馬麗敏，賈德興，馮靜，李萍

(1.濰坊醫(yī)學(xué)院;2.濰坊市人民醫(yī)院感染科，山東 濰坊 261041)

原發(fā)性肝癌(primary hepatocellular carcinoma，HCC)是我國常見的惡性腫瘤之一，惡性程度高、侵襲性強(qiáng)、死亡率高，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，近年來發(fā)病率有上升趨勢，但臨床發(fā)現(xiàn)時往往已是晚期，失去最佳治療時機(jī)，因此早發(fā)現(xiàn)、早治療對提高患者生存率具有重要意義，甲胎蛋白(alpha－fetoprotein，AFP)作為HCC 高特異性、高靈敏性指標(biāo)在臨床上占有一席之地，目前在臨床上HCC 的診斷中得到廣泛應(yīng)用，但在檢測早期肝癌或者小肝癌時亦存在一定的假陰性［1］。因此尋找新的腫瘤標(biāo)記物迫在眉睫，近年來研究發(fā)現(xiàn)a－L－巖藻糖苷酶(α－L－fucosidase，AFU)及高爾基體蛋白73 (GP73)在肝癌患者血清中過度表達(dá)，多種研究顯示在AFP 陰性的肝癌患者中活性亦明顯增加，可作為HCC 早期診斷的血清學(xué)指標(biāo)［2－3］。本研究通過檢測血清中AFP、GP73 及AFU 的含量進(jìn)而探討三者聯(lián)合檢測在HCC 的診斷中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 檢測對象 將研究對象共分為4 組:原發(fā)性肝癌組、乙型肝炎肝硬化組、慢性乙型肝炎組及健康對照組，各組對象均來自2012 年1 月至2013 年7 月在濰坊市人民醫(yī)院住院、門診患者及健康查體者，其中原發(fā)性肝癌組48 例，男30 例，女18 例，平均年齡(53.76 ±12.58)歲，乙型肝炎肝硬化組60例，男42 例，女18 例，平均年齡(53.23 ±11.15)歲，慢性乙型肝炎組60 例，男44 例，女16 例，平均(47.34 ±9.87)歲，健康查體組60 例，男33例，女27 例，平均(52.53±11.67)歲。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) HCC 診斷符合2001 年9 月第8 屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］，慢性乙型肝炎和肝硬化的診斷參照2001 年全國肝病學(xué)會指定的《病毒性肝炎防治方案》和2011 年中華醫(yī)學(xué)會、中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會共同討論修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》。

1.3 檢測方法

1.3.1 所有研究對象均抽取清晨空腹血3 mL 置于生化管中，統(tǒng)一離心(3000 r/min，離心半徑15 cm)分離血清，并于當(dāng)天檢測。

1.3.2 試劑與方法 AFP、GP73 及AFU 均采用酶聯(lián)免疫分析(ELISA)法進(jìn)行檢測，三者試劑盒分別由上海科華生物工程股份有限公司、北京熱景生物技術(shù)有限公司提供、武漢貝茵萊生物有限公司提供。

1.3.3 判定標(biāo)準(zhǔn) AFP ＞20 μg/L，GP73 ＞150 ng/mL，AFU ＞24 U/L 為陽性。

2 結(jié) 果

2.1 各組檢測對象血清中AFP、GP73、AFU 檢測結(jié)果，見表1。HCC 組三項指標(biāo)均明顯高于后3組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。

表1 各組檢測對象血清中AFP、GP73、AFU 檢測結(jié)果()

2.2 各組檢測對象AFP、GP73 及AFU 陽性率及三者聯(lián)合檢測陽性率 各指標(biāo)在HCC 組陽性率均明顯高于肝硬化組、肝炎組及健康查體組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析P ＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。在HCC 組三項指標(biāo)單獨檢測GP73 陽性率最高，但聯(lián)合3 種檢測指標(biāo)對HCC 的陽性率可達(dá)95.83%，明顯高于任一指標(biāo)單獨檢測，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析P ＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 各組血清AFP、GP73、AFU 陽性率及三者聯(lián)合陽性率比較

3 討 論

HCC 是我國多發(fā)惡性腫瘤，目前為止具體發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，多認(rèn)為其發(fā)生發(fā)展過程相當(dāng)復(fù)雜，包括致癌基因激活、抑癌基因失活等多個步驟［5］，早期多無臨床表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)時多已是中晚期從而失去最佳治療時機(jī)，因此早發(fā)現(xiàn)、早診斷并及早針對性治療可有效改善患者生活質(zhì)量并提高生存率。

AFP 作為一種糖原蛋白，在胚胎時期由肝臟實質(zhì)細(xì)胞和卵黃囊細(xì)胞合成，目前已作為原發(fā)性肝癌公認(rèn)的最重要的血清指標(biāo)，在該病的篩查、臨床診斷、判斷療效及復(fù)發(fā)預(yù)測等環(huán)節(jié)中已得到廣泛應(yīng)用［6］。但AFP 對HCC 的靈敏性只有60%～70%，并不能達(dá)到預(yù)想的理想狀態(tài)，而且在肝癌的早期尤其是小肝癌AFP 存在一定程度的假陰性，而且肝細(xì)胞在遭到損害再生過程中也會引起血清中AFP的升高［7］，在本研究中AFP的陽性率僅為64.58%。彩超、CT 及MR 檢測對肝癌的診斷有較好的臨床價值但均存在各自的不足，因此臨床工作中需繼續(xù)尋找高靈敏度和高特異性的肝癌指標(biāo)以提高HCC 檢出率。

GP73 是近年來發(fā)現(xiàn)的一種較新的血清學(xué)指標(biāo)，定位于人染色體的9q 21.33，是一種跨膜蛋白，位于細(xì)胞高爾基體上。越來越多的研究證明，GP73的表達(dá)與HCC 的發(fā)生有密切關(guān)系，其敏感性和特異性均超過了AFP［8］，毛一雷［9］等首先采用Western blotting 測定HCC 患者與良性肝病患者及健康人的血清GP73 含量，提示HCC 患者血清GP73 水平顯著升高，認(rèn)為GP73 可成為臨床上比AFP 更有效的肝癌標(biāo)志物，這一結(jié)論在Hu［10］、Sun［11］等的研究中也得到證實。在本研究中GP73 在HCC 組的陽性率達(dá)83.33%，明顯高于AFP 陽性率。另外，眾多研究提示GP73 的表達(dá)與腫瘤大小、測試對象的年齡等因素?zé)o明顯相關(guān)，雖在肝炎、肝硬化中也均有不同程度升高，但在肝癌時出現(xiàn)過表達(dá)，均證實其對肝癌的診斷有明確的診斷價值［12－13］。

AFU 是一種溶酶體酸性水解酶［14］，在哺乳動物的細(xì)胞、體液中廣泛存在，肝腎組織中活性尤高，參與各種含巖藻糖基的各種糖脂、糖蛋白等生物活性大分子的水解代謝是其主要生物活性。近年來發(fā)現(xiàn)HCC 患者血清中AFU 明顯升高，但對此現(xiàn)象的機(jī)制尚不完全清楚，但研究結(jié)論基本一致，即AFU 可作為HCC 的預(yù)測指標(biāo)［15］，尤其在AFP 檢測陰性和小細(xì)胞肝癌患者的診斷價值更大，本次研究由于時間等條件限制關(guān)于小肝癌暫未展開特殊分析，但在48 例原發(fā)性肝癌患者中AFU 的陽性率達(dá)75%，高于AFP，提示AFU 在HCC 的臨床診斷中有一定意義。

本次研究中，HCC 組AFP、GP73、AFU 靈敏度分別為65.96%、81.63%、73.47%，陽性率分別為64.58%、83.33%、75% 而三者聯(lián)合檢測原發(fā)性肝癌的陽性率可達(dá)95.85%，與既往文獻(xiàn)報道基本一致［16－18］，因此AFP 聯(lián)合AFU、GP73 共同檢測可提高HCC 的陽性檢出率，減少漏診，從而在HCC 的早期診斷中發(fā)揮重要臨床價值。

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