范 虹 萬(wàn) 萍 (云南省第一人民醫(yī)院消化科，云南 昆明 650034)

消化性潰瘍(PU)是臨床上的常見病和多發(fā)病，是胃、十二指腸黏膜的保護(hù)因素和損害因素的關(guān)系失調(diào)所致，是消化科常見的且存在潛在生命危險(xiǎn)的臨床急癥〔1〕。目前PU的治療方式主要采用止血、抗酸、黏膜保護(hù)、抗幽門螺桿菌(HP)感染等治療措施。然后近二十年的臨床研究數(shù)據(jù)顯示，患者再出血的概率達(dá)到了11%，盡管隨著內(nèi)鏡技術(shù)的成熟應(yīng)用，PU患者病死率并未降低，依然維持在6% ～8%〔2〕?，F(xiàn)有研究認(rèn)為，胃、十二指腸潰瘍愈合不良，導(dǎo)致PU反復(fù)性發(fā)作，導(dǎo)致黏膜炎癥、瘢痕、粘連，最終出現(xiàn)大面積出血或其他并發(fā)癥而死亡〔3〕。因此潰瘍面的愈合是PU預(yù)后的一個(gè)重要因素。目前已經(jīng)證實(shí)，脫氧核苷酸在外科創(chuàng)面的應(yīng)用時(shí)，可以通過(guò)促進(jìn)肉芽組織生長(zhǎng)，表皮細(xì)胞的遷移，促進(jìn)局部創(chuàng)傷細(xì)胞蛋白質(zhì)合成，增強(qiáng)細(xì)胞的抗感染能力從而促進(jìn)創(chuàng)面的愈合〔4〕。本研究探討脫氧核苷酸鈉干預(yù)對(duì)PU創(chuàng)面愈合的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 考馬斯亮藍(lán)G250(國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司);REG14-L精密電子天平(美國(guó)BD);TGL-16G型冷凍離心機(jī)和L8-80型低溫超速離心機(jī)(Beckman);Max M5酶標(biāo)儀(Molecular Devices)，BH-2光學(xué)顯微鏡(日本Olympus);ZDJ-1生物組織包埋機(jī)(徠卡);醫(yī)用圖像分析處理系統(tǒng)(華海電子有限公司)。OLYMPUS顯微鏡CX21(日本奧林巴斯);PAF鼠單抗IgG(Santa Cruz);PS2鼠單抗IgG(Santa Cruz);免疫組化SABC染色試劑盒(南京建成);Western印跡化學(xué)發(fā)光試劑;其他試劑如冰乙酸、甘油、無(wú)水乙醇、澳乙錠、溴酚藍(lán)、二甲苯、石蠟、考馬斯亮藍(lán)G250、鹽酸氨基葡萄糖化學(xué)純、乙酞丙酮等均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán);DYYlll型電泳儀(美國(guó)BD);制膠、電泳及轉(zhuǎn)膜儀(Bio-Rad公司)。

1.2 分組及方法 采用改良后的okabe100%冰乙酸涂抹法〔5〕，大鼠禁食12 h后，6%水合氯醛麻醉，劑量為0.4 ml/100 g，麻醉后四肢固定，剪盡劍突至肚臍上的毛，面積約3 cm×4 cm，消毒處理后，沿腹白線打開腹腔約2～3 cm，分離出胃至十二直腸部位，采用玻璃管方式點(diǎn)滴100%冰乙酸于胃小彎處，點(diǎn)滴5處，約0.2 ml/次，持續(xù)60 s，移開玻璃滴管，處理部位顏色蒼白，以0.9%NaCl沖洗后將胃輕輕放入腹腔，縫合腹壁，消毒，并預(yù)防性經(jīng)尾靜脈注入頭孢他啶。術(shù)后均給予飲食、飲水，脫氧核苷酸組靜脈給予200 mg/kg脫氧核苷酸，正常組及模型組給予0.9%Nacl生理鹽水，替普瑞酮組給予替普瑞酮200 mg。給藥7 d后，剖腹取胃，用于各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定，包括潰瘍情況，創(chuàng)面愈合情況，胃黏膜病理及相關(guān)蛋白檢測(cè)，胃部胃黏膜組織及黏液按照常法制備成勻漿，置玻璃試管中，3 500 r/min離心15 min，取上清液儲(chǔ)于－20℃?zhèn)溆?。胃黏膜病理采用HE染色，即4%多聚甲醛固定(16 h)，二甲苯、不同濃度乙醇脫水，石蠟包埋，4 μm切片，蘇木素-伊紅染色。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 采用文獻(xiàn)方法〔5〕評(píng)價(jià)潰瘍指數(shù)(GUI)，潰瘍面積=長(zhǎng)×寬，深度以2 mm分界計(jì)算，分10級(jí)。同時(shí)測(cè)定胃黏膜蛋白、氨基己糖、胃黏膜磷脂含量。同時(shí)評(píng)價(jià)HE染色病理療效。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS8.0軟件分析。計(jì)量資料將采用±s進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，計(jì)數(shù)資料采用構(gòu)成比(%)表示，各組數(shù)據(jù)均采用并行意向性(ITT)分析，并根據(jù)方差是否齊性采用t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠潰瘍情況比較 相比于模型組，采用替普瑞酮及脫氧核苷酸干預(yù)后，大鼠潰瘍指數(shù)、潰瘍個(gè)數(shù)、潰瘍總面積均有顯著減少(P＜0.01)。但替普瑞酮及脫氧核苷酸并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，且假手術(shù)和正常組大鼠均無(wú)潰瘍發(fā)生，見表1。

2.2 各組大鼠黏膜蛋白質(zhì)、氨基己糖和磷脂含量 模型組黏膜蛋白、氨基己糖、磷脂水平均顯著降低，采用替普瑞酮及脫氧核苷酸干預(yù)后，黏膜蛋白質(zhì)水平，氨基己糖，磷脂水平均有明顯升高，脫氧核苷酸組升高更為明顯，(P＜0.05或P＜0.01)，見表2。

2.3 各組大鼠胃黏膜組織HE染色 模型組大鼠胃黏膜毛細(xì)血管潰瘍、出血、局部黏膜細(xì)胞水腫、可見大量中性粒細(xì)胞核密集分布，部分黏膜細(xì)胞凋亡、壞死，核體固縮。替普瑞酮組、脫氧核苷酸組的黏膜潰瘍有不同程度愈合，新生較多血管，血管潰瘍出血得到控制，另外脫氧核苷酸組潰瘍?cè)畋砻嬗胁煌潭鹊男律掀じ采w，有較大量的肉芽組織形成，再生黏膜成熟，修復(fù)較為完全，部分細(xì)胞分布有白苔，炎癥細(xì)胞減少明顯，見圖1。

表1 各組大鼠潰瘍情況比較(n=12)

表2 各組大鼠黏膜蛋白質(zhì)、氨基己糖和磷脂含量(n=12，mg/g)

圖1 各組大鼠胃黏膜HE染色(×400)

3 討論

PU最主要的病理特征為反復(fù)性潰瘍?cè)斐傻某鲅恢梗颊邼兂鲅娣磸?fù)的愈合、潰瘍?cè)斐神：劢M織增生，炎癥浸潤(rùn)，最終可能導(dǎo)致患者慢性貧血甚至出現(xiàn)惡性病變〔6〕。因此，PU是一個(gè)極為重要的過(guò)程，潰瘍的愈合是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，需要黏膜缺失的填充和黏膜下組織結(jié)構(gòu)的重建。脫氧核苷酸是人體細(xì)胞增殖所必需的遺傳物質(zhì)，通過(guò)促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，促進(jìn)潰瘍面的黏膜重建〔7〕。另外已有研究顯示脫氧核苷酸促進(jìn)胃黏膜壁細(xì)胞合成黏膜蛋白、氨基己糖、磷脂，覆蓋胃黏膜表面，減少胃酸性損傷，因而可以促進(jìn)胃黏膜的愈合〔8〕。動(dòng)物研究提示大劑量應(yīng)用脫氧核苷酸，減少潰瘍指數(shù)、潰瘍面積，同時(shí)促進(jìn)黏膜蛋白，氨基己糖和磷脂的合成，因此我們發(fā)現(xiàn)脫氧核苷酸干預(yù)組胃黏膜的愈合較模型組及替普瑞酮組有明顯的改善。

1 Kuzmich S，Harvey CJ，F(xiàn)ascia DT，et al.Perforated pyloroduodenal peptic ulcer and sonography〔J〕.AJR Am J Roentgenol，2012;199(5):587-97.

2 Tang CL，Ye F，Liu W.Eradication of Helicobacter pylori infection reduces the incidence of peptic ulcer disease in patients using nonsteroidal anti-inflammatory drugs:a meta-analysis〔J〕.Helicobacter，2012;17(4):286-96.

3 Aga H，Readhead D，Maccoll G，et al.Fall in peptic ulcer mortality associated with increased consultant input，prompt surgery and use of high dependency care identified through peer-review audit2012〔J〕.BMJ Open，2012;2(1):e000271.

4 Jiang L，Zhang E，Yang Y，et al.Effectiveness of apoptotic factors expressed on the wounds of patients with stage Ⅲ pressure ulcers〔J〕.J Wound Ostomy Continence Nurs，2012;39(4):391-6.

5 Haule EE，Moshi MJ，Nondo RS.A study of antimicrobial activity，acute toxicity and cytoprotective effect of a polyherbal extract in a rat ethanol-HCl gastric ulcer model〔J〕.BMC Res Notes，2012;5(1):546.

6 Suriya C，Kasatpibal N，Kunaviktikul W，et al.Development of a simplified diagnostic indicators scoring system and validation for peptic ulcer perforation in a developing country〔J〕.Clin Exp Gastroenterol，2012;5(1):187-93.

7 何 威，周佩軍，沈周俊.新型的免疫佐劑:CpG寡聚脫氧核苷酸〔J〕.中國(guó)臨床醫(yī)學(xué)，2008;5(13):42-6.

8 田德增，張永選，魏曉華.CpG寡脫氧核苷酸對(duì)1型糖尿病患者外周血Th1/Th2型免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用〔J〕.中國(guó)臨床醫(yī)學(xué)，2010;11(4):22-6.