王棟棟，熊健斌（廣西柳州市人民醫(yī)院骨科，廣西 柳州 545001）

骨性關節(jié)炎（OA）是一個多病因、發(fā)病機制復雜的常見病，目前各種OA動物模型制作方法周期長、操作復雜、損傷大[1]。尋找一種理想的造模方法是研究膝OA的關鍵所在。本實驗擬在Hulth模型的基礎上，克服其原來缺點，建立更符合臨床癥狀的兔關節(jié)炎模型為探討關節(jié)炎的發(fā)病機制及骨關節(jié)炎軟骨修復研究提供了科學的研究平臺。

1 資料與方法

1.1 一般資料：新西蘭家兔，雌雄各半，體重1.8～2.2 kg，18只，普通級，由廣西醫(yī)科大學大學實驗動物中心提供。

1.2 藥品和試劑與儀器：HE染液，南京建成；甲醛，天津大茂；無水乙醇，天津大茂；硝酸，天津大茂，其他試劑均為分析純。倒置相差顯微鏡，德國Olympus公司。

1.3 實驗方法：①實驗分組：家兔按體重性別隨機分為實驗組與對照組，實驗組實驗方法制備關節(jié)炎模型，而對照組家兔不做處理。模型制備：家兔麻醉后，使用剃須刀將關節(jié)處處理干凈后，消毒處理，取內(nèi)側髕旁入路，切斷內(nèi)側副韌帶，打開關節(jié)腔，剪斷前后交叉韌帶，同時去除內(nèi)側半月板，手術結束后，止血并縫合傷口。家兔正常飼養(yǎng)于標準家兔飼養(yǎng)籠中，不限制飲食，不固定患肢，可自由活動[2]。②實驗指標的測定：造模10周后，處死家兔，觀察膝關節(jié)積液、滑囊腫脹及軟骨的改變。取造模部位股骨端，10%甲醛固定、10%硝酸脫鈣、石蠟包埋切片，進行HE染色。

2 結果

對照組家兔滑膜、軟骨外觀基本正常，呈藍白色，色澤明亮，無裂紋及軟化，滑液量少透明。實驗組家兔滑膜部分呈結節(jié)樣增生，滑液量少但混濁，軟骨缺損形成，深達骨質，軟骨下骨暴露，骨贅形成。HE染色：對照組關節(jié)軟骨表面光滑，軟骨細胞排列整齊呈柱狀，細胞核清晰，染色均勻，潮線完整，軟骨基質分布勻稱； 實驗組兔膝關節(jié)滑膜細胞輕度增生，下層疏松纖維姐織增生，膠原化，可見少量散在淋巴漿細胞浸潤，部分區(qū)域軟骨細胞核固縮、裂解、壞死，偏于一側，鈣化層軟骨細胞呈簇狀堆積，排列紊亂，潮線多不規(guī)整或完全消失，甚至軟骨下骨質外露、軟骨下骨囊性變。

3 討論

幾十年來國內(nèi)外相繼報道了多個動物模型對應于臨床，OA有原發(fā)性和繼發(fā)性，故從制作方法上可將OA動物模型分為兩大類，其一為誘發(fā)模型，即通過各種操作方法如制動、手術、關節(jié)內(nèi)注藥、關節(jié)內(nèi)植入軟骨碎片或微粒等誘導OA產(chǎn)生；另一類為自發(fā)模型，即不用任何外界干預，動物自發(fā)OA，如C57黑鼠等[3-5]。最經(jīng)典的是傳統(tǒng)Hulth造模法，但該方法仍具有其局限性，主要表現(xiàn)在切除了膝關節(jié)維持靜態(tài)穩(wěn)定的主要韌帶，造成關節(jié)極其不穩(wěn)，手術創(chuàng)傷大，不同術者造模效果差異較大等。

本研究中在經(jīng)典模型的基礎上加以改進，切斷前交叉韌帶、切除內(nèi)側半月板，其優(yōu)點主要表現(xiàn)在，創(chuàng)傷不大，且方便取關節(jié)液，10周模型可見股骨內(nèi)骸和脛骨內(nèi)側平臺軟骨缺失骨質暴露及周圍明顯增生的骨贅，關節(jié)的緩沖作用減少，脛股關節(jié)面應力局部增大，分布不均；切斷前交叉韌帶造成膝關節(jié)失穩(wěn)，形成軟骨退變的起始環(huán)節(jié)，加之長期被迫活動進一步加重了軟骨損傷而形成OA。10周內(nèi)可成功復制出膝不骨關節(jié)炎，其在外觀觀察和病理學均和臨床觀察一致，與病理進展有一定相關性。本研究證實了此種改良方法的可行性，且為利用此動物模型進行骨關節(jié)炎的深入研究打下了基礎。

[1] 歐云生,安 洪.鼠骨關節(jié)炎動物模型建立的現(xiàn)狀[J].中國比較醫(yī)學雜志,2004,14(1):41.

[2] 楊 峰,史宗道.用木瓜蛋白酶建立兔顳頜關節(jié)骨關節(jié)炎模型的研究[J].華西口腔醫(yī)學雜志,2002,20(5):330.

[3] 汪青春,沈培芝,王海彬.骨關節(jié)炎動物模型的建立及選擇[J].中醫(yī)正骨,1998,10(3):39.

[4] 劉伯齡,劉獻祥.骨關節(jié)炎動物模型的建立概況[J].福建中醫(yī)藥,2003,34(4):49.

[5] 聶 林,張學義,陳國瑞.骨關節(jié)炎的實驗模型[J].中華實驗外科雜志,1990,20(1):97.