范 虹 萬 萍 (云南省第一人民醫(yī)院消化科，云南 昆明 650034)

消化性潰瘍(PU)是臨床上的常見病和多發(fā)病，是胃、十二指腸黏膜的保護因素和損害因素的關(guān)系失調(diào)所致，是消化科常見的且存在潛在生命危險的臨床急癥〔1〕。目前PU的治療方式主要采用止血、抗酸、黏膜保護、抗幽門螺桿菌(HP)感染等治療措施。然后近二十年的臨床研究數(shù)據(jù)顯示，患者再出血的概率達到了11%，盡管隨著內(nèi)鏡技術(shù)的成熟應用，PU患者病死率并未降低，依然維持在6% ～8%〔2〕。現(xiàn)有研究認為，胃、十二指腸潰瘍愈合不良，導致PU反復性發(fā)作，導致黏膜炎癥、瘢痕、粘連，最終出現(xiàn)大面積出血或其他并發(fā)癥而死亡〔3〕。因此潰瘍面的愈合是PU預后的一個重要因素。目前已經(jīng)證實，脫氧核苷酸在外科創(chuàng)面的應用時，可以通過促進肉芽組織生長，表皮細胞的遷移，促進局部創(chuàng)傷細胞蛋白質(zhì)合成，增強細胞的抗感染能力從而促進創(chuàng)面的愈合〔4〕。本研究探討脫氧核苷酸鈉干預對PU創(chuàng)面愈合的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 考馬斯亮藍G250(國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司);REG14-L精密電子天平(美國BD);TGL-16G型冷凍離心機和L8-80型低溫超速離心機(Beckman);Max M5酶標儀(Molecular Devices)，BH-2光學顯微鏡(日本Olympus);ZDJ-1生物組織包埋機(徠卡);醫(yī)用圖像分析處理系統(tǒng)(華海電子有限公司)。OLYMPUS顯微鏡CX21(日本奧林巴斯);PAF鼠單抗IgG(Santa Cruz);PS2鼠單抗IgG(Santa Cruz);免疫組化SABC染色試劑盒(南京建成);Western印跡化學發(fā)光試劑;其他試劑如冰乙酸、甘油、無水乙醇、澳乙錠、溴酚藍、二甲苯、石蠟、考馬斯亮藍G250、鹽酸氨基葡萄糖化學純、乙酞丙酮等均購自國藥集團;DYYlll型電泳儀(美國BD);制膠、電泳及轉(zhuǎn)膜儀(Bio-Rad公司)。

1.2 分組及方法 采用改良后的okabe100%冰乙酸涂抹法〔5〕，大鼠禁食12 h后，6%水合氯醛麻醉，劑量為0.4 ml/100 g，麻醉后四肢固定，剪盡劍突至肚臍上的毛，面積約3 cm×4 cm，消毒處理后，沿腹白線打開腹腔約2～3 cm，分離出胃至十二直腸部位，采用玻璃管方式點滴100%冰乙酸于胃小彎處，點滴5處，約0.2 ml/次，持續(xù)60 s，移開玻璃滴管，處理部位顏色蒼白，以0.9%NaCl沖洗后將胃輕輕放入腹腔，縫合腹壁，消毒，并預防性經(jīng)尾靜脈注入頭孢他啶。術(shù)后均給予飲食、飲水，脫氧核苷酸組靜脈給予200 mg/kg脫氧核苷酸，正常組及模型組給予0.9%Nacl生理鹽水，替普瑞酮組給予替普瑞酮200 mg。給藥7 d后，剖腹取胃，用于各項指標的測定，包括潰瘍情況，創(chuàng)面愈合情況，胃黏膜病理及相關(guān)蛋白檢測，胃部胃黏膜組織及黏液按照常法制備成勻漿，置玻璃試管中，3 500 r/min離心15 min，取上清液儲于－20℃?zhèn)溆?。胃黏膜病理采用HE染色，即4%多聚甲醛固定(16 h)，二甲苯、不同濃度乙醇脫水，石蠟包埋，4 μm切片，蘇木素-伊紅染色。

1.3 評價指標 采用文獻方法〔5〕評價潰瘍指數(shù)(GUI)，潰瘍面積=長×寬，深度以2 mm分界計算，分10級。同時測定胃黏膜蛋白、氨基己糖、胃黏膜磷脂含量。同時評價HE染色病理療效。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SAS8.0軟件分析。計量資料將采用±s進行統(tǒng)計描述，計數(shù)資料采用構(gòu)成比(%)表示，各組數(shù)據(jù)均采用并行意向性(ITT)分析，并根據(jù)方差是否齊性采用t檢驗或秩和檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠潰瘍情況比較 相比于模型組，采用替普瑞酮及脫氧核苷酸干預后，大鼠潰瘍指數(shù)、潰瘍個數(shù)、潰瘍總面積均有顯著減少(P＜0.01)。但替普瑞酮及脫氧核苷酸并無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，且假手術(shù)和正常組大鼠均無潰瘍發(fā)生，見表1。

2.2 各組大鼠黏膜蛋白質(zhì)、氨基己糖和磷脂含量 模型組黏膜蛋白、氨基己糖、磷脂水平均顯著降低，采用替普瑞酮及脫氧核苷酸干預后，黏膜蛋白質(zhì)水平，氨基己糖，磷脂水平均有明顯升高，脫氧核苷酸組升高更為明顯，(P＜0.05或P＜0.01)，見表2。

2.3 各組大鼠胃黏膜組織HE染色 模型組大鼠胃黏膜毛細血管潰瘍、出血、局部黏膜細胞水腫、可見大量中性粒細胞核密集分布，部分黏膜細胞凋亡、壞死，核體固縮。替普瑞酮組、脫氧核苷酸組的黏膜潰瘍有不同程度愈合，新生較多血管，血管潰瘍出血得到控制，另外脫氧核苷酸組潰瘍灶表面有不同程度的新生上皮覆蓋，有較大量的肉芽組織形成，再生黏膜成熟，修復較為完全，部分細胞分布有白苔，炎癥細胞減少明顯，見圖1。

表1 各組大鼠潰瘍情況比較(n=12)

表2 各組大鼠黏膜蛋白質(zhì)、氨基己糖和磷脂含量(n=12，mg/g)

圖1 各組大鼠胃黏膜HE染色(×400)

3 討論

PU最主要的病理特征為反復性潰瘍造成的出血不止，患者潰瘍出血面反復的愈合、潰瘍造成瘢痕組織增生，炎癥浸潤，最終可能導致患者慢性貧血甚至出現(xiàn)惡性病變〔6〕。因此，PU是一個極為重要的過程，潰瘍的愈合是一個非常復雜的過程，需要黏膜缺失的填充和黏膜下組織結(jié)構(gòu)的重建。脫氧核苷酸是人體細胞增殖所必需的遺傳物質(zhì)，通過促進成纖維細胞增殖，促進潰瘍面的黏膜重建〔7〕。另外已有研究顯示脫氧核苷酸促進胃黏膜壁細胞合成黏膜蛋白、氨基己糖、磷脂，覆蓋胃黏膜表面，減少胃酸性損傷，因而可以促進胃黏膜的愈合〔8〕。動物研究提示大劑量應用脫氧核苷酸，減少潰瘍指數(shù)、潰瘍面積，同時促進黏膜蛋白，氨基己糖和磷脂的合成，因此我們發(fā)現(xiàn)脫氧核苷酸干預組胃黏膜的愈合較模型組及替普瑞酮組有明顯的改善。

1 Kuzmich S，Harvey CJ，F(xiàn)ascia DT，et al.Perforated pyloroduodenal peptic ulcer and sonography〔J〕.AJR Am J Roentgenol，2012;199(5):587-97.

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3 Aga H，Readhead D，Maccoll G，et al.Fall in peptic ulcer mortality associated with increased consultant input，prompt surgery and use of high dependency care identified through peer-review audit2012〔J〕.BMJ Open，2012;2(1):e000271.

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5 Haule EE，Moshi MJ，Nondo RS.A study of antimicrobial activity，acute toxicity and cytoprotective effect of a polyherbal extract in a rat ethanol-HCl gastric ulcer model〔J〕.BMC Res Notes，2012;5(1):546.

6 Suriya C，Kasatpibal N，Kunaviktikul W，et al.Development of a simplified diagnostic indicators scoring system and validation for peptic ulcer perforation in a developing country〔J〕.Clin Exp Gastroenterol，2012;5(1):187-93.

7 何 威，周佩軍，沈周俊.新型的免疫佐劑:CpG寡聚脫氧核苷酸〔J〕.中國臨床醫(yī)學，2008;5(13):42-6.

8 田德增，張永選，魏曉華.CpG寡脫氧核苷酸對1型糖尿病患者外周血Th1/Th2型免疫應答的調(diào)節(jié)作用〔J〕.中國臨床醫(yī)學，2010;11(4):22-6.