金小越王智穎郭世民

維藥阿那其根醇提物及原粉膠囊的急性毒性試驗※

金小越1王智穎1郭世民2

目的測定阿那其根醇提物及原粉膠囊劑對小鼠的急性毒性，評價其安全性，為臨床安全用藥提供依據(jù)。方法采用最大給藥量測定法，將180只小鼠（雌、雄分開）隨機分成三組，每組60只，再按高、中、低三個劑量平行分為兩組，用小鼠灌胃給藥法測定阿那其根醇提物（1g/1ml）、膠囊劑（過200目篩原藥粉）的最大給藥量，連續(xù)觀察14d，研究其安全性。結(jié)果阿那其根醇提物、膠囊劑的毒性都很低。膠囊劑最大給藥量為48g/kg，相當(dāng)成人60kg用量的80倍以上；醇提物最大給藥量為96g/kg，相當(dāng)成人60kg用量的480倍以上。未測得灌胃給藥小鼠半數(shù)致死量LD50。結(jié)論阿那其根無明顯毒性，臨床常用量安全可行。

阿那其根；急性毒性試驗；最大給藥量

阿那其根為菊科植物羅馬除蟲菊的根。羅馬除蟲菊Anacyclus pyrethrum.DC.多年生草本，高15～45cm，多具長柔毛，根粗壯，圓柱形或長倒圓錐形，支根少。分布于北非或南部歐洲，我國新疆亦有分布。其根含墻草堿（Pellitorine）、除蟲菊酯、菊糖[1]。具有生干生熱，祛寒強筋，開通阻滯，祛風(fēng)止痛，燥濕化痰，滋補神經(jīng)等功效；主治濕寒性或黏液質(zhì)性疾病。阿那其根在臨床應(yīng)用多年，主要應(yīng)用于白癜風(fēng)、腫瘤、膝骨關(guān)節(jié)炎等疾病的治療。在維醫(yī)藥臨床治療中抗炎鎮(zhèn)痛作用明顯[2]。本文對阿那其根醇提物、原粉膠囊進行急性毒性試驗研究，旨在為阿那其根安全性做出評估，為其臨床用藥提供參考，也為開展藥效學(xué)等研究提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 試驗動物昆明種小鼠，體質(zhì)量（20±2）g，雌雄各半（購自新疆疾研所動物飼養(yǎng)中心）。小鼠分性別飼養(yǎng)于空調(diào)室內(nèi)，室溫（22±2）℃，濕度（70 ±5）%，小鼠專用料飼喂，自由飲水和攝食，自然光照。試驗前小鼠飼養(yǎng)3d，觀察其健康狀況。選擇健康、營養(yǎng)狀況良好的小鼠進行試驗。

1.2 藥物阿那其根原粉膠囊（自制）：將購置的阿那其根藥材粉碎，并過200目篩，裝入膠囊中（0.27g/粒）。阿那其根的醇提液制備：取阿那其根藥材500g，用4倍量的95%乙醇50℃回流提取1.5h，共2次，提取液過濾濃縮，制成1g：1ml藥液。

1.3 儀器R-200D電子分析天平（德國，Sartorius）、w-201B數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠）、鼠籠（帶飼喂器、飲水器和墊料）、小鼠飼料、酒精棉球、鑷子、剪刀等。

1.4 半數(shù)致死劑量（LD50）的測定預(yù)試驗：選取昆明種小鼠30只，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后，隨機分為三組，即對照組、阿那其根醇提組、原粉膠囊組。禁食不禁水16h后，對照組給予同體積蒸餾水，阿納其根醇提液組、原粉膠囊組分別以最大給藥濃度（0.40g?ml-1），最大給藥體積（0.04ml?g-1）口服一次性給藥。給藥后常規(guī)飼養(yǎng)，連續(xù)觀察7d，結(jié)果表明，小鼠全部存活，未出現(xiàn)任何中毒現(xiàn)象。口服給藥無法測出本品的半數(shù)致死劑量（LD50），故測定最大給藥量或最大耐受量[3]。

1.5 最大給藥量試驗選擇健康且體質(zhì)量符合要求的昆明種小鼠180只，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后，隨機分為三組，即對照組、阿那其根醇提組、原粉膠囊組，每組60只小鼠。禁食不禁水12h后，對照組給予同體積蒸餾水，阿納其根醇提液組、原粉膠囊組分別以最大給藥濃度（0.40g?ml-1），最大給藥體積（0.04ml?g-1）灌胃一次性給藥。給藥容量40ml/kg?bw，24h內(nèi)給藥3次，并將劑量分成高、中、低三個組，每個濃度梯度組平行兩組。間隔期間禁食不禁水。給藥組小鼠灌胃給予 0.4g/ml×3，24h內(nèi)累計給藥48.00g/kg，連續(xù)觀察14d，詳細記錄對照組、醇提取物組、原粉膠囊組動物每天一般狀態(tài)及體質(zhì)量變化、攝食量變化和死亡情況。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)均用（±s）表示，組間比較采用t檢驗。P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 劑量設(shè)計小鼠臨床等效量（按照成人每日用量1.08g/60kg）×70kg×0.0026/0.02kg=0.1638g/kg；以此臨床等效量作為小鼠的給藥低劑量，并以此劑量的8倍、16倍、32倍常用量分別代表低、中、高三個劑量，依次為1.31、2.62、5.24g/kg。阿那其根原粉膠囊、醇提物的總給藥量分別為 14.00g/kg、48.00g/kg。膠囊劑的平均最大給藥量相當(dāng)于臨床用藥量的82倍；醇提物平均最大給藥量相當(dāng)于臨床用藥量的240倍。

2.2 小鼠體質(zhì)量的變化從表1可以看出，醇提物組小鼠體質(zhì)量增量、相對增量都略低于對照組，原粉膠囊組小鼠體質(zhì)量增量、相對增量都略高于對照組。

表1 阿那其根醇提物和膠囊劑對小鼠灌胃最大給藥量試驗結(jié)果(±s)

表1 阿那其根醇提物和膠囊劑對小鼠灌胃最大給藥量試驗結(jié)果(±s)

醇提物 21.23±1.12 29.71±2.32 33.02±3.13 11.79±2.01 0.56±2.12 ＞0.05相對增量(%) P膠囊劑 20.98±0.93 29.46±3.01 34.18±3.25 13.20±2.32 0.63±2.09 ＞0.05對照組 21.11±1.04 30.06±2.99 33.74±3.64 12.63±2.60 0.60±2.34 ＞0.05

2.3 小鼠臨床表現(xiàn)和剖檢變化大劑量給藥當(dāng)天，給藥組（阿那其根原粉膠囊、醇提液）兩組小鼠精神狀態(tài)良好，皮毛未見明顯異常，進食飲水量無異常，體重正常增長。連續(xù)觀察14天，所有小鼠皮毛有光澤，采食、活動均正常，試驗期間無小鼠死亡。試驗結(jié)束時，給藥組和對照組小鼠解剖后肉眼觀察皮下、心、肝、脾、肺、腎和胃腸道等器官無明顯眼觀異常。表明阿那其根原粉、醇提物未引起實質(zhì)性臟器的病理損傷。

3 結(jié)論與討論

許多民族藥物毒性較小，尤其是維藥，大部分是藥食同源，常無法測出LD50，多采用最大給藥量或最大耐受劑量測定試驗動物的耐受量。試驗結(jié)果表明，阿那其根醇提物及膠囊劑以最大給藥濃度、最大給藥體積每日3次灌胃給藥后，小鼠無死亡及異常情況出現(xiàn)。與Kuttan S等[4]報道的阿那其根醇提物的慢性毒性試驗結(jié)果相一致。本次試驗小鼠用量膠囊劑相當(dāng)于成人60kg用量的82倍，醇提物小鼠用量相當(dāng)于成人60kg用量的240倍，可提供臨床應(yīng)用。阿那其根急性毒性試驗還應(yīng)結(jié)合長期毒性試驗及多種檢查結(jié)果綜合分析評價其安全性，此方面的研究正在深入進行。

[1] 劉勇民.新疆維吾爾藥志(下冊)[M].烏魯木齊：新疆人民出版社,2009：434-435.

[2] 帕爾哈提爾?賽買提,玉素甫?買提努爾,熱甫開提?賽吾力丁,等.維藥阿那其根散劑外敷治療膝骨關(guān)節(jié)炎的臨床療效評價研究[J].中國民族醫(yī)藥雜志,2012(9)：1-3.

[3] 王東升,李錦宇,羅超應(yīng),等.白術(shù)提取液急性毒性試驗[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報,2011,20(5)：40-43.

[4] Kuttan S,Ronald D,Venkatesan S. Toxicological evaluation of ethanolic extrac of Anacyclus pyrethrum in albino wistar rats[J]. Asian Pacific Journal of Tropical Disease.Disea,2012,2(6)： 437-441.

R965

A

1673-5846(2013)09-0031-02

1新疆醫(yī)科大學(xué)第六附屬醫(yī)院，新疆烏魯木齊 830002

2云南省中醫(yī)中藥研究院，云南昆明 650223

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金項目（2013211A056）

金小越（1961-），女，副教授，研究方向：藥物分析。