黃小兵，劉光明，張偉堅

(南方醫(yī)科大學(xué)附屬新會醫(yī)院檢驗科，廣東江門529100)

羅氏全自動生化分析儀自建生化檢測系統(tǒng)的性能驗證及評價

黃小兵，劉光明，張偉堅

(南方醫(yī)科大學(xué)附屬新會醫(yī)院檢驗科，廣東江門529100)

目的驗證及評價本院羅氏Cobas c311全自動生化分析儀自建生化檢測系統(tǒng)的免疫球蛋白G (IgG)項目的分析性能。方法對自建IgG檢測系統(tǒng)的精密度、正確度、分析測量范圍(Analytical measurement range，AMR)、臨床可報告范圍(Clinical reportable range，CRR)、比對實驗進(jìn)行驗證實驗。結(jié)果低值和高值的批內(nèi)變異系數(shù)(Coefficient variation，CV)分別為3.34%和3.57%，日間CV分別為5.27%和4.74%，均少于1/4 CLIA' 88和1/3 CLIA'88水平；相對偏倚為3.32%和-6.34%，少于1/2 CLIA'88水平；分析測量范圍為2.81~31.44 g/L，臨床可報告范圍為2.81~188.64 g/L；與羅氏Cobas c501全自動生化分析儀配套檢測系統(tǒng)比較，相關(guān)系數(shù)r=0.990 1，回歸方程：y=0.95x+0.55。結(jié)論羅氏Cobas c311全自動生化分析儀自建生化檢測系統(tǒng)IgG項目可用于臨床檢測，主要分析性能符合質(zhì)量目標(biāo)要求。

生化檢測系統(tǒng)；免疫球蛋白G；性能驗證

在生化定量分析檢驗中，檢測系統(tǒng)是完成一個檢驗項目所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品和操作程序等的組合，具有完整的溯源性和可比性。國外大多采用配套的檢測系統(tǒng)，而國內(nèi)許多實驗室由于成本的限制，雖然使用進(jìn)口的分析儀器，但換用國產(chǎn)或其他進(jìn)口試劑及校準(zhǔn)品，形成新的自建檢測系統(tǒng)。這時實驗室為了保證檢驗結(jié)果的可靠性，必須對各個項目的分析性能進(jìn)行全面評價。有研究認(rèn)為自建生化檢測系統(tǒng)分析性能可以滿足臨床診療要求，且檢測成本較低[1]。我院使用的羅氏(Roche)公司的COBAS c311全自動生化分析儀上免疫球蛋白G(IgG)項目是自建生化檢測系統(tǒng)。現(xiàn)根據(jù)美國臨床實驗室改進(jìn)法案(CLIA'88)對臨床實驗室質(zhì)量管理和實驗室認(rèn)可的要求，參考美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)相關(guān)文件，對自建生化檢測系統(tǒng)檢測的結(jié)果的可靠性做性能驗證及評價。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑自建檢測系統(tǒng)為羅氏(Roche)公司COBAS c311全自動生化分析儀，所用試劑為西班牙Biosystems公司生產(chǎn)的IgG試劑盒，按照試劑盒說明書設(shè)置儀器參數(shù)，使用羅氏公司的校準(zhǔn)品及質(zhì)控品。比對系統(tǒng)為羅氏Cobas c501全自動生化儀和配套的羅氏公司的IgG試劑盒、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品。

1.2 樣本來源本院住院患者新鮮血清(樣本無溶血、無黃疸、無脂濁)。

1.3 方法

1.3.1 精密度驗證參考CLSI EP15-A文件[2]，選擇羅氏公司多項目特定蛋白質(zhì)控品，低濃度(批號Lot 168330)和高濃度(批號Lot 168410)兩個濃度水平，實驗持續(xù)5 d，每批每個水平重復(fù)測定3次。計算批內(nèi)不精密度、日間不精密度。批內(nèi)不精密度判斷限：1/4 CLIA'88允許總誤差水平(6.25%)；日間不精密度判斷斷限：1/3 CLIA'88允許總誤差水平(8.33%)。

1.3.2 正確度驗證根據(jù)CLSI EP15-A文件使用參考物質(zhì)的正確度方案，以衛(wèi)生部臨檢中心發(fā)放的室間質(zhì)控品作為參考物質(zhì)，對2個不同水平的室間質(zhì)控品在5 d內(nèi)每批進(jìn)行2次重復(fù)，然后計算均值和標(biāo)準(zhǔn)差以及相對偏倚。若相對偏倚在參考物質(zhì)允許的偏倚范圍(1/2CLIA'88，12.5%)內(nèi)，結(jié)果為可接受。

1.3.3 比對實驗參考CLSI EP9-A2文件[3]要求作方法學(xué)對比實驗，選擇48份包括高中低濃度的臨床樣本，每天測定8份樣本，分別在自建檢測系統(tǒng)和配套檢測系統(tǒng)上按1-8再8-1的順序進(jìn)行雙份平行測定，分6個工作日完成。數(shù)據(jù)用統(tǒng)計軟件SPSS19.0進(jìn)行處理。

1.3.4 分析測量范圍驗證(Analytical measurement range，AMR)參考CLSI EP6-A2文件[4]，設(shè)定實驗室線性的允許誤差范圍均為5%，選擇低(L)、高(H)濃度分別為2.81 g/L和31.44 g/L的混合血清，按比例配制成系列濃度的6個樣本：5L、4L+1H、3L+ 2H、2L+3H、1L+4H、5H。在質(zhì)控在控的情況下，每個樣本重復(fù)檢測2次，數(shù)據(jù)通過統(tǒng)計軟件SPSS19.0擬合為一次(Y=b0+b1X)、二次(Y=b0+b1X+b2X2)和三次(Y= b0+blX+b2X2+b3X3)多項式，判斷各項系數(shù)與0之間的差異是否具有統(tǒng)計學(xué)意義(t檢驗)。如果非線性系數(shù)b2和b3與0比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，則認(rèn)為存在線性關(guān)系，否則該組數(shù)據(jù)存在非線性，則要進(jìn)行非線性度的評價。

1.3.5 臨床可報告范圍驗證(Clinical reportable range，CRR)首先進(jìn)行稀釋回收實驗，稀釋回收率= (實測值/預(yù)期值)×100%。選擇一份初檢為31.44 g/L的高濃度樣本，用0.9%NaCl分別作1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7稀釋。參考儀器說明書，回收率在90%~110%結(jié)果為可接受。實驗得到最大稀釋度，結(jié)合分析測量范圍上限來確定臨床可報告范圍。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗證結(jié)果經(jīng)過檢測，低值和高值的批內(nèi)變異系數(shù)分別為3.34%和3.57%，日間變異系數(shù)分別為5.27%和4.74%，均小于1/4 CLLA'88(6.25%)和1/3 CLLA'88允許誤差(8.33%)，見表1。

表1 質(zhì)控品日間及批內(nèi)不精密度

2.2 正確度(偏倚)驗證結(jié)果經(jīng)過檢測，IgG濃度Ⅰ和IgG濃度Ⅱ的平均偏倚均分別為3.32%和-6.34%，均小于1/2 CLLA'88(12.5%)允許誤差，見表2。

表2 測定IgG的偏倚

2.3 比對實驗結(jié)果的相關(guān)性兩儀器檢測結(jié)果呈高度正相關(guān)(r=0.9901，P<0.01)，以自建生化檢測系統(tǒng)結(jié)果為y，配套生化檢測系統(tǒng)結(jié)果為x，行直線回歸分析，得回歸方程：y=0.95x+0.55。

2.4 分析測量范圍驗證結(jié)果選擇IgG的低值和高值分別為2.81 g/L和31.44 g/L的血清樣本做分析測量范圍驗證。經(jīng)計算得IgG的重復(fù)檢測集合方差(SDr)未超過實驗室設(shè)定允許誤差范圍5%，檢測結(jié)果可用于分析測量范圍評價。以預(yù)期值為X軸，實測均值為Y軸，軟件多項式回歸數(shù)據(jù)擬合結(jié)果顯示，b2、b3與0比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，為一次線性，線性方程為y=0.974x+0.288(r=0.999，P<0.05)。分析測量范圍為2.81~31.44 g/L，見圖1。

圖1 IgG分析測量范圍驗證結(jié)果(g/L)

2.5 臨床可報告范圍驗證結(jié)果本項目在90~ 110%的可接受范圍內(nèi)最大稀釋度為1:5，以線性最高濃度31.44 g/L計算，本項目可報告的最高濃度為188.64 g/L，測定結(jié)果見表3。

表3 稀釋可回收實驗結(jié)果

3 討論

檢測系統(tǒng)是指完成一個檢驗項目所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、檢驗程序、保養(yǎng)計劃等的組合[5]。配套的檢測系統(tǒng)一般都有一套較完善的溯源體系，但在國內(nèi)，基于成本的限制，大多實驗室都有或多或少的自建檢測系統(tǒng)。相對于配套檢測系統(tǒng)，自建檢測系統(tǒng)所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、檢驗程序等的不同，測定的結(jié)果可能會出現(xiàn)偏差。由于方法學(xué)、檢測系統(tǒng)的不同，就有可能造成相同檢驗項目不同檢測系統(tǒng)間結(jié)果存在一定的差異，如何保證檢驗結(jié)果具有溯源性與可比性顯得尤其重要[6]。檢測系統(tǒng)或方法的性能可否接受，是決定檢測系統(tǒng)能否用于常規(guī)工作的前提[7]。按照《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力的專用要求》(ISO15189)的要求，申請認(rèn)可的實驗室應(yīng)對設(shè)備、檢測系統(tǒng)或方法的主要分析性能進(jìn)行驗證，證實其能夠達(dá)到臨床檢測所要求的標(biāo)準(zhǔn)[8]。我們依照相關(guān)文件和指南，參考已通過ISO15189實驗室認(rèn)可的實驗室的經(jīng)驗并結(jié)合儀器實際性能，探討并制定了羅氏COBAS c311全自動生化分析儀IgG項目的自建生化檢測系統(tǒng)的性能驗證方案，對該檢測系統(tǒng)進(jìn)行了評價，以期為臨床提供準(zhǔn)確可靠的檢驗結(jié)果。

自建生化檢測系統(tǒng)IgG項目的精密度驗證結(jié)果，低值和高值的批內(nèi)不精密度分別為3.34%和3.57%，日間不精密度分別為5.27%和4.74%，均小于1/4 CLLA'88和1/3 CLLA'88允許誤差，可認(rèn)為該儀器測定IgG的精密度驗證通過。正確度驗證結(jié)果平均偏倚均小于1/2CLLA'88允許誤差，可認(rèn)為該儀器測定IgG的正確度驗證通過，能夠滿足臨床要求，并可進(jìn)行其他方法學(xué)驗證實驗。

分析測量范圍驗證是指患者標(biāo)本不經(jīng)任何預(yù)處理，在此范圍內(nèi)，報告結(jié)果顯示標(biāo)本中確實含有被測物的含量[9]。本實驗結(jié)果顯示，IgG項目的SDr未超過實驗室設(shè)定允許誤差范圍5%，線性評價有意義?；貧w方程顯示，呈一次線性。該項目分析測量范圍在2.81~31.44 g/L，與廠家提供的線性范圍0.03~31.67 g/L略有差異。原因可能為樣本選擇的局限，樣本濃度范圍不夠?qū)?。在與羅氏Cobas c501全自動生化分析儀配套檢測系統(tǒng)做IgG比對實驗結(jié)果顯示，自建生化檢測系統(tǒng)與配套生化檢測系統(tǒng)的IgG檢測結(jié)果呈高度相關(guān)。

在確定臨床可報告范圍時，一定要結(jié)合實際臨床可能出現(xiàn)的濃度，以避免一些錯誤值報告給臨床[10]。在臨床檢測中，當(dāng)被測物濃度(活性)超過檢測系統(tǒng)提供的分析測量范圍時，儀器一般會提示標(biāo)本超出線性范圍，即使有檢測數(shù)據(jù)顯示，也必須按要求將標(biāo)本稀釋到儀器檢測的分析測量范圍內(nèi)重新測定，才能得到真實結(jié)果[11-12]，否則可能造成結(jié)果的不準(zhǔn)確。本研究稀釋度驗證實驗結(jié)果表明，IgG項目的最大稀釋度為1:5(廠家提供最大稀釋度為1:5.5)，回收率為107.8%，符合90%~110%的可接受范圍，因此可以確立臨床可報告范圍為2.81~188.64 g/L。

本研究結(jié)果表明，羅氏COBAS c311全自動生化分析儀IgG項目的自建生化檢測系統(tǒng)的主要分析性能驗證結(jié)果與廠家提供的分析性能基本一致，與配套生化檢測系統(tǒng)結(jié)果比較相關(guān)性良好，符合質(zhì)量目標(biāo)要求，其結(jié)果能滿足臨床診療的需要。

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Performance verification and evaluation of a self-developed biochemical assay system by Roche Cobas automatic biochemistry analyzer.

HUANG Xiao-bing,LIU Guang-ming,ZHANG Wei-jian.Department of Clinical Laboratory,Xinhui Hospital Affiliated to Southern Medical University,Jiangmen 529100,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo verify and evaluate the immunoglobulin G(IgG)testing in a self-developed biochemical assay system by Roche Cobas c311 automatic biochemistry analyzer.MethodsVerification experiments were taken to measure the precision,accuracy,analytical measurement range(AMR),clinical reportable range(CRR),contrast experiment,interference experiment of IgG testing in a self-developed biochemical assay system.ResultsThe low and high values of coefficient variation(CV)of within-run precision were 3.34%and 3.57%,and those of day to day precision were 5.27%and 4.74%,which were all less than the CV provided by the 1/4 CLIA’88 and 1/3 CLIA’88 requirements.Relative bias was 3.32%and-6.34%,less than 1/2 CLIA’88 standard.Analytical measurement range was 2.81~31.44 g/L,and the clinical reportable range was 2.81~188.64 g/L.Comparison with Roche Cobas c501 automatic biochemistry assay system showed r=0.901,y=0.95x+0.55.ConclusionSelf-developed biochemical assay system by Roche Cobas c311 automatic biochemistry analyzer can be used for clinical testing IgG project.The main performances are according with acceptable standards.

Biochemical assay system;Immunoglobulin G;Performance verification

R446.1

A

1003—6350（2013）16—2417—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.16.0996

2013-03-27)

劉光明。E-mail：gdxhhlgm@163.com