陳 焱 許紅苗 俞誠波 林 晡 尹向鵬

溫州醫(yī)學(xué)院附屬溫嶺市醫(yī)院口腔科 溫嶺 317500

慢性牙周炎患者基礎(chǔ)治療前后齦溝液上皮中性粒細(xì)胞活化肽78和RANTES的變化

陳 焱 許紅苗 俞誠波 林 晡 尹向鵬

溫州醫(yī)學(xué)院附屬溫嶺市醫(yī)院口腔科 溫嶺 317500

牙周炎 趨化因子 齦溝液 上皮中性粒細(xì)胞活化肽78 正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子慢性牙周炎是一種宿主對細(xì)菌反應(yīng)和骨溶解性病損的慢性炎癥性疾病[1]，發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，至今尚未完全清楚。目前已知細(xì)胞因子及其網(wǎng)絡(luò)在牙周炎的先天性或獲得性免疫中起了一定作用[2]，其嚴(yán)重度與TNF-α相關(guān)[3]，其次還與T細(xì)胞免疫、吸煙等有關(guān)[4-5]。最近發(fā)現(xiàn)，趨化因子及其受體可能在此機(jī)制中起了重要的作用，介導(dǎo)了白細(xì)胞在牙周組織的浸潤[6]。本研究通過觀察慢性牙周炎患者齦溝液中趨化因子上皮中性粒細(xì)胞活化肽78（（epithelial neutro?phil activating protein-78，ENA-78））和正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子（regulated upon activation normal T cell expressed and secreted factor，RANTES）的表達(dá)，探討趨化因子在慢性牙周炎發(fā)病機(jī)制中的作用，為臨床治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 31例均來自本院2011年8月—

2012年2月之間就診的慢性牙周炎患者，均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男21例，女10例，年齡36～86歲，平均（61.1±11.2）歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：全身情況良好；口內(nèi)余牙數(shù)＞15個(gè)，至少半年內(nèi)未接受任何治療，不吸煙。X

線顯示多個(gè)位點(diǎn)牙槽骨吸收超過根長的1/3，婦女未妊娠，過去3個(gè)月內(nèi)無抗生素、非甾體類抗炎藥及免疫抑制劑應(yīng)用史。至少有1個(gè)牙周袋探針深度≥5mm作為研究牙。

1.2 方 法 所有患者均行牙周基礎(chǔ)治療，包括衛(wèi)生宣教、齦上及齦下潔治、根面平整。分別于牙周基礎(chǔ)治療前、治療4周后用濾紙條法收集齦溝液。標(biāo)本采集方法：清水漱口，研究牙以棉卷隔濕，吹干牙齦并擦干牙面，將2mm×20mm無菌濾紙條輕輕插入齦溝或牙周袋內(nèi)，遇阻力即止，30s后取出（如被血污染則棄除重?。?，10min后再次取樣。將兩條濾紙條作為1個(gè)標(biāo)本，稱重，按比重為1換算成體積，置于同一Eppendorf（EP）管中，-70℃冰箱保存，集中待檢[7]。

1.3 ENA-78和RANTES蛋白檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測ENA-78和RANTES蛋白濃度[8]。人ENA-78（CXCL5）和RANTESELISA試劑盒購自美國R&D公司。取出標(biāo)本和試劑盒平衡至室溫，每個(gè)樣本加入100μL PBS液，5000r/min離心5min，取上清液，檢測方法按照試劑盒所附說明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。采用配對t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

慢性牙周炎患者治療后齦溝液中ENA-78和RANTES蛋白濃度顯著低于治療前（P＜0.01），見表1。

表1 ENA-78和RANTES蛋白濃度（±s）pg/mL

表1 ENA-78和RANTES蛋白濃度（±s）pg/mL

注：與治療前比較，*P＜0.01

組 別n/例ENA-78 RANTES治療前治療后31 31 102.29±42.25 57.52±20.17* 62.81±13.95 46.16±12.59*

3 討 論

牙周炎是牙周菌斑中的微生物所引起的牙周支持組織的慢性感染性疾病，是一個(gè)炎癥發(fā)展的過程，導(dǎo)致牙周組織的炎癥、牙周袋的形成、進(jìn)行性附著物喪失和牙槽骨吸收。齦溝液中含有大量血清蛋白、炎癥因子、微生物代謝產(chǎn)物和酶[9]。其中細(xì)胞內(nèi)毒素對引起全身癥狀和局部炎癥起了重要的作用，引起炎癥因子TNF-α、INF-γ、IL1-β、IL-2、IL-6、IL-10、GMCSF和MIP1-α等升高，進(jìn)一步加重牙周炎的炎癥反應(yīng)[10]。在唾液中發(fā)現(xiàn)，IL-1β、MMP-8、OPG和MIP-1α濃度急性期升高，恢復(fù)期下降，認(rèn)為它們可以作為評價(jià)慢性牙周炎的嚴(yán)重程度[11]。在炎癥因子等的作用下，外周血中的白細(xì)胞向牙周組織浸潤，白細(xì)胞在宿主對齦下的微生物群反應(yīng)中起著決定性的作用。

趨化因子分為4類：CXC類、CC類、CX3C類及C類。CXC類趨化因子包括IL-8、ENA-78等，對中性粒細(xì)胞有強(qiáng)烈的趨化和激活作用。目前認(rèn)為IL-8參與了慢性牙周炎的炎癥過程，與牙齦部的中性粒細(xì)胞集聚有關(guān)[12]。有研究發(fā)現(xiàn)，牙周炎患者血清IL-6和ENA-78的濃度顯著性高于健康對照組，且吸煙組中ENA-78的濃度高于非吸煙組，認(rèn)為它與牙周炎的炎癥機(jī)制有關(guān)[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，慢性牙周炎治療前ENA-78蛋白濃度高于治療后，提示它可能與慢性牙周炎的炎癥相關(guān)。

RANTES是趨化性細(xì)胞因子CC亞族成員（CCL5），由T細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和血小板等分泌，具有趨化單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等多種白細(xì)胞的功能，這些性質(zhì)使RANTES在免疫調(diào)節(jié)功能及自身免疫紊亂和炎性過程中有重要作用；RANTES還具有介導(dǎo)激活白細(xì)胞、影響炎癥性疾病的轉(zhuǎn)歸及調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和分化作用。RANTES有選擇地吸引和活化巨嗜細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的趨化作用。慢性牙周炎組齦溝液中RANTES濃度高于健康人，牙周袋探針深度＜3mm組其蛋白濃度高于＞6mm組，顯示出RANTES參與了牙周炎的致病和進(jìn)展[14]。相似研究也發(fā)現(xiàn)，慢性牙周炎組齦溝液中RANTES濃度高于健康人，但在伴有吸煙的患者中其濃度低于不伴有吸煙組，認(rèn)為吸煙可能抑制了機(jī)體免疫，易致牙周炎的發(fā)生[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，慢性牙周炎治療前RANTES蛋白濃度高于恢復(fù)期，提示它也可能與慢性牙周炎的炎癥有一定的相關(guān)性。

牙周基礎(chǔ)治療作為治療牙周炎的重要手段，主要目的是通過牙周常規(guī)治療控制和去除牙周炎癥和咬合性致病因素，獲得良好的菌斑控制，使絕大多數(shù)患者炎癥情況得到改善。本研究發(fā)現(xiàn)慢性牙周炎經(jīng)治療后，齦溝液中的趨化因子水平也相應(yīng)下降，提示其在評價(jià)病情的嚴(yán)重度中有一定作用。

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2012-06-07