鄒偉,劉思妤,韓海偉,蔣大偉

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百會透曲鬢對腦出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的影響

鄒偉1,劉思妤2,韓海偉2,蔣大偉2

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院,哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),哈爾濱 150040)

通過觀察百會透刺曲鬢針刺法對腦出血急性期模型大鼠血清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)的動態(tài)變化的影響,探討頭穴透刺治療腦出血可能的作用機(jī)制。選取60只健康雄性Wistar大鼠,將其中54只隨機(jī)分為模型組、模型＋針刺組(針刺組)、模型＋茴拉西坦組(西藥組)3組。每組再分為出血后1 d、3 d和7 d3個時間點(diǎn),每個時間點(diǎn)隨機(jī)分配6只大鼠,制備腦出血(ICH)大鼠模型,剩余6只大鼠作為備用。采取酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清中VEGF和ICAM-1水平。針刺組與模型組相比,大鼠血清內(nèi)VEGF在3 d、7 d均有顯著上調(diào)(均＜0.05)。針刺組與西藥組相比,出血后1 d,西藥組對大鼠血清內(nèi)VEGF上調(diào)顯著大于針刺組(＜0.05);出血后7 d,針刺組對大鼠血清內(nèi)VEGF上調(diào)顯著大于西藥組(＜0.05)。針刺組與模型組相比,大鼠血清內(nèi)ICAM-1在不同時間點(diǎn)均有顯著下調(diào)(＜0.05)。針刺組在出血后3 d、7 dICAM-1較西藥組有顯著下調(diào)(＜0.05)。百會透曲鬢針刺法可以調(diào)整腦出血大鼠血清中VEGF、ICAM-1的含量,是針刺百會透刺曲鬢治療腦出血的可能機(jī)理之一。

針刺療法;腦出血;穴,百會;穴,曲鬢;腦出血;血管內(nèi)皮生長因子;細(xì)胞間黏附分子-1;大鼠

腦出血(ICH)指原發(fā)性非外傷性腦實(shí)質(zhì)內(nèi)出血,發(fā)病率約為每年60～80/10萬,在我國約占全部腦卒中的20%～30%[1],是腦血管病中病情較重、發(fā)病較急、變化多端的疾病,病死率與致殘率均較高。因此,尋找有效的治療方法顯得格外重要。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種具有肝素活性的生長因子,可以特異性地促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖,參與血管生成并提高血管通透性,是對血管新生有特異作用的生長因子。細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)是一種介導(dǎo)細(xì)胞相互黏附的膜表面糖蛋白,是一種促炎因子,可導(dǎo)致血管堵塞及損傷,在正常狀態(tài)下僅有低水平表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)采用自體血注入法制備腦出血大鼠模型,以針刺百會透曲鬢為干預(yù)方法,觀察針刺后腦出血急性期大鼠血清中VEGF、ICAM-1含量的變化規(guī)律,從腦出血區(qū)腦血管修復(fù)與損傷的角度,探討百會透曲鬢治療腦出血的作用機(jī)制,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物與分組

健康清潔級雄性Wistar大鼠60只,體重為(350±20)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)l星期。造模前禁食12 h,禁水6 h。將其中54只隨機(jī)分為模型組、針刺組、西藥組3組。每組再分為1 d、3 d和7 d3個時間點(diǎn),每個時間點(diǎn)隨機(jī)分配6只大鼠,制備ICH大鼠模型,剩余6只大鼠備用。

1.2 腦出血模型的制備

參照Rosenberg等[2]報(bào)道的方法制作ICH大鼠模型,將大鼠用10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔注射麻醉,俯臥位固定于立體定位儀上,取頭皮正中,備皮消毒,正中切口,骨膜剝離器剝離骨膜,暴露前囟及冠狀縫,取前內(nèi)點(diǎn)旁開3.5 mm,后O.2 mm定點(diǎn),用牙科鉆鉆開直徑為1.0 mm的圓孔,深達(dá)硬腦膜表面,鼠尾乙醇消毒,距尾端3 cm處剪斷鼠尾,用微量注射器取血50mL,將微量注射器固定于立體定位儀上,沿鉆孔垂直進(jìn)針約6 mm,將未肝素化的自體血50mL以25mL/min速度推進(jìn)尾殼核,留針約2 min,緩慢出針。留針期間乙醇棉球包扎鼠尾斷端傷口,術(shù)后局部噴灑慶大霉素,用牙科水泥封閉顱骨傷口,縫合頭皮,局部皮膚采用碘酚消毒,防止局部感染影響指標(biāo)觀察。

1.3 篩選成功模型的方法

大鼠造模完成待大鼠清醒后,采用Berderson評分法[3]篩選成功模型動物,即輕抓大鼠尾巴,提起高于桌面10 cm,正常大鼠前爪伸直。0分為無神經(jīng)功能缺損;1分為腦部病變對側(cè)腕關(guān)節(jié)、肘關(guān)節(jié)屈曲,肩內(nèi)收屈曲;2分為上述體征＋向麻痹側(cè)推阻力下降;3分為活動時向麻痹側(cè)打圈(呈追尾狀)。以1～3分為準(zhǔn),將不符合者剔除,且增補(bǔ)相應(yīng)數(shù)量大鼠。

1.4 實(shí)驗(yàn)動物干預(yù)方法

1.4.1 模型組

于ICH造模后,給予類西藥組生理鹽水1 mL灌胃,每日3次。此外,類針刺組相同捆綁,每日30 min。

1.4.2 針刺組

于ICH造模后,大鼠捆綁固定。采用0.35 mm×25 mm毫針針刺患側(cè)百會透曲鬢穴,取穴方法參照華興邦等[4]制定的大鼠穴位圖譜,進(jìn)針0.8寸,留針30 min,期間捻轉(zhuǎn)3次,每次5 min,要求以每分鐘200轉(zhuǎn)的速度捻針。針刺患側(cè)百會透曲鬢穴,每次30 min,每日1次。此外,給予類西藥組生理鹽水1 mL灌胃,每日3次。

1.4.3 西藥組

于ICH造模后,給予類針刺組相同捆綁每日30 min,并給予茴拉西坦稀釋液1 mL灌胃(按人:大鼠體重為200:1配置)治療,每日3次。

1.5 標(biāo)本的采集

各腦出血組均于發(fā)病后1 d、3 d、7 d抽取大鼠在相應(yīng)時相點(diǎn)過量水合氯醛麻醉,將大鼠仰臥固定在固定板上,剪去心前區(qū)部位的被毛,用碘酒、乙醇消毒皮膚,切開動物胸部,將注射器直接刺入心臟抽吸血液。取血至離心管后,將離心管室溫靜置1 h,后將其置于4℃冷藏過夜。于次日將離心管取出,于4℃、5000 r/min冷凍離心10 min后將上清液吸至新的離心管。

1.6 指標(biāo)測定

采取酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定VEGF和ICAM-1水平。應(yīng)用固相夾心法測定標(biāo)本中VEGF和ICAM-1水平。先將VEGF和ICAM-1和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記的HRP。在經(jīng)過溫育和洗滌,去除結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物AB,與酶結(jié)合物同時作用后產(chǎn)生顏色,顏色的深淺和樣品中的VEGF和ICAM-1的濃度成正比例關(guān)系。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。所有數(shù)據(jù)采用(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示,各組組間差異采用兩因素方差分析,兩兩比較采用檢驗(yàn)。以＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1 兩組不同時間點(diǎn)血清VEGF及ICAM-1比較 (±s)