結(jié)果RSD=0.18%。

2.3.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取SS對照品8、10、12 mg各3份，及處方比例量輔料，按“2.3.2”項(xiàng)下方法配制，分別制成高、中、低濃度的溶液各3份，取20 μl進(jìn)樣，記錄色譜，計(jì)算峰面積。結(jié)果，平均回收率為99.36%(RSD=0.29%)。

2.4 釋放度測定方法 取SS緩釋膠囊6粒，按《中國藥典》2010版釋放度測定第2法［4］，以磷酸鹽緩沖液500 ml為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，溫度37℃，依法操作。分別于1 h、4 h和8 h時(shí)取樣5 ml，濾過，并即時(shí)補(bǔ)充釋放介質(zhì)5 ml。精密量取續(xù)濾液20μl注入液相色譜儀，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖。另取SS對照品適量，精密稱定，加釋放介質(zhì)溶解并稀釋，制成每1 ml中約含16μg的溶液，同法測定，并將結(jié)果與0.8299相乘，計(jì)算每粒膠囊在不同時(shí)間點(diǎn)的累積釋放百分率。

2.5 共聚維酮用量對釋放度的影響 按“2.1.2”處方組成(除共聚維酮外)，考察致孔劑共聚維酮在緩釋層中的用量分別占該固體總用量的0.18%，0.22%，0.25%時(shí)，對藥物釋放度的影響。結(jié)果見圖2。

圖2 共聚維酮不同用量藥物的釋放曲線

由圖可見，當(dāng)緩釋層增重為8.55%，共聚維酮用量分別為0.18%、0.22%、0.25%時(shí)，藥物釋放度均符合要求。共聚維酮用量為0.22%時(shí)，釋放度最優(yōu)。

2.6 緩釋層用量對藥物釋放的影響 按“2.1.2”處方組成，共聚維酮占緩釋層中的固體總用量為0.22%時(shí)，考察緩釋層包衣增重分別為6.39%、7.54%、8.55%、9.46%時(shí)，對藥物釋放度的影響。結(jié)果見圖3。

圖3 緩釋層不同用量藥物的釋放曲線

由圖可見，緩釋層用量對藥物的釋放有一定影響，包衣增重為6.39%、7.54%、8.55%、9.46%時(shí)，藥物釋放度均符合要求。緩釋層包衣增重為8.55%時(shí)，最為合適。

2.7 工藝重現(xiàn)性試驗(yàn) 按照最優(yōu)的處方組成(EC 6.3 g、Eudragit L100 0.2 g、Eudragit S100 0.2 g、DBC 1.1 g、Plasdone S-630 0.015 g、SiO20.1 g、H2O 24.98 g、95%乙醇溶液75 g)和流化床包衣工藝參數(shù)制備3批SS緩釋微丸，測定含量和體外釋放度，驗(yàn)證處方工藝的可靠性，結(jié)果均符合要求，見表1。

表1 3批緩釋微丸的累積釋放度(%)

由表1可見，該處方工藝所制制劑具有延緩藥物釋放，其質(zhì)量穩(wěn)定可靠。

2.8 加速穩(wěn)定性試驗(yàn) SS緩釋膠囊用塑料瓶包裝，置于相對濕度為75% ±5%，溫度為40℃ ±2℃條件下，分別于1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月時(shí)考察其外觀、色澤，含量和釋放度的變化。結(jié)果微丸的外觀、色澤不變，其他見表2。

表2 加速穩(wěn)定性試驗(yàn)釋放度測定結(jié)果(%)

由表2可見，硫酸沙丁胺醇緩釋膠囊質(zhì)量穩(wěn)定可靠。

2.9 SS緩釋微丸釋藥行為的擬合 根據(jù)“2.8”項(xiàng)藥物體外釋放度的測定結(jié)果，分別用零級(jí)、一級(jí)、Higuchi方程作曲線擬合，判斷其釋藥機(jī)理，結(jié)果見表3。

表3 釋藥模型的擬合

由表3可見，藥物的釋放行為最符合一級(jí)方程。

3 討論

文獻(xiàn)［5］報(bào)道硫酸沙丁胺醇緩釋微丸的研制，工藝方法復(fù)雜，不易實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。本研究工藝方法簡單、可控，藥物緩釋結(jié)果符合藥典要求，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

原處方使用滑石粉作為抗粘著劑制備含藥微丸，實(shí)驗(yàn)中其使用量為液體量的0.5～3%時(shí)，抗粘效果差，微丸間粘連且流化狀態(tài)異常，嚴(yán)重影響生產(chǎn)效率。通過試驗(yàn)摸索，發(fā)現(xiàn)少量微粉硅膠對本實(shí)驗(yàn)含藥微丸制備能起到非常好的抗粘效果，進(jìn)風(fēng)溫度在40～55℃均可保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。通過加入最佳用量的致孔劑共聚維酮，不僅能調(diào)節(jié)藥物的釋放速率，且能降低制劑釋藥行為對包衣增重的影響。緩釋層包衣增重考察，對生產(chǎn)控制具有實(shí)際指導(dǎo)意義。

硫酸沙丁胺醇緩釋微丸釋藥模型擬合結(jié)果表明，一級(jí)方程能較好的描述其體外釋藥特征。隨時(shí)間變化由多至少非恒速釋放。由于釋藥前期微丸中的藥物濃度大，釋放速度相對較快；隨著藥物的逐漸釋放，濃度逐漸減小，藥物釋放速度也就減慢，因此，藥物的整個(gè)釋放過程表現(xiàn)為一級(jí)釋藥過程。

［1］ 王翠欣，滑千里，劉福利．硫酸沙丁胺醇口腔崩解片的制備及質(zhì)量評價(jià)．中國當(dāng)代醫(yī)藥，2010，17(8)：113-115.

［2］ 米瑩，房志仲，王晶晶，等．硫酸沙丁胺醇口服結(jié)腸定位緩釋片的含量測定．天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，14(4)：460-465.

［3］ 崔平，于曉光，張向榮，等．硫酸沙丁胺醇延遲釋放片的制備與評價(jià)．中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2010，30(2)：139.

［4］ 國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典(二部)．2010年版．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：981.

［5］ 楊翎，畢瑞林，鄒積宏．硫酸沙丁胺醇緩釋微丸的制備．黑龍江醫(yī)藥，2000，13(6)：339-340.