鄧清平 呂玉光

1.湖南省長沙市四醫(yī)院，湖南 長沙 410006；2.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154003

蒙藥四味土木香散是臨床中常見的一種藥物，主要由土木香和苦參以及珍珠桿與山柰等藥物精制而成的，臨床上具有清熱解表的效果。但是，在對其進行質(zhì)量控制時，如何采取有效的方法進行測定顯得尤為重要。臨床中采取測定的方法也比較多，常見的采取高效液相色譜法（HPLC）測定苦參堿的含量，但是這種測定方法中被測峰面積比較小，而且存在拖尾和保留時間長等不足[1]。隨著人們對其質(zhì)量控制的不斷研究，有資料采取HPLC法進行測定其中的氧化苦參堿，且具有較好的應(yīng)用效果。因此，本文對這種測定方法進行深入的探討，具體的方法如下：

1 材料與方法

1.1 研究材料

儀器：島津LC-6A液相色譜儀和CR-3A記錄儀以及SPD-6AV檢測器與SIL自動進樣器。

試劑：甲醇作為色譜純，其他的試劑為分析純。氧化苦參堿對照品（由中國藥品生物制品檢定所提供），蒙藥四味土木香散（由內(nèi)蒙古蒙藥股份有限公司提供）。

1.2 方法

本次研究對于測定蒙藥四味土木香散中的氧化苦參堿含量采取HPLC法進行測定，條件如下[2]：色譜柱：Shimpack CLC-ODS 色譜柱（6.0 mm×150 mm，5 μm）；流動相：0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液-甲醇-高氯酸鈉（750∶250∶20）；流速：1.0 mL/min；波長：215 nm；溫度：室溫。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性試驗

通過上述的條件下分析，選取供試品和對照品以及陰性空白樣品溶液均取20 μL。結(jié)果顯示，供試品溶液的色譜被測峰和其他的峰分離較好，而且理論塔板數(shù)均按照氧化苦參堿峰計算＞4000[3]。具體的圖像顯示見圖1。

2.2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

取樣品溶液0.5 g，并采取精密進行稱定，然后將其進行置入錐形瓶中，并進行滴加0.5 mL的濃氨試液，精密加入20 mL的三氯甲烷，并對其質(zhì)量進行稱定，采取超聲進行處理40 min，并放冷，再次稱定其質(zhì)量。然后，加入三氯甲烷補足原來的質(zhì)量，經(jīng)慮過和精密量取后，取續(xù)濾液5.0 mL，并進行蒸干處理，在殘渣中加入無水乙醇溶液進行稀釋并進行搖勻。最后采取微孔膜進行過濾，所得的溶液即為供試品溶液；然后依據(jù)處方的比例進行制備缺苦參陰性樣品溶液，并采取同樣的方法制備陰性對照品溶液。同時，精密稱取氧化苦參堿對照品，并利用甲醇制成0.198 mg/mL的溶液作為對照品溶液[4]。

2.3 線性關(guān)系

本次研究對于線性關(guān)系的考察如下：精密稱取對照品溶液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，并將抽取的溶液置入 25 mL的量瓶之中，加入流動相稀釋到刻度，并搖勻處理。然后按照上述的色譜條件進行測定峰面積，其中，縱坐標(biāo)為峰面積的積分值，橫坐標(biāo)為進樣量[5]。并繪制標(biāo)準(zhǔn)的曲線圖，得出回歸性方程：Y=1118990X+13871，r=0.9999。其中，線性范圍值為 0.2～1.6 μg。

2.4 精密度試驗

首先，精密量取2.0 mL的對照品溶液，并將其置入25.0 mL的量瓶之中，并采取流動相進行稀釋到刻度，進行搖勻，重復(fù)進樣5次，每次進行測定20 μL，得峰面積積分值的RSD=0.3%。然后，采取同樣的方法量取2.0 mL的供試品溶液，并將其置入25.0 mL的量瓶之中，并采取流動相進行稀釋到刻度，進行搖勻，重復(fù)進樣5次，每次進行測定20 μL，得峰面積積分值的RSD=0.8%。

2.5 穩(wěn)定性試驗

稱取同一批的供試品溶液，并且進行分別在2、4、6、8 h時進行進樣1次，而且每次進樣為20 μL，并詳細(xì)記錄峰面積積分值，其結(jié)果顯示，在8 h內(nèi)，氧化苦參堿峰面積無任何的改變，并且其RSD=2.0%。

2.6 重復(fù)性試驗

稱取同一批號的供試品溶液0.5 g，并取5份，同時進行精密稱定，并按照樣品含量的測定方法進行測定，結(jié)果，氧化苦參堿的平均含量值為2.825 mg/g，RSD=1.2%，n=5。

2.7 加樣回收試驗

選取樣品0.5 g，并進行精密稱定，加入3.0 mL的對照品溶液，并且按照供試品溶液的制備方法進行制備，并計算有效回收率情況，具體的結(jié)果見表1。

2.8 樣品測定

精密稱取供試品溶液和對照品溶液均2.0 mL，并將其置入25.0 mL的量瓶之中，并采取流動相進行稀釋到刻度，搖勻，按照外標(biāo)法計算氧化苦參堿的含量。具體的數(shù)據(jù)分析見表2。

3 討論

蒙藥四味土木香散的質(zhì)量控制中，常常采取HPLC法進行測定苦參堿的含量，但是這種測定的方法并不是很理想，在實際的操作中存在被測峰面積比較小、拖尾和保留時間長等不足點，從而使得整個應(yīng)用效果并不理想[6-8]。隨著人們對其測定的不斷研究，采取HPLC法進行氧化苦參堿含量的測定，具有較好的應(yīng)用效果[9-10]。而且通過本次的臨床研究分析，采取HPLC法測定蒙藥四味土木香散中氧化苦參堿的含量具有較好的應(yīng)用效果，而且資料顯示，氧化苦參堿在0.2～1.6 μg的范圍內(nèi)和峰面積的線性關(guān)系良好，而且平均加樣回收率達到了99.6%，RSD=0.5%。因此，采取這種方法可行，具體的分析如下：

表1 蒙藥四味土木香散中氧化苦參堿加樣回收試驗結(jié)果分析（n=6）

表2 樣品的含量測定結(jié)果比較（n=3）

3.1 波長選擇

由于紫外分光的光度計測得的樣品最大吸收波長在220 nm，而本次研究中采取測定氧化苦參堿樣品溶液在220 nm內(nèi)均具有較好的吸收效果。因此，本次研究選取檢測的波長為215 nm，從而有效地提高了試驗的準(zhǔn)確性[11-12]。

3.2 提取條件

本次研究中對于溶液的制備主要依據(jù) 《中國藥典》2010年版苦參藥材含量的測定方法進行制備[13]。文章采取0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液-甲醇-高氯酸鈉（750∶250∶20）這種方法比較方便，而且其重現(xiàn)性也比較好[14]，故選取此條件。

3.3 溶劑選擇

由于本次研究的樣品中含有成膜的物質(zhì)，而且這種物質(zhì)不易溶解于水，而氧化苦參堿比較容易溶于水，因此，本次研究選取了無水乙醇，而且能夠有效地稀釋成較大的體積，并且減小了其體積的變化，從而避免出現(xiàn)誤差[15]。

3.4 處理時間

通過本次的臨床研究分析，而且對不同的超聲處理時間進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲處理40 min后其氧化苦參堿的含量不再變化，而且比較穩(wěn)定[16]。因此，本次研究中選取超聲處理時間為40 min。

綜上所述，臨床中采取HPLC法進行測定蒙藥四味土木香散中氧化苦參堿的含量具有較好的應(yīng)用效果。這種方法比較簡單，而且測定的結(jié)果也比較準(zhǔn)確，重現(xiàn)性和回收率均比較高[17]，是臨床中測定蒙藥四味土木香散中氧化苦參堿的有效方法，值得在臨床中應(yīng)用。

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