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綠豆癀對肝GSH含量及GSH-Re活性的影響

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目的觀察綠豆癀對正常及潑尼松龍（PSL）所致肝損傷小鼠還原型谷胱甘肽（GSH）含量及谷胱甘肽還原酶（GSH-Re）活性的影響。方法將小鼠隨機分為正常對照組、潑尼松龍組、綠豆癀高、中、低劑量組和綠豆粉組。綠豆癀和綠豆粉干預15d，除正常對照組外，其余各組從干預第8天開始皮下注射PSL 15mg/kg，連續(xù)5d。測定GSH含量及SH-Re活性。結果與正常對照組相比，潑尼松龍組GSH含量明顯降低（P＜0.01）；與潑尼松龍組相比，綠豆癀各劑量組和綠豆粉組GSH含量明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；綠豆癀各劑量組與綠豆粉組比較有明顯差異（P＜0.05或P＜0.01）；綠豆癀高劑量組的GSH-Re活性明顯增加。結論綠豆癀對肝GSH含量GSH-Re活性具有調節(jié)作用。

綠豆癀；潑尼松龍；谷胱甘肽；谷胱甘肽還原酶

綠豆癀主要產于臺灣中南部山區(qū)，主要是將綠豆按照流傳于民間的藥方制成，具有較廣泛的藥理學特性。本實驗研究綠豆癀對正常及潑尼松龍所致肝損傷小鼠GSH含量以及SH-Re活性的影響，以期了解綠豆癀在藥物代謝酶方面的作用，為進一步開發(fā)應用綠豆癀提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物由福建醫(yī)科大學實驗動物中心提供60只雄性、體重在（20±2）g的清潔級、昆明種健康小鼠。

1.1.2 藥品與試劑綠豆癀（批號200620）、綠豆粉（為無基因改良綠豆粉，批號2006101）均由臺灣泰鶴生醫(yī)科技有限公司提供；選取由湖北制藥聯(lián)合有限公司生產的PSL注射液；選擇由南京建成生物工程研究所提供的GSH及GSH-Re測定試劑盒。

1.1.3 儀器選擇由北京鑫科奧商貿有限公司生產的型號為CP124S的電子天平；由SIGMA公司生產的型號為3K18的低溫高速離心機；由上海精密儀器儀表有限公司生產的紫外-可見分光光度計。

1.2 方法

1.2.1 藥物及試劑配制綠豆粉用雙蒸水配制成濃度為0.375g/ml綠豆粉溶液。綠豆癀用雙蒸水配制成濃度分別為0.1500g/ml、0.0750g/ml、0.0375g/ml的高、中、低三個劑量的溶液。

1.2.2 動物分組及給藥方法將60只小鼠隨機分為正常對照組、潑尼松龍組、綠豆粉組和綠豆癀高、中、低劑量組，每組10只，雌雄各半。正常對照組和潑尼松龍組每天用0.5ml飲用水灌胃；綠豆粉組每天用0.5ml綠豆粉液灌胃；綠豆癀高、中、低劑量三組每天用相應濃度綠豆癀液0.5ml灌胃。連續(xù)15d，除正常對照組外，其余各組從灌胃第8天開始每天皮下注射PSL 15mg/kg，連續(xù)5d。

1.2.3 觀測指標與方法小鼠在末次給藥后斷頭處死，取肝臟用Tris-HCl 50mmol/L（PH 7.4）制成25%肝勻漿，差速離心法制備微粒體及線粒體，測定GSH含量及GSH-Re活性。

1.3 統(tǒng)計學分析采用SPSS 19.0 for Windows軟件處理。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

與正常對照組相比，潑尼松龍組GSH含量明顯降低（P＜0.01）；與潑尼松龍組相比，綠豆粉組和綠豆癀各劑量組GSH含量明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；綠豆癀各劑量組與綠豆粉組比較有明顯差異（P＜0.05或P＜0.01）；綠豆癀高劑量組的GSH-Re活性明顯增加。綠豆癀呈一定的劑量效應依賴關系，見表1。

3 討論

臨床已知，地塞米松、潑尼松龍等糖皮質激素類藥物是肝藥酶誘導劑，以往研究表明，超生理劑量糖皮質激素能導致大量超氧陰離子產生，且當其所生成的多種氧自由基超過機體超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷朧甘肽過氧化物酶等抗氧化措施的清除能力時，可引起膜脂質過氧化損傷[1]。

還原型GSH是廣泛存在于細胞內的小分子三肽化合物，具有維持細胞蛋白質結構和功能、抑制細胞凋亡等方面發(fā)揮著重要作用[2]，缺乏或耗竭GSH會促使許多化學物質或環(huán)境因素產生中毒作用或加重其中毒作用，GSH是一種低分子抗氧化劑，可清除機體的氧自由基，主要包括超氧陰離子（?O2-）、羥自由基（?OH）和過氧化氫（H2O2）等，因此，GSH含量多少是衡量機體抗氧化能力的重要因素。谷胱甘肽還原酶（GSH-Re）是機體內清除自由基的重要抗氧化酶之一[3]。隨年齡的增長，抗氧化酶清除自由基的能力逐漸下降，從而引起氧自由基及脂質過氧化物日益增多，導致機體衰老和老年性疾病的發(fā)生[4-5]。

本實驗結果顯示，大劑量潑尼松龍會耗竭肝線粒體GSH而使GSH下降，綠豆癀可對PSL所至小鼠肝線粒體GSH和活性改變具有一定的恢復作用，提示綠豆癀具有明顯的抗氧化活性，能有效清除自由基，保護細胞膜結構與功能的完整，保護機體不受氧化因素損傷，這可能是綠豆癀護肝解毒的作用機制之一。

表1 綠豆癀對PSL誘導的小鼠肝線粒體的GSH、GSH-Re的影響(±s)

表1 綠豆癀對PSL誘導的小鼠肝線粒體的GSH、GSH-Re的影響(±s)

注：與正常組相比，**P＜0.01；與潑尼松龍組相比，△△P＜0.01；與綠豆粉組相比，▲▲P＜0.01，▲P＜0.05

組別nGSH(μmol/g) GSH-Re(nmol/min·mg)正常對照組 102.96±0.11 2.41±0.06 4.83±0.07綠豆癀高劑量組102.74±0.06潑尼松龍組 101.46±0.06**4.81±0.06**綠豆粉組 101.75±0.08▲▲3.62±0.07▲▲4.58±0.09綠豆癀低劑量組101.84±0.07綠豆癀中劑量組102.19±0.114.78±0.06

[1]吳東方,彭仁誘,汪暉.阿魏酸鈉部分減輕氫化潑尼松引起的小鼠肝臟毒性[J].藥學學報,1995,30(11)：801.

[2]Richie JPJr, Skowronski L, Abraham P, et al.Blood glutathioneeconcentrations in a large2scale human study[J].Clin Chem, 1996, 42：64-70.

[3]陳勤.抗衰老研究實驗方法[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社, 1996：436.

[4]崔艷秋,羅鼎真,王曉民.褐藻多糖硫酸酯的抗炎與抗氧化活性研究進展[J].藥學學報,2008,43(92)：1186.

[5]先宏,陳國安,叢建波,等.褐藻硫酸多糖鐵配合物的穩(wěn)定性及其清除自由基作用[J].營養(yǎng)學報,2008,30(5)：491.

R285.5

A

1673-5846(2013)08-0037-02

1臺灣中醫(yī)藥學會，臺灣 60054

2安徽中醫(yī)學院，安徽合肥 230038

3福建中醫(yī)藥大學，福建福州 350108

4廣州中醫(yī)藥大學，廣東廣州 510405

劉向國（1967-），男，博士，副教授，碩士研究生導師，研究方向：中西醫(yī)結合基礎研究。